公共文化服务平台

加强大型仪器共享平台管理,提高仪器利用率被引量：9: 2014年; 大型仪器共享平台作为科技创新的重要实验平台,为学科的发展起着巨大的推动作用。如何使大型仪器设备共享平台更加高效地服务于科研课题,为各类研究提供强有力的技术支持,提高大型仪器利用率,是共享平台建设与管理的重要任务。结合大型仪器共享平台的设备管理与使用经验,初步探索出一条科学化管理仪器设备,推进大型仪器设备共享,提高大型仪器设备和优质资源的使用效率和效益的路子。; 颜彩玲王世鄂陈婉南林旭; 关键词：大型仪器共享平台实验教学

乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白致HepG2细胞凋亡的蛋白质组学分析被引量：2: 2010年; 目的研究乙型肝炎病毒（hepatitits B virus,HBV）表面抗原大蛋白（large envelope protein,LHB）对HepG2细胞凋亡的影响,并以蛋白质组学方法探讨其机制.方法以腺病毒表达载体pShuttle-IRES-hrGFP-1克隆HBV LHB基因,经重组、包装后获得重组腺病毒Ad-LHB,与空载体重组腺病毒Ad-GFP分别感染HepG2细胞,采用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒、JC-1细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒和碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡情况.Ad-LHB及Ad-GFP分别感染HepG2细胞,提取细胞总蛋白,各取600μg蛋白样品进行双相电泳,R350染色,以双相电泳图像分析软件ImageMaster 2D Platinum确定差异蛋白点,Ettan斑点自动挖胶系统切取差异蛋白,脱色酶解后进行MALDI-TOF-TOF MS鉴定并分析.结果 Ad-LHB感染导致HepG2细胞凋亡明显增加.双向电泳及扫描分析显示Ad-LHB与Ad-GFP感染的HepG2细胞共有39个蛋白差异.质谱分析并确定其中的33种共36个蛋白,这些差异蛋白质有9种与细胞凋亡密切相关,其中,CAPN2、eIF3K和PPP2CB在Ad-LHB感染HepG2细胞表达增高,SERPINH1、LASP1、PRDX1、DHRS2、LDHA和PSMA4在Ad-LHB感染HepG2细胞表达降低.结论 HBV LHB可致HepG2细胞凋亡,多种细胞凋亡相关蛋白参与此过程.; 郑大利黄清玲吴云丽林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒蛋白质组学双向凝胶电泳肝细胞细胞凋亡

幽门螺杆菌促肝细胞增殖及分子机制的初步研究: 2012年; 目的研究幽门螺杆菌(Hp)对肝细胞增殖的影响并探讨其分子机制。方法以不同量的Hp标准株NCTC11637与HepG2肝细胞共培养,CCK-8法检测细胞的增殖情况并确定最佳Hp作用剂量。用Affymetrix人类基因表达谱芯片检测Hp与HepG2共培养对HepG2细胞基因表达谱的影响,并选取5个差异表达基因以半定量RT-PCR技术验证。结果 MOI比值(细菌与细胞个数比)在0.15∶1～0.075∶1时,Hp对HepG2细胞具有明显的促增殖作用;HepG2细胞经MOI比值为0.15∶1Hp处理后有35个基因转录发生变化:ICAM-1等19个基因上调,SLC38A4等16个基因下调,这些变化基因涉及细胞骨架/基质、DNA结合蛋白及转录因子等;5个基因表达情况与表达谱芯片检测结果完全吻合。结论一定剂量的幽门螺杆菌可促进肝细胞增殖,这与Hp导致HepG2细胞基因转录调控有关基因的表达变化有关。; 林小玲陈燕凌强华陈婉南林旭; 关键词：幽门螺杆菌基因芯片肝细胞增殖肝癌

458nt～1308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对Huh7细胞基因表达的影响被引量：3: 2009年; 目的研究458nt^1 308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白TSR′r′对Huh7细胞基因表达的影响,探讨其可能的致病机制。方法PCR扩增TSR′r′编码序列并克隆入pcDNA3.1/HisC。以FuGENE6将重组表达载体及相应空载体分别瞬时转染Huh7细胞,Trizol抽提细胞总蛋白与总RNA;以融合表达多肽表位抗体为一抗,Western blot检测目的蛋白的表达;用Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人类基因表达谱芯片检测Huh7肝细胞基因转录的变化,并以半定量RT-PCR进一步验证。结果成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/HisC-TSR′r′,转染48 h后在Huh7细胞中表达TSR′r′蛋白。TSR′r′导致Huh7细胞载脂蛋白H等27个基因转录上调,其中包括5种代谢相关基因,7种免疫相关基因,7种胶原及胞外基质基因,5种干扰素诱导蛋白基因;TSR′r′还导致Huh7细胞核受体共激活物1基因在内的7种基因转录下降。结论458nt^1 308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白可能多方面影响肝细胞功能,具有重要的致病意义。; 黄连真王林陈金烟林万松林建银林旭; 关键词：RNA剪接

