国家自然科学基金(30901753)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：杜秀平韩正祥王红梅徐杰张洁更多>>
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- 骨髓基质细胞对急性淋巴细胞白血病细胞化疗敏感性的影响被引量：3
- 2017年
- 目的探讨骨髓基质细胞及其细胞外基质成分和基质细胞因子对急性淋巴细胞白血病细胞Sup－B15阿糖胞苷（Ara－C）化疗敏感性的影响。方法构建急性淋巴细胞白血病细胞Sup－B15与骨髓基质细胞OP9共培养模型。将Sup－B15细胞分为Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组、Sup－B15单独培养组、Sup－B15与OP9共培养液组、OP9单独培养液组和Sup－B15单独培养液组。采用细胞计数盒8法观察不同浓度的Ara－C对各组Sup－B15细胞增殖活力的影响；采用流式细胞仪检测Ara－C对各组Sup－B15细胞凋亡的影响；采用Western blot法检测各组Sup－B15细胞中bcl－2蛋白的表达情况。结果CCK－8法检测结果显示，随着Ara－C浓度的增加，Ara－C对Sup－B15细胞的抑制率也随之增强。不同浓度Ara－C处理各组Sup－B15细胞48 h，Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组的IC50分别为0.510和0.339 μg/ml，均明显高于Sup－B15单独培养组的IC50（0.091 μg/ml，P〈0.05）。Sup－B15与OP9共培养液组的IC50为0.204 μg/ml，明显高于OP9单独培养液组（0.087 μg/ml，P〈0.05）和Sup－B15单独培养液组的IC50值（0.097 μg/ml，P〈0.05）。流式细胞仪检测结果显示，0.1 μg/ml Ara－C处理各组Sup－B15细胞24 h后，Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组、Sup－B15单独培养组的早期凋亡细胞百分数分别为（6.67±2.19）%、（8.95±3.04）%和（20.46±2.63）%，Sup－B15与OP9共培养组、Sup－B15与灭活的OP9共培养组的早期凋亡细胞百分数均明显低于Sup－B15单独培养组，差异有统计学意义（P〈0.05）。Sup－B15与OP9共培养液组、OP9单独培养液组和Sup－B15单独培养液组的早期凋亡细胞百分数分别为（11.16±2.97）%、（22.08±2.71）%和（19.25±1.57）%，Sup－B15与OP9共培养液组的早期凋亡细胞百分数明显低于Sup－B15单独培养液组，差异有统
- 王燕韩正祥张敬川
- 关键词：白血病细胞骨髓基质细胞微环境耐药
- 人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中肿瘤干细胞亚群相关基因表达差异的初步研究被引量：1
- 2015年
- 目的 在无血清培养液悬浮培养条件下筛选人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231的干细胞相关亚群,并初步探讨其相关基因的表达差异.方法 采用有血清贴壁和无血清悬浮培养方法,扩增出贴壁细胞和悬浮微球体细胞两种肿瘤细胞.采用流式细胞术检测MCF-7、MDA-MB-231贴壁及悬浮微球体细胞中CD44＋ CD24-、CD133＋表型细胞比例的变化.反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测两组贴壁及悬浮微球体细胞中CD44、CD24、CD133、ALDH3A1、ABCG2、CXCR4基因的表达变化.结果 MCF-7微球体细胞的CD44＋ CD24-/ low细胞比例高于其贴壁培养细胞（P＜0.05）;CD133＋细胞比例同其贴壁培养细胞差异无统计学意义（P＞0.05）.MDA-MB-231微球体细胞的CD44＋ CD24-/low细胞比例低于其贴壁培养细胞（P＜0.05）;CD133＋细胞比例高于其贴壁培养细胞（P＜0.05）.MCF-7微球体细胞中CD44、ABCG2的表达较其贴壁细胞上调（均P＜0.05）,CD24、CD133、ALDH3A1、CXCR4表达与其贴壁细胞相比,差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）.MDA-MB-231微球体细胞中CD24、CD133、ABCG2、ALDH3A1、CXCR4表达较其贴壁细胞上调（均P＜0.05）,CD44表达下调（P＜0.05）.MCF-7和MDA-MB-231微球体细胞中CD44、CD24、CD133、ALDH3A1表达差异有统计学意义（均P＜ 0.05）.结论 乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞系微球体中乳腺癌干细胞相关基因的表达存在差异,提示不同分子亚型乳腺癌干细胞的来源可能不同.
