国家自然科学基金(30371091)
- 作品数：10 被引量：25H指数：4
- 相关作者：贾伟章郭琼林孙晓凤周秀霞李海燕更多>>
- 相关机构：中国科学院广东药学院广东药科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 乌鳢免疫球蛋白M重链和免疫球蛋白轻链的克隆与特征分析被引量：2
- 2010年
- 应用RACE-PCR方法克隆并鉴定了乌鳢免疫球蛋白M(i mmunoglobulin M,Ig M)重链(H)和免疫球蛋白轻链(L)全长cDNA。乌鳢IgH cDNA全长1 912个核苷酸(nt),包含1 797 nt的开放阅读框,编码598个氨基酸(aa)。IgH恒定区(CH)均包含1对保守的半胱氨酸残基形成链内二硫键,其中CH1区氨基末端存在保守的半胱氨酸残基与轻链形成链间二硫键,4个推测的N-糖基化位点(NXT和NXS)则分别位于CH1、CH2和CH4。序列比对发现乌鳢IgHCH1与CH2交界处氨基酸序列的插入使铰链区肽段较其他硬骨鱼IgH长,此外IgH CH4区羧基末端参与单体间聚合的半胱氨酸被赖氨酸替换,这反映乌鳢IgH分子结构的特异性。序列相似性比较显示乌鳢IgH与点带石斑鱼、黑鳍冰鱼、牙鲆、虹鳟的相似性依次为55%、50%、45%和36%,与斑马鱼类的相似性较低(为28%)。乌鳢IgL cDNA全长941 nt,包含729 nt的开放阅读框,编码242个aa。轻链可变区(VL)和恒定区(CL)均包含保守的半胱氨酸,形成链内和链间二硫键。序列比对分析表明乌鳢IgL与五条鰤和花狼IgL的相似性为78%和77%,而与斑点叉尾鮰和虹鳟的相似性仅为32%和31%。根据IgH和IgL恒定区氨基酸序列构建系统进化树,鱼类IgH形成硬骨鱼和软骨鱼两大分支,其中乌鳢IgH与河豚IgH的亲缘关系较近;硬骨鱼IgL系统树显示3个主要的分支:L1、L2和L3,乌鳢IgL位于L1分支的L1 A亚类。
- 贾伟章周秀霞
- 关键词：免疫球蛋白M重链轻链克隆乌鳢
- 养殖乌鳢类立克次体感染的组织病理学研究被引量：7
- 2007年
- 本文系统报道了养殖乌鳢类立克次体(Rickettsia-like organism,RLO)感染的各器官(脑、眼、鳃、心脏、头肾、肝、胰腺组织、脾、肾、肠和卵巢)的组织病理变化,探讨了炎症发展的基本规律。感染乌鳢病理解剖学特征和最具病理诊断意义的是体内各器官普遍出现的白色结节。这些结节的显微结构为肉芽肿炎症即一种慢性增生性炎症。在严重病变的肾脏,由于组织坏死区域较大和周围明显的细胞增生形成了境界较为清楚的巨大“肉瘤”状肿物。内脏器官的血管(特别是造血器官的血管)出现明显纤维素性血栓、混合血栓、弥散性血管内凝血(disseminated intravascu-lar coagulation,DIC)和组织细胞大范围的变性或坏死、溶解。大多数器官的组织细胞主要是上皮性细胞、吞噬性细胞,胞质内富含嗜酸性包涵体(eosinophilic intracytoplasmic inclusion),这种细胞多位于鳃上皮处、鳃部和体内器官血管内皮及血管周边结缔组织。血管内皮细胞及周边细胞内大量包涵体的出现导致血管内皮细胞的肿胀和破坏。
- 郭琼林贾伟章孙晓凤周秀霞李海燕
- 关键词：类立克次体鱼病乌鳢
- 养殖乌鳢类立克次体感染的超微病理学研究被引量：3
- 2007年
- 应用电子显微镜技术,观察了养殖乌鳢RLO感染主要内脏器官超微结构病理变化,并初步探讨了发病机制。观察发现:RLO寄生细胞明显肿大,胞质电子密度低,细胞器肿大、溶解,RLO可随肿胀、破裂的细胞进入组织间隙;在一些寄生细胞内尚发现变性的RLO。内脏组织细胞普遍肿大,细胞器分散、稀少,线粒体除明显肿胀、嵴断裂消失外,尚发现坏死性变化即出现致密核心或无定形的电子密度物质;粗面内质网扩张、破裂和脱颗粒;部分细胞内溶酶体增多,胞质内发现明显的髓鞘样结构;核肿大或核固缩、溶解,并可见核内出现髓鞘样结构和核包含物。
