天津市科技创新专项资金(08FDZDSH03000)
- 作品数：12 被引量：60H指数：4
- 相关作者：邱录贵孟恒星李长虹徐燕刘友更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院天津市脐带血造血干细胞库中国医学科学院更多>>
- 发文基金：天津市科技创新专项资金天津市科技发展战略研究计划项目天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同来源内皮祖细胞培养及其生物学特性比较被引量：9
- 2010年
- 背景:在缺血性疾病中,机体的代偿性反应包括细小动脉形成和血管新生,而内皮祖细胞在其中发挥着重要的作用,参与了机体多种生理、病理性血管重建过程。目前对内皮祖细胞的来源、生物学特性还存在许多争议。目的:分离培养人外周血、脐带血、骨髓以及脐带来源的内皮祖细胞,并对其生物学特性进行比较。方法:采用密度梯度离心法分离人外周血、脐带血以及骨髓单个核细胞进行贴壁培养,脐带来源的内皮祖细胞通过植块贴壁培养或胶原酶消化脐静脉内膜获得的单个核细胞进行贴壁培养。对获得的贴壁细胞进行细胞形态学、增殖活力、细胞周期、免疫表型的检测。结果与结论:①外周血与脐带血来源的贴壁细胞呈长梭形,集落状生长,其上附有成簇圆形细胞,随着培养时间延长,圆形细胞渐脱落,梭形细胞无明显增殖趋势,消化后细胞不能传代;流式显示细胞高表达CD45,部分表达KDR,但不表达CD31。②骨髓和脐带来源的贴壁细胞呈短梭形、多角形;传代后细胞增殖迅速,且细胞形态与增殖活力没有明显下降;多数细胞处于G0/G1期;流式检测显示细胞均不表达CD14、CD45,也不表达CD106、HLA-DR,但高表达CD44、CD90、CD62E、CD73、CD95、CD105;部分表达内皮系标记KDR、vWF;酶消化法获得的脐带内皮祖细胞还表达CD31;共聚焦显微镜扫描显示细胞具有吸收ac-LDL并结合UEA-1的能力。结果说明外周血、脐带血、骨髓与脐带组织中可分离培养出分化程度、增殖活力不同的内皮祖细胞。
- 徐燕孟恒星于珍李长虹邱录贵
- 关键词：内皮祖细胞生物学特性骨髓脐带
- 基于人CD105分子的酵母展示系统的构建
- 2016年
- 目的构建基于人CD105分子的酵母表面展示系统。方法以人CD105 cDNA为模板,扩增CD105基因片段,转化到酵母表面展示载体pYDs,构建pYDs-CD105重组质粒;将重组质粒转化酵母细胞,测序鉴定,并通过流式细胞仪分析CD105的表达。结果测序表明CD105基因片段转入pYDs质粒,流式细胞仪检测到酵母细胞表面有CD105分子的表达。结论成功构建了基于人CD105分子的酵母表面展示系统,为本实验室获得CD105单克隆抗体杂交瘤细胞株提供了新的筛选平台。
- 高海霞刘红芹石琳屈浩
- 关键词：聚合酶链反应膜糖蛋白类CD105酵母表面展示
- 小鼠抗人CD52功能性抗体的制备与鉴定
- 2013年
- 目的鼠抗人CD52抗血清的制备与功能鉴定。方法由人Hut-78细胞提取细胞总RNA,运用RT-PCR方法扩增CD52基因,定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),用脂质体转染法转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、FACS、免疫组织化学技术检测目的蛋白的表达。用CD52合成肽免疫小鼠,通过间接ELISA和流式细胞术分析抗血清,用MTS实验鉴定抗体对白血病LCL细胞系的增殖抑制作用。结果建立了稳定转染的CHO细胞系。鉴定出有高效价抗体存在。MTS实验检测免疫血清有抑制LCL细胞生长作用。结论功能性抗体制备成功并建立了稳定转染CD52的CHO细胞系。
- 刘友屈浩石琳黄丽华张宇光朱卫彬
- 关键词：真核表达载体抗体制备
- 特异性HER2单克隆抗体的制备及初步应用被引量：2
- 2010年