- 韩正祥张洁徐杰杜秀平
- 关键词：肿瘤干细胞细胞系微球体
- GST-NRP-1融合蛋白的原核表达及纯化被引量：1
- 2015年
- 目的:构建带有GST标签的人NRP-1融合蛋白原核表达载体,在大肠埃希菌(E.coli)中诱导其表达,并进行包涵体的复性及纯化。方法:利用RT-PCR扩增人NRP-1基因,将其克隆至p CR-blunt载体,酶切制备NRP-1基因片段,插入表达载体p GEX-4T-1,生成p GEX-4T-1-NRP-1,转入BL21感受态细胞以IPTG诱导其蛋白的表达。裂解细菌后行Western blot检测GST-NRP-1融合蛋白的表达,表达的包涵体经复性后用Glutathione Sepharose 4B纯化。结果:RT-PCR扩增出NRP-1基因并连入p CR-blunt载体;经亚克隆构建了融合蛋白表达载体p GEX-4T-1-NRP-1。转入BL21感受态细胞后考马斯亮蓝染色检测到GST-NRP-1融合蛋白的表达,经包涵体复性后得到纯化的融合蛋白。结论:成功构建带有GST标签的人NRP-1融合蛋白原核表达载体,为进一步研究NRP-1的结构、功能及其与之相互作用的蛋白奠定了基础。
- 韩正祥张梦瑾徐杰王红梅杜秀平陈翀徐开林
- 关键词：NRP-1原核表达融合蛋白纯化
- 靶向神经纤毛蛋白-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及对人T淋巴瘤细胞靶基因沉默作用
- 2015年
- 目的 构建靶向神经纤毛蛋白-1（NRP-1）基因的RNA干扰慢病毒表达载体[pLB-NRP-1/短发卡RNA（shRNA）],并观察其对人T淋巴瘤Jurkat细胞靶基因NRP-1的沉默效应.方法设计、合成3对人NRP-1的特异性干扰序列（NRP-1/shRNA1-3）和1对非特异性对照序列（NRP-1/shRNA4）,分别亚克隆至经Hpa Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切线性化的慢病毒载体pLB中,得到pLB-NRP-1/shRNA重组慢病毒质粒;经酶切和测序鉴定成功后,与包膜质粒pCMV△8.91、被摸蛋白质粒pMD.G重组并包装成为慢病毒表达载体;将其感染至Jurkat细胞;分选阳性细胞后应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测对NRP-1 mRNA和蛋白表达的沉默效应.结果 酶切和测序结果证实3个靶向NRP-1基因的慢病毒载体构建成功,包装成慢病毒滴度可达108 IU/ml;感染Jurkat细胞后,NRP-1 mRNA表达量分别下降了95.9％、92.3％、87.1％,NRP-1蛋白的表达量分别下降了33.8％、29.7％、17.9％,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,shRNA1为最佳干扰靶序,pLB-NRP-1/shRNA1为最佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结论 成功构建慢病毒表达载体可高效感染体外培养的人Jurkat细胞株,并可显著抑制靶基因NRP-1 mRNA和蛋白的表达.
