安徽省自然科学基金(090413271X)
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
- 相关作者：汪存利姜宏孙静波宋小敏黄静更多>>
- 相关机构：解放军第105医院解放军105医院合肥市第二人民医院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金南京军区医学科技创新课题南京军区科技创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 表皮生长因子和干细胞因子对小鼠生精细胞增殖与分化的作用被引量：1
- 2014年
- 目的：观察表皮生长因子（EGF）和干细胞因子（SCF）体外促小鼠生精细胞增殖、分化的效应。方法：对7~8日龄雄性昆明小鼠生精细胞进行混合细胞体外培养,在培养液中分别添加不同浓度（5、10、20、40、100 ng/ml）的EGF和SCF,并进行EGF和SCF的交互实验,观察生精细胞的存活率和形态学变化,并对粗线期精母细胞特异性磷蛋白基因（P19）、单倍体精子细胞特异性转化蛋白基因（TP1）及染色体倍性进行检测。结果：加入EGF或SCF 2-4 d,各组均可见不同程度的细胞增殖,细胞呈团或族状,以20 ng/ml EGF组和40 ng/ml SCF组最为明显;培养第7天,单一添加20 ng/ml EGF或40 ng/ml SCF组生精细胞数和存活率显著高于与其它各组（P〈0.05）,且40 ng/ml SCF组P19/TP1基因表达显著低于其它各组,单倍体细胞率显著高于其它各组（P〈0.05）。EGF与SCF配伍时,可显著增加体外培养后生精细胞数（P〈0.05）。结论：在混合生精细胞体外培养体系中,添加一定浓度的EGF和SCF可显著提高生精细胞数和存活率,而且SCF可提高单倍体精子的形成率;两者交互实验时,对细胞增殖有一定的叠加效应。
- 汪存利姜宏孙静波
- 关键词：生精细胞表皮生长因子干细胞因子体外培养RT-PCR流式细胞术
- 单倍体精子细胞卵胞浆内注射研究进展
- 2012年
- 通过显微注射技术将单倍体精子细胞注射入卵母细胞,如圆形精子细胞注射技术(ROSI)和长形精子细胞注射技术(ELSI),可使非阻塞性无精子症患者获得具有父方遗传物质的后代。单倍体精子细胞可通过精液、睾丸组织活检或生精细胞体外培养获取,但其受精率和妊娠率并不理想。对ROSI/ELSI技术的发展按操作系统、精子细胞注射方式和激活方式、临床应用以及存在的问题进行文献综述。
- 宋小敏姜宏
- 关键词：无精子症精细胞精原细胞
- 化学激活在小鼠圆形精子细胞体外受精中的应用被引量：3
- 2014年
- 目的:通过对生精细胞体外培养所获圆形精子细胞显微注射(ROSI)后的小鼠卵母细胞进行单一和联合化学激活,寻找小鼠圆形精子细胞体外受精的最佳激活方案。方法:采用不同浓度的乙醇(EH)、离子霉素(Ion)、钙离子载体A23187(CIA)、氯化锶(SrCl2)、6-二甲基苯胺嘌呤(6-DMAP)及放线菌酮(CHX)对ROSI后的卵母细胞进行不同作用时间的激活,并根据不同的激活途径,联合两种最佳激活浓度和时间的激活剂对ROSI后的卵母细胞行联合激活,以受精率、卵裂率和桑囊胚形成率为观察指标,比较单一及联合方案对卵母细胞的激活效果。结果:①单一激活时,各激活剂的最佳方案分别为7%EH作用6 min,5μmol/L CIA作用5 min,5μmol/L Ion作用5 min,2 mmol/L 6-DMAP作用2 h,10 mmol/L SrCl2作用1.5 h,10μg/ml CHX作用1.5 h,其中10 mmol/L SrCl2作用1.5 h桑囊胚率最高,显著优于CHX方案(P<0.05),但与其它各组无显著性差异;②EH+6-DMAP组桑囊胚率(29.63%)显著高于其它联合激活组以及除SrCl2以外所有单一激活方案(P<0.05),且正常受精率、卵裂率及桑囊胚率均高于SrCl2组,但无显著性差异。结论:单一激活方案中10 mmol/L SrCl2作用1.5 h,联合方案中7%EH作用6 min+2 mmol/L 6-DMAP作用2 h对体外培养所获圆形精子细胞ROSI后的卵母细胞激活效果最佳。EH+6-DMAP的联合激活方案优于单一激活。
- 黄静姜宏汪存利宋小敏
- 关键词：化学激活卵母细胞体外受精显微注射小鼠
- 体外培养生精细胞的显微授精研究
- 2014年
- 卵胞浆内单精子显微注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）的临床应用为重度少、弱、畸形精子症和梗阻性无精子症的男性患者提供了一个新的、有效的治疗途径.但生精功能受碍的无精子症患者由于难以获得成熟精子或者接近成熟的单倍体精子细胞,尚无有效的助孕方法.有研究发现,生精细胞发育阻滞与睾丸内支持细胞和间质细胞功能异常、局部微环境失调等因素相关[1],若将生精细胞脱离患者睾丸内的不良环境,在体外建立适当的培养环境,其可进一步分化为单倍体精子细胞,并通过圆形/长形精子细胞卵胞浆内显微注射术（round spermatid injection,ROSI;elongated spermatid injection,ELSI）解决生精功能障碍患者的生育问题.2002年Sousa等[2]对非梗阻性无精子症患者进行睾丸精母细胞与支持细胞体外共培养,行ROSI/ELSI后有囊胚形成,但胚胎发育潜能较低.
