国家自然科学基金(30671357)
- 作品数：17 被引量：54H指数：5
- 相关作者：谢荔岩吴祖建谢联辉林奇英丁新伦更多>>
- 相关机构：福建农林大学河南农业大学福建省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 水稻条纹病毒与不同抗性水稻互作中的脱落酸调控被引量：1
- 2013年
- 虫传接毒鉴定表明,水稻品种(系)武育粳3号和KT95-418对条纹叶枯病的抗性差异明显.以这2个水稻品种(系)为材料,研究了脱落酸(ABA)在水稻与水稻条纹病毒(RSV)互作中的作用.采用高效液相色谱技术测定了水稻受RSV侵染后内源ABA含量的动态变化,结果表明,武育粳3号和KT95-418 ABA含量均先迅速升高,分别是未接种的3.7和5.7倍,后下降至与健株一致.实时荧光定量RT-PCR分析表明,外施ABA处理后武育粳3号中CP基因转录水平表达量下调比率为2.8,KT95-418中CP基因表达量与对照相比未发生明显变化;ABA合成抑制剂norflurazon处理未引起武育粳3号和KT95-418中CP基因表达量的变化.武育粳3号外施ABA处理后,水稻显症期推迟,症状减轻,条纹叶枯病的发病率降低.
- 丁新伦谢荔岩林奇英吴祖建
- 关键词：水稻品种水稻条纹病毒脱落酸HPLC实时荧光定量RT-PCR
- RSV编码的4种蛋白在“AcMNPV-sf9昆虫细胞”体系中的重组表达
- 2008年
- 应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的4个基因NS2、NS3、CP和SP,并将它们克隆至pMD-18-T载体上.得到的重组质粒pMD-18-T-NS2、pMD-18-T-NS3、pMD-18-T-CP和pMD-18-T-SP经XbaⅠ/HindⅢ双酶切,分别与经相同方法酶切的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa california nuclear polyhedrosis virus,AcM-NPV)转移载体pFastBacHTb相连接,构建重组转移质粒pFastBacHTb-X(pFastBacHTb-NS2、pFastBacHTb-NS3、pFastBacHTb-CP和pFastBacHTb-SP).序列测定表明,目的基因准确地插入到表达载体中.重组质粒pFastBacHTb-X通过转化包含有穿梭载体的大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞DH10Bac,得到重组穿梭质粒rb-X(rb-NS2、rb-NS3、rb-CP和rb-SP).rb-X侵染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)离体细胞(sf9)24-72 h后,在荧光倒置显微镜可见光200倍视野下观察到细胞增大、培养液和细胞内出现颗粒状物质、部分细胞破裂甚至裂解等一系列与正常sf9细胞形态有明显区别的现象.rb-X侵染细胞72h后,从细胞提取蛋白,电泳分析得到4个条带,大小分别为28.2、29.2、40.2和25.2 ku,与预测的4种融合蛋白大小一致.Western blotting分析分别得到4条单一条带,证明了RSV NS2、NS3、CP和SP基因在"AcMNPV-sf9昆虫细胞"真核表达体系中成功表达.
- 林董何柳谢荔岩吴祖建林奇英谢联辉
- 关键词：水稻条纹病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒杆状病毒表达系统
- GFP与水稻条纹病毒病害特异蛋白的融合基因在sf9昆虫细胞中的表达
- 2008年
- 用重叠延伸PCR（overlap Polymerase Chain Reaction，overlap-PCR）方法获得了含有绿色荧光蛋白（Green fluorescence protein，GFP）和水稻条纹病毒（Rice stripe virus，RSV）病害特异性蛋白SP（Disease-specific protein）两者的融合基因（GFP-SP），并将其克隆至载体pMD18-T，得到的重组质粒pMD18-T-GFP-SP经Xba Ⅰ／Hind Ⅲ双酶切后与经相同方法处理过的杆状病毒转移载体pFastBacHTb相连接构建成重组转移质粒pFastBacHTb-GFP-SP。酶切和测序鉴定证明了其序列的正确性并且无移码现象发生。将此质粒转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac，得到含有目的基因片段的重组杆状病毒穿梭质粒rb-GFP-SP。以之转染草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda，sf9）细胞，24～48h后在显微镜200倍可见光视野下观察到被感染细胞发生了细胞和细胞核变大、细胞内颗粒物增多、细胞脱落甚至裂解等一系列与正常的st9昆虫细胞形态有明显区别的变化。荧光显微镜下可见部分细胞发出清晰的绿色荧光，且大部分荧光集中在细胞质部分。这些结果表明，GFP-SP融合蛋白在st9昆虫细胞内成功表达。
- 林董郑璐平谢荔岩吴祖建林奇英谢联辉
- 关键词：水稻条纹病毒绿色荧光蛋白
- 泊松分布在生物学中的应用被引量：2
- 2007年
- 泊松分布广泛应用于遗传学的遗传图距计算、生物物理学的辐射生物学的定量分析、病毒学中的病毒感染率计算、分子生物学中一个基因文库所需克隆数的估计、PCR扩增片段保真率的估算以及酵母单双杂交中转化率的估计等学科领域,对此进行了简要评述。
- 庄军林奇英
- 关键词：泊松分布辐射生物学基因文库转化率
- 水稻条纹病毒胁迫下抗、感病水稻品种胼胝质的沉积被引量：10
- 2008年