- 郭琼林孙晓凤贾伟章周秀霞
- 关键词：类立克次体鱼病超微病理学乌鳢
- 线粒体未折叠蛋白反应对Aβ蛋白聚集毒性的影响被引量：4
- 2017年
- 【目的】探讨线粒体未折叠蛋白反应(UPR^(mt))对阿尔茨海默病(AD)Aβ蛋白聚集毒性的影响。【方法】将秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)线粒体外膜tomm-22、内膜E04A4.5以及atfs-1基因克隆并构建L4440干扰载体,转化HT115感受态细胞以制备tomm-22、E04A4.5和atfs-1 RNA干扰菌。研究tomm-22和E04A4.5 RNA干扰对转基因线虫AD疾病模型CL4176和CL2006瘫痪进程的影响。观察tomm-22和E04A4.5 RNA干扰后野生型线虫N2寿命,检测ATFS-1信号在抑制Aβ蛋白聚集毒性中的作用,分析tomm-22和E04A4.5 RNA干扰后转基因线虫SJ4100 UPR^(mt)动态变化,以及转基因线虫DA2123自噬水平。【结果】通过对线虫线粒体tomm-22和E04A4.5基因克隆及构建RNA干扰菌建立了UPR^(mt)模型,证实能够抑制AD疾病模型CL4176 Aβ蛋白聚集毒性并延缓其瘫痪进程。野生型N2在喂食tomm-22和E04A4.5 RNA干扰菌后寿命明显缩短,而渐进性瘫痪线虫AD模型CL2006呈现前期延缓瘫痪而后期加速瘫痪的生理现象,说明UPR^(mt)呈现短期缓解线粒体应激和改善线粒体功能的调节作用。通过atfs-1 RNA干扰证实延缓线虫AD模型CL4176瘫痪进程与ATFS-1信号不直接相关。然而,tomm-22和E04A4.5 RNA干扰后UPR^(mt)呈现逐渐增强的趋势,并进一步诱导自噬相关分子LGG-l的上调表达,提示RNA干扰延缓AD瘫痪进程是通过提高线虫体内自噬活性而发挥作用。【结论】线粒体UPR^(mt)通过协调线粒体与细胞核之间的信号转导能够抑制Aβ蛋白聚集毒性,有助于恢复线粒体乃至细胞内蛋白质稳态,保障细胞正常生理功能,为AD等神经退行性疾病的早期预防和治疗提供新的靶点。
- 彭琼赵思旭邓雯娟钟子源贾伟章
- 关键词：未折叠蛋白反应线粒体自噬AΒ蛋白
- 乌鳢(Channa argus)MHC Class I全长cDNA序列的克隆及表达特征被引量：1
- 2015年
- 旨在探究乌鳢(Channa argus)MHC基因的分子特征、表达方式及多态性。应用抑制差减杂交(SHH)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆并鉴定了乌鳢全长MHC I c DNA序列Char-Ia-1、Char-Ia-2和Char-Ib,推测氨基酸序列与已知硬骨鱼MHC I基因同源。Char-Ia-1和Char-Ia-2 c DNA序列包含1 167和1 083 bp的开放阅读框,分别编码388和360 aa的膜型Ⅰ类分子;而Char-Ib c DNA序列包含978 bp的开放阅读框,编码325 aa,显著截短的羧基末端显示Char-Ib为潜在的分泌型Ⅰ类分子。比较发现Char-Ia与Char-Ib在3'非转录区存在显著差异,在细胞外区、跨膜区和细胞质区的氨基酸序列同源性均较低,推测二者来自不同的MHC I基因座。氨基酸序列比对显示乌鳢MHC I分子与抗原肽结合的关键氨基酸残基较保守,在α1和α3结构域均出现硬骨鱼特征性的氨基酸残基缺失。进化树分析表明Char-Ia-1和Char-Ia-2聚为一簇,与Char-Ib处于不同的进化分支上,进一步证实Char-Ia与Char-Ib分别由不同MHC I基因座编码。RT-PCR分析显示乌鳢MHC I在组织中呈现组成型表达。设计基因专一性引物检测乌鳢Char-Ia与Char-Ib两类MHC I基因在组织中的表达水平,结果显示Char-Ia以较低的浓度表达于所有被检测组织,而Char-Ib主要表达于脾、肠、鳃和外周血,呈现明显的组织表达特异性,提示两类MHC I分子在鱼类免疫反应中发挥不同的生理功能。