- 宋小敏姜宏汪存利黄静
- 关键词：生精细胞体外培养卵胞浆内单精子显微注射无精子症患者生精功能障碍梗阻性无精子症
- 曲细精管片段培养法和混合细胞共培养法对小鼠生精细胞的增殖分化效应被引量：2
- 2014年
- 目的：探讨曲细精管片段培养法和混合细胞共培养法对体外培养生精细胞的增殖、分化效应。方法采用曲细精管片段培养法和生精细胞-支持细胞共培养法对7～8d小鼠生精细胞进行体外培养，通过细胞形态学观察、细胞存活率和精母细胞特异性基因P19、单倍体精子细胞特异性基因TP1检测及染色体倍性分析，比较两种培养法生精细胞的存活、增殖以及分化情况。结果两种培养方法均可见生精细胞增殖，P19／TP1比值呈降低趋势，并可获得少量带鞭毛的精子细胞和长形精子，但共培养法生精细胞增殖速度及存活时间均优于片段法。体外培养各阶段，共培养法所获细胞数和存活率及单倍体精子细胞形成率均显著高于片段培养法（P＜0．05）；P19／TP1比值显著低于组织片段培养法（P＜0．05）。结论生精细胞-支持细胞共培养法的细胞增殖速度、存活率、存活时间及单倍体精子细胞形成率均优于曲细精管片段培养法，是较为理想的小鼠生精细胞体外培养方法。
- 汪存利姜宏孙静波
- 关键词：生精细胞
- 小鼠微量圆形精子细胞冷冻保存方法研究被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨小鼠微量圆形精子细胞的冷冻方法和条件。方法:比较玻璃化冷冻和常规慢冷冻,不同浓度冷冻保护剂(5%、7%、9%甘油)及不同平衡时间(0、15、30、45、60 min)对体外培养所获微量小鼠圆形精子细胞的冷冻效果。结果:玻璃化冷冻和常规慢冷冻在7%甘油中平衡时间30 min均可获得较高的细胞复苏率,且玻璃化冷冻小鼠圆形精子细胞的复苏率显著高于常规慢冷冻方法[(72.9±15.4)%vs.(58.2±17.7)%,P<0.05]。结论:采用玻璃化冷冻方法,在7%浓度的甘油保护剂中平衡30 min,可获得较满意的微量圆形精子细胞冷冻效果。
- 姜宏王丽汪存利
- 关键词：冷冻保存玻璃化冷冻甘油
- 冻融小鼠圆形精子细胞在体外受精中的应用研究被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨冻融小鼠圆形精子细胞在体外受精中的应用价值。方法:体外培养获得的小鼠单倍体精子细胞冻融复苏后,经4',6-二眯基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染料标记后,行小鼠卵胞质内圆形精子细胞显微注射(ROSI)(冻融组,n=259),同时以体外培养获得的新鲜单倍体精子细胞行ROSI(新鲜组,n=238)作对照,比较两组精子细胞受精能力和后续胚胎发育能力。结果:体外培养获得的小鼠单倍体精子细胞冻融后存活率为(75.9±2.3)%。冻融组与新鲜组受精率(51.9%vs 55.7%)、2细胞率(51.0%vs 62.2%)、4~8细胞率(41.8%vs42.9%)及桑囊胚形成率(12.2%vs 21.4%)均无显著性差异(P>0.05)。结论:冻融复苏后的小鼠圆形精子细胞与冷冻前相似,具有一定的受精和胚胎发育能力。
- 姜宏王丽汪存利张文香倪丰
- 关键词：体外受精冻融小鼠
