国家自然科学基金(81070543)
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 相关作者：张国成许东亮聂晓晶杨晓蕾孙新更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院南京军区福州总医院总参谋部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- B19病毒XA株VP1独特区蛋白对Hela细胞凋亡的影响
- 2014年
- 目的:构建B19病毒XA株VPlu基因的真核表达载体和稳定转染细胞系,探讨B19病毒XA株VPl独特区蛋白对Hela细胞凋亡的影响。方法:采用本课题组前期构建的真核表达载体plRES2-EGFP-Vplu及plRES2-EGFP对照质粒,将其稳定转染至Hela细胞,通过流式细胞术检测EGFP阳性细胞的比例以确定稳定转染的细胞系是否成功构建;提取稳定转染的Hela细胞的总蛋白,通过Western blot检测细胞内凋亡相关基因Caspase3的表达;转染plRES2-EGFP-Vplu及plRES2-EGFP的Hela细胞经过Annexin V和PI的染色后,通过流式细胞术检测其凋亡率。结果:本实验成功构建了plRES2-EGFP-VPlu稳定转染的Hela细胞系,plRES2-EGFP-Vplu稳定转染的Hela细胞中Caspase3的表达较转染对照质粒的Hela细胞明显增加,细胞凋亡率亦显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:B19病毒XA株VP1独特区蛋白能够显著促进Hela细胞的凋亡。
- 迟明迟海峰许波晁玉瑾郑楠曹艳华王曼秋张国成
- 关键词：稳定转染细胞凋亡CASPASE3
- 快速诊断人细小病毒B19感染方法学比较研究
- 2013年
- 目的比较本实验室自行构建的ELISA法与德国ELISA试剂盒方法及PCR法快速诊断人细小病毒B19感染的临床应用价值。方法血液标本215份,分别采用B19病毒VP1独特区(VP1u)蛋白包被ELISA板建立B19病毒抗体检测方法(自行构建ELISA法),德国ELISA试剂盒方法检测标本B19病毒IgM与IgG,并采用PCR法检测B19病毒DNA,分析自行构建ELISA法检测B19病毒的敏感性、特异性及准确度。结果自行构建的B19病毒ELISA体系最佳抗原包被量为25ng/孔,最佳标本血清稀释倍数为1∶200;以德国B19病毒ELISA试剂盒为对照,自行构建ELISA法检测B19病毒IgM的敏感性、特异性及准确度分别为79.07%,87.18%,94.89%,检测B19病毒IgG的敏感性、特异性及准确度分别为88.46%,90.79%,93.53%;以PCR法检测B19病毒DNA为标准,自行构建ELISA法检测B19病毒IgG的敏感性、特异性及准确度分别为90.32%,77.77%,95.71%。结论本实验室自行构建的ELISA检测方法与德国B19病毒抗体检测ELISA试剂盒法及PCR法检测B19病毒DNA有较好一致性,可作为B19病毒感染常规诊断方法。
- 许东亮张国成聂晓晶成胜权孙新李志宏杨晓蕾吕香萍
- 关键词：人细小病毒B19ELISAPCR
- 小儿血液系统疾病人细小病毒B_(19)感染的研究被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨我国西北地区血液系统疾病患儿人细小病毒B19(HPV B19)感染情况及两者的相关性。方法:对特发性血小板减少性紫癜、再生障碍性贫血和白血病患儿的外周血分别采用PCR方法检测HPV B19-DNA和ELISA方法检测HPV B19-IgG。结果:特发性血小板减少性紫癜患儿HPV B19-IgG阳性率为43.08%(28/65),白血病患儿HPV B19-IgG阳性率为41.07%(46/112),病例组较对照组比较有极显著性差异(P<0.01);再生障碍性贫血患儿HPV B19-IgG阳性率为21.43%(6/28),病例组较对照组比较有显著性差异(P<0.05)。65例特发性血小板减少性紫癜患儿HPV B19-DNA阳性率为40.00%(26/65);28例再生障碍性贫血患儿HPV B19-DNA阳性率为21.43%(6/28);112例白血病患儿HPV B19-DNA阳性率为27.68%(31/112);对照组HPV B19-DNA检测均为阴性。结论:HPV B19感染与我国西北地区部分血液系统疾病患儿发病相关。