- 为进一步探讨脱落酸(abscisic acid,ABA)在水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)与水稻互作中的作用,采用徒手切片法及苯胺蓝荧光染色技术研究RSV胁迫对抗、感水稻品种叶片中胼胝质沉积的影响。在RSV胁迫下,感病水稻叶片组织中胼胝质的荧光强度与健株无显著差异;而抗病水稻叶片组织中胼胝质的荧光强度却较健株明显增强,其中,大维管束中的维管束鞘内层厚壁细胞、木质部和韧皮部以及维管束鞘延伸的厚壁组织、小维管束、表皮细胞以及叶肉细胞均有较强的胼胝质荧光出现;且抗病水稻中的胼胝质荧光强度强于感病水稻。这说明水稻品种的抗性与胼胝质的沉积有关,ABA参与了RSV与水稻的互作,增强了水稻抗RSV的作用。
- 丁新伦谢荔岩林奇英吴祖建谢联辉
- 关键词：抗病品种感病品种水稻条纹病毒脱落酸
- 实时荧光定量PCR检测RSV胁迫下抗病、感病水稻中与脱落酸相关基因的差异表达被引量：10
- 2008年
- 采用实时荧光定量PCR方法测定了水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)胁迫下抗性不同品种水稻中与脱落酸相关基因的mRNA转录水平变化。结果表明:感病品种武育粳3号中WGP1、OsGASA2、Polcalcin、Os-CBL4、Myb和OsCIPK15基因表达水平均上调,上调比率分别为4.96、5.17、2.01、5.17、12.04和7.84。而抗病品系KT95-418中,OsGASA2和OsCIPK15基因表达水平下调,下调比率分别为1/5.40和1/2.08;Polcalcin和Myb基因表达水平上调,上调比率分别为4.20和3.86;WGP1和OsCBL4表达量变化不明显。这些结果表明,RSV胁迫能诱导脱落酸相关基因表达量的变化,并且在抗病、感病水稻品种中的表达特征不同,从而提示植物激素脱落酸可能调控了RSV胁迫条件下相关基因的表达。
- 丁新伦张孟倩谢荔岩林奇英吴祖建谢联辉
- 关键词：武育粳3号实时荧光定量PCR
- 水稻条纹病毒胁迫下灰飞虱基因的差异表达被引量：1
- 2010年
- 水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)主要由介体昆虫灰飞虱Laodelphax striatellus以循回增殖型方式经卵传播,目前RSV与灰飞虱间的互作研究很少。为了研究RSV侵染对灰飞虱基因表达的影响,采用5条随机引物和3条锚定引物,利用mRNA差异显示(differential display RT-PCR,DDRT-PCR)技术分析了带毒和无毒灰飞虱种群基因表达差异。且利用正交实验优化了DDRT-PCR反应体系中的模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度及Taq酶用量。结果表明:最佳DDRT-PCR体系(25μL)为cDNA3.0μg,随机引物2.0μmol/L,锚定引物2.5μmol/L,dNTPs200μmol/L,Mg2+2.0μmol/L,Taq酶2.0U。mRNA差异显示共获得35条差异片段,选取其中6条经RNA斑点杂交验证,获得了4条阳性差异片段。其中3条阳性片段为带毒灰飞虱种群特异表达,分别与5-羟色胺受体1D、旋转酶B、60S核蛋白L40高度同源,无毒灰飞虱种群中特异表达的一条阳性片段在NCBI核酸数据库中比对无同源序列。DDRT-PCR优化体系的建立及部分差异片段的获得为进一步研究灰飞虱与RSV间的互作提供了帮助。
- 肖冬来邓慧颖谢荔岩吴祖建谢联辉
- 关键词：灰飞虱水稻条纹病毒差异表达基因DDRT-PCR正交试验
- 我国水稻条纹病毒致病性的分化与差异分析被引量：2
- 2009年
- 以云南灰飞虱(Laodelphaxstriatellus)为介体昆虫,以4个水稻品种为寄主,通过人工接种对采自云南、江苏、河南、山东、安徽等省的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)23个分离物进行传毒试验.致病性评价结果表明,23个分离物可划分为5个等级,即强致病型、次强致病型、中致病型、弱致病型、极弱致病型.致病性分化表现在地理差异、毒株差异及水稻品种差异三方面.不同分离物在寄主发病率、发病时间、症状表现以及对灰飞虱传毒效率等方面都存在差异.
- 程文金邓慧颖谢荔岩林奇英吴祖建谢联辉
- 关键词：水稻条纹病毒灰飞虱
- 运用代谢组学研究RSV与水稻的互作初探
- 2012年
- 水稻条纹叶枯病严重威胁着我国的水稻生产,该病由水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)引起。目前,对水稻与RSV互作机制的认识还较少,这是制定有效措施来对RSV进行防控的一大障碍。代谢组学是新近发展起来的一种研究手段,它通过考察生物体系包括细胞、组织或整个生物体在受到刺激或扰动后,在代谢水平上的应答,来研究一系列的生物现象。运用代谢组学对水稻与RSV的互作进行了初步探索。GC-MS分析表明,RSV的侵染能显著影响水稻的代谢谱,且在代谢组水平上,不同抗感性的水稻对RSV的响应存在着差异。与NIST质谱数据库中的信息比较,从武育粳3号健康植株中鉴定到内源性代谢物12种、武育粳3号发病植株中11种、KT95-418健康植株中9种、KT95-418发病植株中14种。
- 徐飞谢荔岩丁新伦林奇英
- 关键词：水稻条纹病毒GC-MS
- 水稻感染水稻条纹病毒后的基因转录组和蛋白质表达谱
- 21世纪是系统生物学的世纪,基因转录组学和蛋白质组学是系统生物学研究的重要基础。水稻条纹叶枯病是一种重要的水稻病毒病,由水稻条纹病毒(Rice strip virus,RSV)所致,近年来在我国稻区连年暴发,防治起来十分...
- 张晓婷谢荔岩林奇英李洪连吴祖建谢联辉
- 文献传递
