国家自然科学基金(30672170)
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
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- 骨桥蛋白对骨髓内皮祖细胞体外增殖功能的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察骨桥蛋白(OPN)对体外培养的人骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)增殖功能的影响及可能的机制。方法以密度梯度离心法获取人骨髓单个核细胞(MNCs),差速贴壁法培养8d,由形态学、流式细胞仪、Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双染鉴定为EPC后,免疫组化和RT-PCR方法检测OPN在EPC的表达。加入不同浓度人重组OPN和PI3K抑制剂LY294002和Akt抑制剂作用于EPC,采用CCK-8法观测EPC的增殖能力。结果人重组OPN促进EPC的增殖功能,并且呈剂量依赖性。抑制PI3K/Akt信号通路可以阻断OPN对EPC增殖能力的影响。结论人重组OPN在体外可能通过PI3K/Akt信号通路调节人骨髓源性EPC的增殖能力。
- 王玥隋金珂方国恩施俊义苏东玮
- 关键词：骨桥蛋白内皮祖细胞细胞增殖
- 猪骨髓来源内皮祖细胞体外培养条件的优化
- 2010年
- 目的优化选择猪骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)体外培养条件,为后续研究奠定基础。方法从猪髂骨抽取骨髓,利用密度梯度离心法分离得到单个核细胞(MNC),体外培养分化为EPC。在其他培养条件相同的前提下,分别比较不同的细胞接种密度(2×103/cm2、5×103/cm2、1×104/cm2、2×104/cm2),不同基础培养液(EGM、M199、DMEM),不同FBS浓度(5%、10%、20%、30%),以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)与不同细胞因子[碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质细胞衍生因子(SDF)、胰岛素样生长因子(IGF)和表皮生长因子(EGF)]组合(VEGF+bFGF、VEGF+SDF、VEGF+bFGF+SDF、VEGF+bFGF+IGF+EGF、VEGF+bFGF+SDF+IGF)对EPC细胞增殖及迁徙功能的影响;采用细胞形态观察、双荧光染色法及免疫细胞化学染色方法对培养的EPC进行鉴定。结果猪骨髓EPC以1×104/cm2密度接种在盛有M199,并添加10%FBS和VEGF+bFGF+SDF+IGF细胞因子的培养液时,细胞的增殖能力和迁徙率最高。每组细胞经结合Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)和FITC标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-1)双色荧光染色鉴定双阳性率>76%,免疫细胞化学检测CD133、CD34、KDR均为阳性。结论通过优化猪骨髓来源EPC的体外培养条件,可使细胞数量增多及功能增强,为后续研究奠定了基础。
- 吴建国罗天航申晓军周虹薛绪潮毕建威方国恩
- 关键词：内皮祖细胞细胞培养技术骨髓
- 动态检测C反应蛋白及降钙素原预测多发伤后多器官功能障碍综合征的发生被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨多发伤患者外周血C反应蛋白（CRP）和降钙素原（PCT）与多器官功能障碍综合征（MODS）的相关性.方法 将136例多发伤患者按治疗过程中有无MODS发生分为MODS组（49例）和非MODS组（87例）,另选50例健康志愿者作为对照组,检测三组患者外周血不同时间点CRP和PCT含量.结果 MODS组的外周血CRP含量的最高值出现在伤后48 h[（38.7±2.7）mg/L],且在伤后各时间点与非MODS组及对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.MODS组外周血PCT含量的最高值出现在伤后24h[（20.3±1.7）μg/L],且在伤后各时间点与非MODS组及对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 创伤后急性期CRP和PCT含量与MODS的发生均具有相关性.联合测定对MODS预测更为可靠,具有较高的临床价值.