- 目的:制备特异性识别天然构象的人表皮生长因子受体-2(HER2)的单克隆抗体(mAb),用以指导Herceptin的临床应用。方法:利用纯化的原核表达的HER2融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与NS1骨髓瘤细胞按常规方法融合,ELISA法进行杂交瘤的初步筛选。构建HER2酵母展示系统,用酵母cellbase ELISA进行第2次筛选。将筛选到的阳性克隆株进行亚克隆获得稳定分泌细胞株,用免疫组织化学的方法鉴定其与SK-Br-3细胞和293a细胞的反应性。结果:通过ELISA筛选得到168株阳性杂交瘤,用酵母cellbase ELISA最终得到8株阳性杂交瘤,此8株免疫组化检测均与SK-Br-3细胞反应,而与293a细胞无反应。结论:成功制备了8株识别天然构象的HER2的mAb,能够用于免疫组化,为临床上使用Herceptin进行个性化治疗乳腺癌打下了基础。
- 刘红芹王冬梅屈浩石琳黄丽华冯春玲张丽艳朱卫彬
- 关键词：单克隆抗体免疫组化
- 小鼠脐血移植模型研究进展
- 2015年
- 脐血中含有丰富的原始造血干细胞,由于免疫细胞发育不成熟,抗原表达和功能活性低下,移植物抗宿主疾病发生率低。脐血来源丰富、不易受病毒及残留肿瘤细胞的污染,越来越多地作为造血干细胞的优质来源在临床上广泛应用。通过建立小鼠脐血移植模型,对临床多种疾病尤其是对恶性血液病的造血干细胞移植研究提供有效途径,可以对脐血的生物学功能、植入过程、移植疗效做进一步研究,不断优化的小鼠移植模型对我们解读人类疾病的发病机理、疾病进程起到推动作用,本文将从小鼠种属的选择、移植模型的构建及脐血移植模型新进展等方面对进行综述。
- 朱中康栾佐何志旭杨印祥王凤昌
- 关键词：脐血造血干细胞移植小鼠
- 人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性被引量：42
- 2009年
- 背景:由于大量获取骨髓细胞存在困难,并且骨髓间充质干细胞随年龄的增加出现数量及分化潜能下降,因此需要寻找其他间充质干细胞来源。目的:优化人脐带间充质干细胞的分离培养条件,进一步明确其生物学特性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-09/2008-03在中国医学科学院血液学研究所国家重点实验室完成。材料:17份脐带标本取自健康足月新生儿,由天津市中心妇产医院提供。方法:脐带采集后在6h内分别用植块法、胶原酶消化法、胶原酶与胰酶联合消化法进行分离培养,于培养第14天计数集落数,超过50个细胞计为集落。当细胞达70%～80%融合时,胰蛋白酶-乙二胺四乙酸混合消化,以(2.5～5.0)×103/cm2密度传代培养。主要观察指标:比较不同培养方法所获贴壁细胞的形态学特征、细胞产率,应用流式细胞技术分析细胞增殖活性、免疫表型,特异性染色方法鉴定细胞的多向分化潜能。结果:植块法培养6～10d可见成纤维样细胞从植块边缘爬出,形态与骨髓间充质干细胞相似,散在分布或形成小克隆,原代可获得(5.2±1.7)×105个贴壁细胞/0.5cm脐带组织,至少可稳定传15代,平均每代扩增6.2倍,在原代细胞克隆数、细胞产率、传代时间及扩增倍数上与胶原酶消化法比较存在明显差异(P<0.05);而胶原酶与胰酶联合消化法接种后未见明显贴壁细胞。人脐带间充质干细胞的倍增时间为45h,72.09%细胞处于G0/G1期,不表达造血细胞及内皮细胞标记,高表达整合素和黏附分子CD44,CD90,CD95以及CD73,CD105,在特定诱导条件下,人脐带间充质干细胞能够向成骨及成脂肪细胞方向分化。结论:应用植块法可以从人脐带组织中简便高效地分离出一群具有高增殖活性及多向分化潜能的间充质干细胞,其免疫表型类似于骨髓间充质干细胞。
- 徐燕李长虹孟恒星郝牧邱录贵
- 关键词：脐带间充质干细胞生物学特性
- 人CD52基因的克隆及稳定转染细胞系的建立
- 2010年