B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蝇细胞中的表达与纯化: 2009年; 目的获得高纯度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(HBx蛋白)。方法PCR扩增获得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因,以AgeⅠ及BglⅡ位点将其克隆入果蝇表达载体pMT/BiP/V5/HisC。重组载体与筛选质粒pCoBlast以脂质体Cellfectine共转染果蝇S2细胞,25μg/ml Blasticidin筛选多克隆抗性细胞株。扩增细胞以CuSO4诱导HBx蛋白表达,Western blot鉴定表达产物并确定最佳蛋白表达时间和诱导浓度。200 ml大规模培养细胞并诱导表达,一步法及两步法分别纯化B、C基因型HBx蛋白。结果成功构建重组表达载体pMT/BiP-HBxb(含B基因型HBx基因)和pMT/BiP-HBxc(含C基因型HBx基因)。在果蝇S2细胞中,B、C基因型HBx蛋白与6×His融合表达(分别为HBxb-His及HBxc-His),在CuSO4诱导后72 h以及诱导浓度为500μmol/L^1 mmol/L时蛋白表达量最高。在200 ml培养液中,一步法纯化所得HBxb-His及HBxc-His蛋白总量分别为1.52和1.37 mg,纯度为85.23%和84.59%;二步法所得的HBxb-His及HBxc-His蛋白总量分别为5.38和6.42 mg,纯度分别为95.36%和94.62%。结论在果蝇表达系统中表达并获得高纯度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白,为进一步探讨结构和功能的关系奠定了基础。; 郑瑾林万松林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒基因型纯化果蝇

幽门螺杆菌膜分离组分对SGC-7901细胞的促增殖作用被引量：1: 2008年; 目的探寻幽门螺杆菌(Hp)促细胞增殖组分。方法利用超声破碎法提取NCTC11637Hp不同组分,获得分泌成分、菌膜及胞浆内容,分别加入SGC-7901细胞,共育24h,用MTT法检测各组分对细胞增殖的影响。进而用细菌蛋白提取试剂盒(P-PEK)分离菌膜蛋白,获得4个不同溶解度膜蛋白组分,分别或两两组合后加入SGC-7901细胞,用MTT法和Ki-67细胞免疫组化检测细胞增殖情况。结果低浓度Hp菌膜(≤1μg/mL)可促细胞增殖,增殖率可达119.32%(P<0.05);Hp菌膜3个不同溶解度膜蛋白组分单独作用于细胞时抑制细胞增殖,但低浓度的"中溶解度"和"难溶解度"混合组分促细胞增殖,增殖率可达115.55%(P<0.05)。结论Hp促细胞增殖成分存在于菌膜的"中溶解度"和"难溶解度"混合组分中。; 佘菲菲陈爱灼陈建森陈月秀; 关键词：幽门螺杆菌细胞增殖

非酒精性脂肪性肝病发病影响因素的病例对照研究被引量：13: 2009年; 目的调查非洒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病的影响因素，为预防NAFLD的发生提供可靠的流行病学依据。方法采用病例对照研究方法，对福建医科大学附属协和医院2007年18月体检确诊的NAFI．D患者385例和同期的体检健康人群825人进行调查。自制调查表收集两组一般情况、生活方式、饮食习惯、疾病既往史及生物化学检查结果，并对过程进行质量控制。两组问均衡检验采用f检验和x^2检验；单因素分析采用x^2检验；采用非条件Logistic逐步回归分析筛选变量，找出NAFLD的影响因素。结果两组在饮洒量（g／周）、是否喝茶、是否吸烟、运动指数、韭餐速度、应酬频率、食用油种类、是否食用海产品、是否有脂肪肝家族史及是否有高血压、血糖增高、血脂异常、ALT增高、AST增高、高尿酸血症、肥胖、高密度脂蛋白降低、低密度脂蛋白增高】8个方面的差异有统计学意义（P值均〈0．05）。非条件Logistic逐步回归分析结果显示，以上18个因素中有12个因素进入模型，其中肥胖（OR=6．35）、高血压（OR=3．82）、血脂异常（OR=2．95）、高密度脂蛋白降低（OR=2．85）、高血糖（OR=2．82）、ALT增高（OR=2．80）、高尿酸血症（ON=2．35）、HBsAg阳性（OR=1．99）、脂肪肝家族史（OR=1．79）及常吃海产品（OR=1．58）是NAFLD的危险凶素，而饮茶（OR=0．72）和经常运动（OR=0．90）则是NAFLD的保护因素。结论影响NAFLD发病的因素有多种，主要是生活方式，与遗传因素也有关。; 彭仙娥赖智双陆青青林建银林旭; 关键词：脂肪肝病例对照研究

乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对病毒自身调控序列的影响被引量：2: 2008年; 目的研究双剪接型2，2kb乙型肝炎病毒（HBV）剪接变异体特异性蛋白TPds对病毒自身调控序列的影响。方法PCR扩增6种HBV启动子／增强子序列，以Kpn I及Xho I位点克隆于pGL3-basic，分别构建萤火虫荧光素酶重组报告载体pGL3-BCP（含HBV基本核心启动子）、pGL3-CP1601（含增强子Ⅱ的核心启动子）、pGL3-XP（X基因最小启动子）、pGL3-XP1071（含增强子I的X基因启动子）、pGL3-SP1（表面抗原大蛋白基因启动子）、pGL3-SP2（表面抗原中蛋白基因启动子）。以FuGENE6将TPds表达载体pcDNA3.1／HisC-TPds或空白载体pcDNA3.1／HisC分别与6种HBV启动子／增强子报告载体共转染Huh7细胞，转染后48h裂解细胞并检测胞内萤火虫荧光素酶活性，实验重复5次，数据以SPSS11.5软件分析。结果在一定的质量比值范围内，与pcDNA3.1／HisC空白载体对照相比，pcDNA3.1／HisC-TPds分别与pGL3，CP1601、pGL3-XP1071、pGL3-SP1、pGL3-SP2共转染后，Huh7细胞内萤火虫荧光素酶活性增高，而pcDNA3.1／HisC-TPds分别与pGL3-BCP或pGL3-XP共转染后，胞内荧光素酶活性无变化。结论TPds蛋白可反式激活HBV启动子SP1、SP2和增强子I、Ⅱ，对基本核心启动子和X基因最小启动子无影响。; 陈婉南陈金烟王林林万松林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接反式激活增强子

乙型肝炎病毒458nt-1308nt剪接特异性蛋白抗α-干扰素作用被引量：2: 2008年; 目的研究乙型肝炎病毒（HBV）458nt-1308nt剪接特异性蛋白TSR′r′（源于HBVDNA聚合酶读码框，T代表TP区，S为Spacer区，R′为截短的RT区，r′为截短的RNaseH区）抗α-干扰素（IFN-α）作用并分析其功能区域。方法PCR扩增获得HBV458nt-1308t剪接变异体剪接特异性基因TSR′r′及其缺失突变体，并克隆于pcDNA3.1／HisC。重组载体以FuGENE6转染Huh7肝细胞，通过融合表达的多肽表位抗体，Western blot检测目的蛋白表达。TSR′r′及其缺失突变体重组载体分别与IFN-α反应报告载体p6-16CAT共转染Huh7肝细胞，转染后48h给予终浓度为100IU／ml的IFN-α2a刺激，作用24h后裂解细胞，检测胞内氯霉素乙酰基转移酶（CAT）含量。所有实验数据采用单因素方差分析法进行统计分析。结果构建TSR′r′及其缺失突变体重组真核表达载体，Western blot显示各基因片段在Huh7细胞中均表达相应蛋白。06-16CAT共转染结果显示，随着TSR′r′重组表达载体转染量的递增，Huh7胞内CAT值逐渐降低。此外，转染TP＋Spacer区的缺失突变体可导致Huh7胞内CAT值显著下降，而其他各类TSR′r′缺失突变体共转染后胞内CAT值无变化。结论HBV458nt-1308nt剪接特异性蛋白抑制Huh7细胞对IFN-α的反应性，其活性与N端的TP及Spacer区有关。; 王林黄清玲郭丹华陈婉南林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接 Α-干扰素 DNA聚合酶

乙型肝炎病毒X蛋白对MMPs及TIMPs的影响: 2007年; 目的全面分析乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)对基质金属蛋白酶(Matrix Metallo-proteinases,MMPs)及组织金属蛋白酶抑制物(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases,TIMPs)的影响,探讨其在肝细胞癌的侵袭转移中的可能作用。方法PCR扩增HBVX基因并克隆入真核表达载体pcDNA3.1/HisC,重组载体及空载体分别以Lipofectamine2000转染HepG2细胞并以800μg/mlG418筛选抗性细胞克隆。以Western blot检测抗性细胞HBx表达。抽提细胞总RNA,半定量RT-PCR检测MMPs及TIMPs。收集细胞培养液上清,以明胶酶谱检测MMP2及MMP9活性,反相明胶酶谱检测TIMPs活性。结果构建了HBx重组载体pcDNA3.1-XB。该重组载体及对照空载体转染HepG2细胞后,G418筛选,分别获得抗性细胞克隆HepG2-XB及HepG2-HIS,前者经Western blot证实可表达HBx。半定量RT-PCR显示HBx可促进MMP2、7、13、14、16、17、19、23、24及TIMP1、4基因的转录,抑制MMP1、3、8、9、10、11、12、15、20及TIMP2、3基因的转录。明胶酶谱检测显示HBx可促进酶原MMP2(Pro-MMP2)及活性MMP9(Active-MMP9)表达,抑制酶原MMP9(Pro-MMP9)表达;反相明胶酶谱显示HBx可促进TIMP1、TIMP4的表达,同时抑制TIMP2及糖基化TIMP3的表达。结论HBx蛋白对MMPs、TIMPs转录表达的影响是多方面的,但这种影响在HBx促进肝癌细胞侵袭转移过程中的确切机制有待进一步阐明。; 柏世玉黄清玲李晖王林郑瑾林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒基质金属蛋白酶组织金属蛋白酶抑制物

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