- 吴建国薛绪潮毕建威方国恩
- 关键词：C反应蛋白质降钙素多器官功能衰竭多发伤
- 内皮祖细胞在创伤后多器官功能障碍中的变化及意义被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨骨髓内皮祖细胞（EPCs）在创伤后多器官功能障碍中的变化特点及意义.方法 18头小型家猪按随机数字表法分为实验组（9头）和对照组（9头）.实验组动物采用失血性休克-内毒素二次打击方法制备多器官功能障碍综合征（MODS）模型.设伤后正常状态（T1）以及注射脂多糖（LPS）前（T2）和注射后即刻（T3）、24 h（T4）、48 h（T5）5个时间点抽取骨髓和外周血,加入红细胞裂解液,显微镜下计算有核细胞数;用流式细胞仪测定骨髓和外周血中EPCs含量,并计算EPCs绝对数值,对结果进行统计学分析.结果 对照组T1、T2、T3、T4、T 5时骨髓中EPCs（×106/L）分别为7.64±0.68、7.32±0.55、7.58±1.13、7.77±0.70、7.88±0.84,外周血中EPCs（×106/L）分别为3.54±0.26、4.06±0.64、3.74±0.55、3.61±0.37、3.98±0.63;实验组骨髓中EPCs（×106/L）分别为7.45±1.55、6.58±0.80、11.27±1.20、10.88±1.15、8.36±2.88,外周血中EPCs（×106/L）分别为3.21±0.48、8.71±2.04、5.98±0.77、1.27±0.91、2.14±0.96.实验组T3、T4、T5时骨髓中EPCs明显高于对照组;T2、T3、T4、T5时外周血中EPCs与对照组有明显差异,且各时间点骨髓中EPCs明显高于外周血中（均P＜0.05）.结论 失血性休克后MODS发生发展过程中外周血EPCs先出现明显升高,然后迅速下降;而骨髓EPCs先略有下降,后明显升高,出现MODS后下降.EPCs的变化在MODS的转归中起重要作用.
- 付文政毛岸荣罗天航方国恩
- 关键词：内皮祖细胞多器官功能障碍综合征流式细胞仪
- 骨桥蛋白在肿瘤血管形成中的作用被引量：1
- 2010年
- 骨桥蛋白(osteopontin OPN)是一种糖基化磷酸蛋白,许多肿瘤都可以分泌和表达。大量研究显示:OPN在恶性肿瘤转移播散过程中发挥重要作用。而新生血管形成是肿瘤转移进展过程中非常重要的步骤。OPN与肿瘤新生血管关系密切,癌组织中OPN的高表达与肿瘤微血管密度相关。OPN与许多血管形成因子相互影响协同促进血管形成。OPN通过与整合素和CD44受体结合的细胞信号通路作用于血管形成的重要参与者内皮细胞,影响其增殖,迁移,粘附,趋化,凋亡等生物学特性,并降解细胞外基质为内皮细胞在局部组织中延伸形成血管提供基础。最近的研究也显示OPN可以在血管干/祖细胞水平调节其增殖功能,从而影响肿瘤血管新生。本文将对OPN分子结构,OPN在肿瘤血管形成中所起的作用及相关机制进行综述。
- 王玥方国恩施俊义苏东玮
- 关键词：骨桥蛋白血管形成肿瘤
- 冻存骨髓来源单个核细胞分化成内皮祖细胞的功能特性
- 2009年
- 目的:对新鲜和超低温保存的骨髓来源单个核细胞(MNC)体外扩增的内皮祖细胞(EPC)进行功能比较。方法:从猪髂骨抽取骨髓,对分离后的MNC进行培养或-80℃冻存3个月后再培养;冻存后培养的P1代细胞利用免疫组化及流式细胞技术进行EPC表面标志抗原鉴定。同时分别对新鲜和冻存培养的EPC获得率、细胞迁徙、黏附和增殖功能进行比较。结果:冻存组细胞免疫组化鉴定:CD133(+)、CD34(+)、CD31()、KDR(),流式细胞技术鉴定:CD133的阳性率(17.24±3.12)%,CD34的阳性率(37.21±10.85)%,CD31的阳性率(72.07±13.34)%,KDR的阳性率(89.09±16.40)%。新鲜和冻存的MNC经诱导培养后EPC获得率分别为(1.1±0.078)%、(1.03±0.061)%,P=0.054;细胞迁徙率分别为(15±0.71)%、(14.2±0.63)%,P=0.17;贴壁率分别为(42.7±2.1)%、(39.5±1.7)%,P=0.11;增殖功能分别为(25.06±2.82)×104、(21.64±2.34)×104,P=0.089。结论:超低温保存骨髓来源的MNC经诱导培养得到的EPC其数量和功能均无明显影响,该方法可在短时间得到大量的同质EPC,为EPC移植提供了来源保障。
- 吴建国罗天航周虹薛绪潮毕建威方国恩
- 关键词：内皮祖细胞冻存单个核细胞细胞分化
- p38丝裂素活化蛋白激酶磷酸化对多器官功能障碍综合征肿瘤坏死因子-α基因表达调控的影响被引量：5
- 2009年
