国家自然科学基金(30770839)
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
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- 八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导RAW 264.7细胞IL-1β、IL-6、IL-10表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及抗炎性细胞因子IL-10的动态变化规律及八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对其表达的影响。方法 LPS诱导RAW 264.7细胞不同时间(0、3、6、12、24、48 h),在各细胞因子表达高峰的时间点用ELISA及RT-PCR法检测不同剂量(10-10、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L)CCK-8对LPS诱导RAW 264.7细胞IL-1β、IL-6、IL-10蛋白及mRNA表达的影响。结果①LPS可诱导RAW 264.7细胞IL-1β、IL-6、IL-10蛋白合成及mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01):各细胞因子蛋白的浓度分别于LPS刺激后6、24、24 h达到高峰[分别为(209.41±10.04)、(2 071.64±9.08)、(207.65±16.27)ng/L];各细胞因子mRNA的表达分别于LPS刺激后3、24、24 h达到高峰[分别为(0.723±0.030)、(1.157±0.045)、(0.767±0.035)]。②CCK-8可剂量依赖性抑制IL-1β、IL-6的表达,并使IL-10表达进一步增加(P<0.01),且孵育细胞24 h,CCK-8上调LPS诱导IL-10生成的幅度要大于孵育48 h。结论 CCK-8通过抑制LPS诱导RAW 264.7细胞抑制促炎性细胞因子IL-1β、IL-6的表达和进一步增加抗炎性细胞因子IL-10的表达参与抗炎反应过程。
- 倪志宇丛斌董玫马春玲李淑瑾文迪徐之璐
- 关键词：胆囊收缩素RAW264.7细胞IL-1ΒIL-6
- CCK-8对LPS诱导小鼠骨髓来源树突状细胞分泌IL-12的影响
- 2008年
- 目的探讨八肽胆囊收缩素(cholecystokinin-octopep-tide,CCK-8)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cell,BM-DC)分泌IL-12的影响。方法应用免疫荧光技术观察BM-DC表面CCK受体表达情况,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测CCK-8对LPS诱导BM-DC分泌IL-12的影响,Western blot技术检测CCK-8对LPS诱导BM-DC细胞p38MAPK磷酸化的影响。结果BM-DC表面存在CCK-1R和CCK-2R;CCK-8促进LPS对BM-DC表达IL-12的诱导作用呈剂量依赖性(10-10、10-8、10-6mol·L-1);并能增加其p38磷酸化水平;CCK的1、2受体拮抗剂CR1409或CR2945均可减弱CCK-8的此种效应。结论CCK-8剂量依赖性促进了LPS诱导BM-DC分泌的IL-12,该作用由CCK-1R和CCK-2R介导,可能是通过促进p38MAPK的磷酸化作用而实现的。
- 韩冬艳丛斌李淑瑾刘晓丽马春玲倪志宇姚玉霞张风华
- 关键词：缩胆囊素树突状细胞白介素-12
- T细胞与类风湿性关节炎被引量：15
- 2011年
- 类风湿性关节炎（RA）是一种慢性、炎症性自身免疫性疾病，发病机制非常复杂，至今尚未阐明。尽管多种免疫细胞和分子被证实参与了。RA的关节炎症反应和组织破坏，但抗原特异性T细胞的激活始终被认为是RA发病起始和进展的中心环节。不同亚群T细胞在RA发病中发挥不同作用，以往认为，自身抗原诱导的促炎性Th1细胞活化是RA发病的主要因素。然而，有关具有特定功能的T细胞亚群，如调节性T细胞（Tr）和新发现的Th17细胞的新近研究结果提示T细胞在RA发病和进展过程中可能具有更广阔的作用。因而正确理解不同亚群T细胞在RA发病机制中的作用对探索治疗RA的新策略、研制新药物等具有十分重要的意义。
- 李巧霞丛斌单保恩
- 关键词：类风湿性关节炎T细胞辅助性T细胞调节性T细胞
- 细胞因子诱导的蛋白质巯基亚硝基化对大鼠成纤维细胞样滑膜细胞中CREB蛋白的DNA结合活性的影响
- 2010年
- 目的:观察重组白细胞介素-1β(rIL-1β)和重组干扰素-γ(rIFN-γ)联合诱导的亚硝基化反应对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的DNA结合活性的影响。方法:(1)分别用细胞因子(rIL-1β和rIFN-γ的混合物)、诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)及溶剂单独或联合孵育大鼠滑膜细胞12h,收集培养液上清进行一氧化氮(NO)含量测定;并提取各组总蛋白,其中细胞因子组的蛋白与巯基氧化修饰还原剂二硫苏糖醇(DTT)反应15min,采用生物素转化法与免疫印迹技术检测各组蛋白质的亚硝基化修饰水平。