- 目的克隆人CD52基因,构建真核表达载体,并在CHO细胞中稳定表达。方法提取人Hut-78细胞总RNA,采用RT-PCR法扩增CD52基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)/CD52,通过脂质体法转染CHO细胞,建立稳定转染的细胞系CHO-CD52。采用RT-PCR、免疫荧光组化技术及流式细胞术检测目的基因和蛋白的表达。结果 RT-PCR扩增得到186bp的DNA片段。重组表达质粒pcDNA3.1(+)/CD52经PCR、双酶切及测序证明构建正确。CHO-CD52细胞经RT-PCR分析,可见186bp的目的基因条带;经免疫荧光检测,可见绿色荧光分布;经流式细胞术分析,阳性细胞百分率及荧光平均值分别为98.18和193.56。结论已成功克隆了人CD52基因,并建立了稳定转染的CHO细胞系,为CD52单克隆抗体的制备及抗体药物的开发奠定了基础。
- 刘友屈浩石琳刘红芹黄丽华张宇光朱卫彬
- 关键词：真核表达转染CHO细胞
- 人CD34真核表达载体构建及稳定转染细胞系的建立
- 2011年
- 目的:构建人CD34真核表达载体,转染到3T3细胞获得稳定表达CD34的细胞株。方法:在人KG1a细胞中提取细胞总RNA,运用RT-PCR方法扩增CD34基因,定向克隆入真核表达载体pCI-neo,通过电转仪转染3T3细胞,流式细胞仪分选建立稳定转染的3T3细胞系,用RT-PCR、FACS检测目的蛋白的表达。结果:构建了重组载体pCI-neo/CD34,建立了稳定表达CD34的3T3细胞系。结论:重组载体pCI-neo/CD34构建成功和稳定转染3T3-CD34细胞系的建立为制备抗人CD34单克隆抗体(mAb)做了准备,为进一步研究CD34分子的功能奠定了基础。
- 石琳屈浩刘红芹高海霞朱卫彬
- 关键词：电转化分选稳定细胞系
- 新生儿脐血RhD阴性稀有血型资料库的建立研究
- 2011年
- 目的建立新生儿脐血RhD阴性稀有血型资料库，了解天津脐血库存储人群Rh血型分布情况。方法收集2001年10月至2011年8月天津脐血库存储的154882例健康新生儿脐血样本作为研究对象，使用试管法检测样本ABO抗原和RhD抗原，RhD阴性确认采用间接抗人球蛋白试验。结果154882例脐血样本中检出RhD阴性581例（0．37％），其中A型137例（23．58％）、B型191例（32．87％）、O型195例（33．56％）、AB型58例（9．98％）；男性和女性分别占51．98％和48．02％，RhD阴性的表型以ccdee和Ccdee为主（81．67％）。结论建立新生儿脐血RhD阴性稀有血型资料库，可为RhD阴性群体的科学用血与临床预防、治疗提供参考数据。
- 梁晓岚李茜孙乐静杜颖刘兰婷刘剑武文杰邱录贵
- 关键词：脐血脐血库RHD血型
- 人脐带间充质干细胞在3种不同培养体系中的生长状况及腺病毒感染效率被引量：4
- 2010年
- 背景：目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的：观察人脐带来源的间充质干细胞在体外不同培养体系中的生长状态,以及不同腺病毒感染的效率。方法：采用胶原酶消化法从正常足月新生儿脐带中分离出间充质干细胞,贴壁法纯化培养,细胞贴壁后利用低糖DMEM,MesenPRO RSTM Medium和STEMPRO MSC SFM这3种培养体系进行体外扩增。取对数生长期的第3~5脐带间充质干细胞,应用腺病毒Ad5-EGFP,Ad5/11-EGFP,Ad5/35-EGFP分别以感染复数=1,10,100进行感染,分别于感染后24,56,72h倒置荧光显微镜观察病毒感染及绿色荧光表达情况。结果与结论：使用低糖DMEM培养的细胞初期融合时间长,STEMPRO MSC SFM培养的细胞虽然连接紧密,但消化传代后不易贴壁,而MesenPRO RSTM Medium培养的细胞在相同时间内能达到较高的细胞密度,更适于脐带间充质干细胞的体外扩增。Ad5/35-EGFP感染脐带间充质干细胞的效率明显高于其他两种腺病毒,但可导致细胞凋亡;腺病毒Ad5/11-EGFP对脐带间充质干细胞的感染效率较佳,随着感染复数的升高,所表达的荧光强度也逐渐增大。
- 洪敬欣张茜真韩俊领刘辉刘剑邱录贵
- 关键词：腺病毒脐带间充质干细胞干细胞