- 目的探讨猪多器官功能障碍综合征（MODS）中p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）磷酸化对肿瘤坏死因子-α（TNF—α）基因表达调控的影响。方法将30头家猪随机均分为MODS组和对照组，采用失血性休克与内毒素血症的“二次打击法”建立猪MODS模型。采用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化水平，用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定TNF—α mRNA表达，用酶联免疫吸附法（EusA）测定血浆TNF—α浓度。结果MODS时外周血单核细胞p38MAPK磷酸化明显增强，使TNF—α mRNA表达明显增强、血浆TNF—α浓度显著升高，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论在MODS发病机制中，外周血单核细胞p38MAPK磷酸化使TNF—α基因的转录活性明显增强，从而使血浆TNF—α升高，这是MODS时TNF—α生成增加的机制。
- 毛岸荣黄河方国恩马立业毕建威罗天航付文政华积德
- 关键词：多器官功能障碍综合征P38丝裂素活化蛋白激酶肿瘤坏死因子-Α磷酸化
- p38MAPK对猪MODS时内皮祖细胞的调控作用
- 2009年
- 目的探讨猪MODS时p38MAPK介导的TNF-α对内皮祖细胞(EPC)的调控作用,从EPC分化障碍的角度进一步研究创伤后MODS的发病机制。方法将20头家猪分为MODS组(M组)和对照组(C组),每组10头。采用"二次打击法"建立猪MODS模型,监测其各主要脏器功能的变化,体内用Western-blot法检测外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化变化,用ELISA法测定外周血血浆TNF-α的浓度变化,流式细胞仪检测外周血EPC的数量变化。结果M组的MODS发生率明显高于C组,M组外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化明显增强,TNF-α合成与分泌明显增加,外周血EPC数量与功能下降。结论外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化使TNF-α的转录、合成增加,血浆TNF-α升高,使外周血中的EPC其数量与功能下降,炎症病理反应加重,可能是MODS的发病机制。
- 毛岸荣方国恩马立业毕建威罗天航付文政华积德
- 关键词：多器官功能障碍综合征P38MAPK肿瘤坏死因子Α
- 白介素-1β在猪多器官功能障碍综合征中对内皮祖细胞的调控
- 2009年
- 目的 探讨猪多器官功能障碍综合征（MODS）中p38MAPK介导的白介素（IL）-1β对内皮祖细胞（EPC）的数量与功能的调控，从血管内皮祖细胞分化障碍来研究创伤后MODS的发病机制。方法将30头家猪随机分为MODS组（n=15，M组）、对照组（n=15，C组），采用失血性休克与内毒素血症的“二次打击法”建立猪MODS模型，在体内Western—blot法检测外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化变化；ELISA法测定外周血血浆IL-1β的浓度变化；流式细胞仪检测外周血EPC数量的变化；采用x^2检验比较M组与C组的MODS发生率，采用成组t检验比较M组与C组的p38MAPK的磷酸化变化、外周血血浆IL-1β的浓度变化与外周血EPC数量的变化。结果在MODS中外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化增强，导致其外周血IL-1β浓度升高，从而使得外周血EPC数量下降，M组MODS的发生率均明显高于C组（P〈0．01）；M组的外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化与外周血血浆IL-1β的浓度明显高于C组（P〈0．01）；M组外周血EPC数量明显低于C组（P〈0．01）。结论在猪MODS的发病机制中，外周血单核细胞内的p38MAPK的磷酸化使血浆IL-1β浓度升高，使EPC的数量下降，致使MODS的炎症反应加重。
- 毛岸荣方国恩周虹马立业毕建威罗天航付文政华积德
- 关键词：多器官功能障碍综合征P38丝裂原活化蛋白激酶IL-1Β内皮祖细胞
- 内皮祖细胞在创伤修复中的价值
- 2009年
- 近年来的研究显示，内皮细胞不仅是创伤后炎性反应的参与者，还是首先受损的靶细胞，并进而造成微血管损伤、微循环障碍，这可能是创伤后器官功能障碍的始发环节Ⅲ。骨髓中有一群能够在生理性或病理性因素的刺激下，动员到外周血并分化为成熟内皮细胞并促进血管新生的祖细胞，这些细胞被称为内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）。
- 罗天航方国恩
- 关键词：内皮祖细胞创伤修复器官功能障碍微血管损伤微循环障碍病理性因素