- 汪强强贾伟章黄泽波
- 关键词：主要组织相容性复合物基因座乌鳢
- 乌鳢(Channa argus)干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子的克隆与特征分析被引量：3
- 2007年
- 应用抑制差减杂交、末端快速扩增和基因步移技术,克隆并鉴定了乌鳢干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子序列.Viperin cDNA全长1474nt,包含1059nt的开放阅读框,编码352个氨基酸.除N末端70个氨基酸外,Viperin蛋白氨基酸序列在鱼类和哺乳类具有高度的保守性.ISG15 cDNA全长758nt,包含468nt的开放阅读框,编码155个氨基酸,含有两个泛素样(UBL)结构域,C末端具有保守的UB偶联结构(LRGG).Viperin和ISG15启动子区存在保守的干扰素刺激反应元件(ISRE)和γ-干扰素激活序列(GAS).ISRE是干扰素刺激基因启动子区的重要特征,并与干扰素调控因子(IRF)1和IRF2的识别序列(IRF-E)部分重复;GAS参与介导II型干扰素激活基因的诱导转录.Viperin启动子区还包含保守的NF-κB结合位点,这是保守的NF-κB结合位点以一致的序列模式(GGGRNNYYCC)出现在鱼类干扰素刺激基因启动子区的首次报道.此外,Viperin和ISG15启动子尚存在TATA,CAAT,Sp1等转录因子结合位点.乌鳢ISG15基因5′非编码区含有单一的内含子,而Viperin基因5′非编码区未发现内含子.Viperin和ISG15mRNA主要表达在头肾、后肾、脾脏和鳃,肝脏中也有少量表达.体内干扰素诱导剂polyI:C刺激后,Viperin和ISG15基因在肝脏的表达水平明显增加.
- 贾伟章周秀霞黄容郭琼林
- 关键词：干扰素ISG15乌鳢
- 鲤鱼(Cyprinus carpio L．)GH受体的分子克隆及其两种转录子的发现被引量：1
- 2006年
- 应用反转录-PCR及RACE技术,从二龄鲤鱼肝组织中克隆了生长激素受体(GHR)的全长基因,其开放阅读框编码602个氨基酸,其中包括244个氨基酸的胞外激素结合结构域,24个氨基酸的跨膜区域和334个氨基酸的胞内信号传导区域．序列分析表明：无论在基因水平还是蛋白质水平,鲤鱼GHR与鲫鱼GHR均具有较高的同源性．用一对基因特异性引物在研究二龄鲤鱼GHR的组织分布时发现：肝与其他组织的扩增产物大小不一致(肝组织中的约小100 bp),测序结果以及基因组PCR表明这是由于一个97 bp的内含子选择性剪切造成的．而以同样引物在4月龄鲤鱼各组织扩增的片段大小是一致的,且与二龄鲤鱼肝以外组织的扩增产物大小一致．鲤鱼GHR两种转录子的出现,系转录时发生拼接变化所致,推测是一种与发育有关的机制．采用半定量RT- PCR方法分析组织相对表达水平,结果显示：GHR在二龄鲤鱼鳃、胸腺、脑组织的表达水平明显低于4月龄鲤鱼．
- 孙晓凤郭琼林胡炜汪亚平朱作言
- 关键词：分子克隆转录子鲤鱼
- 养殖乌鳢类立克次体分离纯化的初步研究被引量：6
- 2004年
- 贾伟章孙晓凤郭琼林
- 关键词：养殖乌鳢类立克次体纯化寄生致病因子