- 许东亮张国成聂晓晶孙新吴海霞徐晓莉
- 关键词：病因学白血病病因学人细小病毒B19
- 实时荧光定量PCR快速诊断肠道病毒71型感染被引量：11
- 2012年
- 目的探寻快速准确早期诊断肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)感染的方法。方法手足口病患儿871例,采用实时荧光定量PCR检测患儿咽拭子或疱液的EV71感染情况,实时荧光定量PCR检测EV71阳性患儿采用ELISA法检测血清EV71-IgM和EV71-IgG。结果871份标本中,RT-PCR检测EV71感染阳性率为17.91%,其中5月份检测阳性率(24.44%)最高,12月份检测阳性率(4.17%)最低;随机抽取64例RT-PCR检测阳性患儿外周血,EV71-IgM阳性率为51.56%,EV71-IgG阳性率为14.06%。结论 RT-PCR能快速准确诊断EV71早期感染。
- 许东亮聂晓晶张国成钱新宏杨晓蕾邓军霞李玲莉
- 关键词：肠道病毒71型实时荧光定量PCR手足口病
- B19病毒XA株VP1独特区真核表达系统的建立及鉴定
- 2010年
- 目的:克隆B19病毒XA株VP1u基因,构建真核重组表达载体。方法:从已构建好的B19病毒XA株原核表达载体中获得VP1u基因,将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,经酶切鉴定并测序验证后,获得真核表达载体pIRES2-EGFP-VP1u。将其转染至HeLa细胞,提取细胞总蛋白,用Western blot技术检测VP1u蛋白的表达。结果:成功构建了携带人B19病毒VP1u基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-VP1u,荧光显微镜下可见pIRES2-EGFP-VP1u转染HeLa细胞后表达EGFP蛋白而发出绿色荧光,Western blot证明VP1u蛋白在HeLa细胞中表达。结论:成功构建了携带人B19病毒VP1u基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-VP1u并在HeLa细胞中正确表达,为今后B19病毒VP1u基因疫苗的研究奠定基础。
- 迟明迟海峰许东亮王楠聂晓晶杨晓蕾吕香萍张国成
- 关键词：基因克隆
- B19病毒VP1u蛋白对胎鼠心脏的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨B19病毒vplu蛋白是否影响心脏发育及相关机制。方法对不同孕龄母鼠注射B19病毒vplu蛋白,采集胎鼠心脏组织标本,通过光镜、电镜、免疫组织化学、TUNEL和原位杂交技术观察心脏细胞结构变化、细胞凋亡及相关基因或表面标志物变化。结果实验期间有23只小鼠怀孕,vplu蛋白和(或)抗vplu蛋白mAh干预组与对照组均未见胎鼠流产。各组产仔数量及鼠心脏重量进行组间方差分析,差异无显著性(P>0.05)。vplu蛋白和(或)抗VPIu蛋白mAl干预组光镜下均可见心肌细胞间隙增宽,胞质透明淡染,部分心肌细胞脂肪变性。电镜下vplu蛋白(或)和vplu蛋白mAh共同注射组、抗VPIu蛋白mAb注射组均可见线粒体聚集在增宽的心肌细胞间隙中,有空泡化,并TUNEL免疫荧光和免疫组织化学显示心肌细胞发生细胞凋亡。对照组胎鼠均未见异常。结论B19病毒vplu蛋白与胎鼠流产、心脏发育畸形无关,与胎鼠心脏水肿有关。
- 聂晓晶张国成樊蕊孙新成胜权许东亮付蓉黄娜杨晓蕾
- 关键词：人细小病毒胎鼠心脏