- 王红梅张梦瑾徐振媛杜秀平韩正祥
- 关键词：RNA干扰短发卡RNA慢病毒载体神经纤毛蛋白-1T淋巴瘤
- 塞来昔布体外抑制三阴性乳腺癌干细胞的研究
- 2013年
- 目的研究选择性COX-2抑制剂塞来昔布对三阴性乳腺癌干细胞体外增殖、凋亡、侵袭和黏附作用的影响,并初步探讨其发生机制。方法 CCK-8法检测细胞增殖活性;AV-PI双染法测定三阴性乳腺癌细胞凋亡率;用细胞黏附实验检测干预后干细胞的黏附抑制情况;Transwell侵袭实验检测塞来昔布对干细胞的侵袭抑制。结果塞来昔布可诱导三阴性乳腺癌干细胞凋亡,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度组间比较以及同一浓度不同时间组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞黏附实验显示,各实验组细胞黏附Matrigel凝胶的能力与对照组比较均明显降低,Transwell实验显示,各实验组侵袭细胞数与对照组相比均明显减少,实验组与对照组之间以及实验组各亚组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论选择性COX-2抑制剂塞来昔布体外可抑制三阴性乳腺癌干细胞体外增殖、侵袭、黏附和诱导其凋亡,其抑制作用与药物浓度和持续时间有关。
- 韩正祥魏艳红张宇明耿杰张洁杜秀平
- 吉西他滨联合培美曲塞不同序贯用药时序对HUT-78细胞增殖及凋亡的影响
- 2013年
- 目的观察吉西他滨与培美曲塞单药及不同时序联合用药方案对人皮肤T细胞淋巴瘤HUT-78细胞增殖及凋亡的影响。方法采用体外培养技术,应用不同浓度的吉西他滨及培美曲塞处理HUT 78细胞,CCK-8法确定两药的IC50值,后应用CCK-8法及Annexin V-FITC法检测两药不同顺序联合应用对HUT-78细胞增殖及凋亡的影响。结果吉西他滨及培美曲塞单药对HUT-78细胞的增殖的抑制具有时间依赖性及浓度依赖性,吉西他滨的IC50值为(7.50±0.71)×10-3μg/ml,培美曲塞的IC50值为(1.72±0.52)μg/ml。不同顺序药物联合应用效果不同,先用培美曲塞后用吉西他滨及同时应用具有协同作用,抑制率及凋亡率均较各单药组高,而先用吉西他滨后用培美曲塞则无协同作用。结论吉西他滨与培美曲塞单药以及不同时序联合应用均可抑制HUT-78的增殖促进凋亡,作用大小与应用时序有关,先用培美曲塞再用吉西他滨的作用最强。
- 韩正祥赵琳玉杜秀平
- 关键词：吉西他滨培美曲塞皮肤T细胞淋巴瘤
- 沉默NRP-1基因对人T细胞白血病Jurkat细胞株增殖与凋亡的影响被引量：4
- 2015年
- 目的:探讨RNAi沉默NRP-1基因对人T细胞白血病细胞株增殖与凋亡的影响。方法:将我们前期构建好的p LB-NRP-1/shRNA重组慢病毒质粒,感染至Jurkat细胞中,用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况及化疗药物表柔比星(EPI)处理后细胞增殖情况;用AV/PI法结合流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期。结果:细胞增殖结果:在48、72、96 h时间点NRP-1/shRNA干扰组的OD值均低于相应对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);细胞凋亡率结果:与对照组比较,NRP-1/shRNA干扰组细胞的凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);对化疗药物表柔比星(EPI)敏感性检测结果:EPI浓度为0.025、0.05、0.1、0.2、0.4μg/ml时,NRP-1/shRNA干扰组的细胞生长抑制率较相应对照组高,差异皆有统计学意义(P<0.05),并且选择IC50进行EPI诱导后,NRP-1/shRNA干扰组的细胞凋亡率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);WB结果显示:与对照组相比,NRP-1/shRNA干扰组Bcl-2蛋白的表达水平明显下降,Bax的表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞周期结果:与对照组比较,NRP-1/shRNA干扰组G0/G1期细胞的比例增高,S期细胞的比例明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:RNAi沉默NRP-1基因可抑制Jurkat细胞增殖,促进其凋亡,提高对化疗药物的敏感性,其机制可能涉及Bcl-2/Bax途径的调节;并可将细胞周期阻滞在G0/G1期,降低细胞的增殖水平,诱导细胞进入凋亡期。
- 王红梅徐振媛杜秀平李滔涛韩正祥
- 关键词：NRP-1慢病毒载体T细胞白血病化疗药物敏感性
