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安徽省自然科学基金(090413271x)
作品数:
1
被引量:4
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姜宏
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2013
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小鼠生精细胞体外培养过程中印迹基因H19和IGF2r甲基化状态
被引量:4
2013年
目的通过对体外培养获取的昆明白小鼠单倍体精子细胞印迹基因H19印迹控制区(imprintingcontrolregion,ICR)和IGF2r差异甲基化区(differentiallymethylatedregion,DMR2)甲基化状态的检测,初步评估体外培养对生精细胞印迹基因甲基化状态的影响。方法应用亚硫酸氢盐测序技术,以印迹基因H19ICR和IGF2rDMR2区为扩增目的区域,对经体外培养获得的单倍体精子细胞进行甲基化修饰后巢式和半巢式PCR扩增,应用DNAman软件对特异性扩增产物测序分析,与GenBank相对应的序列比对,判断其甲基化状态,并与小鼠附睾内成熟精子进行比较。结果小鼠成熟精子中H19ICR区15个CpG位点呈高度甲基化状态(96.67%),IGF2rDMR2区呈非甲基化状态(94.29%);而经体外培养获得的单倍体精子细胞H19ICR区甲基化程度显著降低(69.33%,P〈0.01),/GF2rDMR2区甲基化程度显著增加(44.29%,P〈O.01)。结论昆明白小鼠成熟精子中H19ICR区呈高度甲基化状态;IGF2rDMR2区呈非甲基化状态;体外培养产生的单倍体精子细胞H19ICR区出现了广泛的甲基化丢失,IGF2rDMR2区出现了异常甲基化。
袁韦娜
姜宏
张文香
汪存利
关键词:
生精细胞
体外培养
印迹基因
DNA甲基化
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