(2)分别用rIL-1β、rIL-1β和rIFN-γ的混合物、AG及溶剂单独或联合孵育滑膜细胞12h,提取各组核蛋白,其中rIL-1β+rIFN-γ组核蛋白与DTT反应15min,采用电泳迁移率改变分析技术观察各组CREB的DNA结合活性。结果:(1)细胞经rIL-1β和rIFN-γ孵育后,NO生成增多(P<0.01),蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,而AG降低了NO的水平(P<0.01)并抑制了亚硝基化反应,DTT与总蛋白直接作用也可抑制亚硝基化反应。(2)rIL-1β和rIFN-γ共孵育明显抑制rIL-1β单独诱导的CREB的DNA结合活性(P<0.01),而AG抑制了rIL-1β和rIFN-γ的作用,DTT与核蛋白直接反应也可逆转细胞因子共孵育的作用,使CREB的DNA结合活性增高(P<0.01)。结论:IL-1β和IFN-γ共同孵育滑膜细胞可诱导细胞适度产生NO,使细胞内蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,导致CREB发生可逆性巯基氧化修饰,抑制其DNA结合活性。
- 张晓静丛斌张凤华李淑瑾马春玲付丽红倪志宇于峰
- 关键词：CAMP反应元件结合蛋白质白细胞介素1干扰素-Γ滑膜细胞
- 八肽胆囊收缩素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞AP-1活性及IL-6表达被引量：3
- 2011年
- 目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱导RAW264.7细胞IL-6表达的影响及相关机制。方法用ELISA及RT-PCR法检测RAW264.7细胞IL-6蛋白及mR-NA表达;用EMSA方法检测RAW264.7细胞AP-1 DNA结合活性。结果①LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-6蛋白及mRNA表达;②10-10 mol.L-1 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达无明显影响;10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达;③10-10 mol.L-1 CCK-8未影响LPS诱导的AP-1活性,10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的AP-1活性。结论 CCK-8通过抑制AP-1 DNA结合活性而抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达,这可能是CCK-8发挥抗炎作用的信号转导机制之一。
- 倪志宇董玫徐之璐文迪李淑瑾丛斌
- 关键词：胆囊收缩素激活蛋白1RAW264.7细胞
- CCK-8对胶原诱导型关节炎小鼠滑膜组织TNF-α、IL-6的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)治疗类风湿关节炎(RA)的可行性及机制。方法 DBA/1J小鼠60只,随机分为CCK-8高、中、低剂量组和对照组各15只。将CII完全乳化液于小鼠尾根部皮内多点注射(100μl/只),第21天再次同剂量追加免疫一次,建立CIA模型。于第二次增强免疫同时,对照组腹腔注射生理盐水100μl/只;CCK-8高、中、低剂量组腹腔分别注射CCK-8 1、5、10 nmol/只,每天注射1次,连续注射7 d。采用酶联免疫反应法检测各组关节滑膜组织TNF-α和IL-6水平。结果 CCK-8各剂量组关节组织TNF-α和IL-6水平均明显低于对照组;中、高剂量组明显低于低剂量组(P均<0.05)。结论 CCK-8能降低CIA小鼠TNF-α和IL-6水平,此可能是其治疗RA的机制之一。
- 李巧霞丛斌单保恩张敬各陈海英马春玲
- 关键词：八肽胆囊收缩素胶原诱导型关节炎TNF-ΑIL-6
- CCK-8对LPS诱导树突状细胞成熟的影响
- 2011年
- 目的:观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)诱导树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法:采用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导法培养小鼠骨髓来源DCs,在LPS诱导其成熟过程中用不同浓度的CCK-8进行干预,采用流式细胞分析技术检测DCs表面主要组织相容性复合物II(MHC II)、分化群80(CD80)和分化群86(CD86)的表达;ELISA法检测DCs培养上清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;MTT法检测CCK-8处理DCs对同种异体T细胞增殖反应的影响。结果:CCK-8剂量依赖性地抑制LPS诱导DCs表面CD80、CD86和MHC II表达(P<0.01,P<0.05);CCK-8抑制LPS诱导DCs分泌IL-1β、IL-6和TNF-α(P<0.01);并且,CCK-8降低LPS诱导DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖的活性(P<0.05,P<0.01)。结论:CCK-8对LPS诱导DCs成熟过程中的细胞表型、细胞因子分泌和抗原提呈功能有抑制作用,提示CCK-8有可能在抗感染和抵抗自身免疫性疾病过程中发挥重要调节作用。
- 李巧霞韩冬艳丛斌单保恩张敬各
- 关键词：胆囊收缩素细胞因子类T淋巴细胞增殖
