国家高技术研究发展计划(2005AA218080)
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 相关作者：曹诚马清钧李平刘萱靳彦文更多>>
- 相关机构：军事医学科学院解放军第306医院安徽大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划病原微生物生物安全国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- α2-Heremans-Schmid糖蛋白基因多态性与其血清含量的关联研究
- 2010年
- 目的 探讨α2-Heremans-Schmid糖蛋白（α2-Heremans-Schmid glycoprotein,AHSG）基因单核苷酸多态（single nucleotide polymorphism,SNP）与其血清含量的相关性及其参与调节基因转录的机制.方法 对AHSG基因进行重测序,构建连锁不平衡模式,选择标签SNP在192名北京汉族和424名广州汉族个体中进行了基因分型;应用报告基因荧光素酶活性检测不同等位基因的转录活性;应用酶联免疫吸附试验检测北京地区192名个体血清中AHSG的浓度.结果 AHSG重测序共检出8个SNP,连锁不平衡分析显示广州和北京地区人群的连锁不平衡模式不同,但选择的标签SNP和具有潜在功能的SNP的等位基因和基因型频率分布在两组人群中差异无统计学意义.荧光素酶活性实验结果显示,AHSG基因启动子区-799A等位基因比-799T等位基因的转录活性高;多态性位点rs2248690、rs4917和rs4918与血清中AHSG的含量存在相关性;多元回归分析结果表明只有rs2248690与AHSG含量存在相关性.结论 位于AHSG基因启动子区的rs2248690位点与其血清中含量存在相关性.
- 王艳侯艳王春枝朱晓辉朱丽娜杨晓曹诚
- 关键词：单核苷酸多态性血清浓度
- 冠状病毒核衣壳蛋白与延伸因子-1α的相互作用被引量：1
- 2007年
- 目的:分析SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白(N蛋白)和229E冠状病毒(HCoV-229E)核衣壳蛋白与细胞延伸因子(EF)-1α的相互作用、翻译抑制效应及与多核细胞形成的关系。方法:构建、表达及纯化SARS-N蛋白和229E-N蛋白的GST融合蛋白,用GST-pull down方法分析其与过表达的EF-1α及内源EF-1α之间的相互作用;构建和表达SARS-N蛋白和229E-N蛋白的GFP融合表达载体,转染293T细胞,通过共聚焦显微镜分析SARS-N蛋白和229E-N蛋白的亚细胞定位及多核细胞的形成;在293T细胞中过表达SARS-N蛋白或229E-N蛋白,通过Co-IP分析其与EF-1α的相互作用。分别在细胞内和体外翻译系统中分析二者抑制报告基因翻译的程度。结果:SARS-N蛋白和229E-N蛋白都定位于细胞质,并不像其他冠状病毒的N蛋白那样定位到细胞核;二者都能诱导形成多核细胞,但229E-N蛋白导致细胞形成多核细胞的时间要晚;二者都能与EF-1α相互作用并且共定位于细胞质,二者都能导致EF-1α形成多聚体;二者在细胞内及细胞外对报告基因都有抑制翻译效应。结论:SARS冠状病毒和229E冠状病毒的核衣壳蛋白均定位于细胞胞质,可与EF-1α相互作用,导致EF-1α形成多聚体,抑制报告基因翻译及导致细胞形成多核。
- 王秋娜周冰刘萱杨尧李晓明陈亮靳彦文李平马清钧曹诚
- 关键词：SARS冠状病毒核衣壳蛋白多聚体
- 细胞色素氧化酶P450(CYP4F3A)的纯化及动力学研究被引量：3
- 2009年
- 目的:纯化细胞色素氧化酶P450(CYP4F3A)以及测定酶促反应动力学参数。方法:应用免疫共沉淀技术纯化CYP4F3A酶,通过LTB4降解实验测定其米氏常数。结果:纯化的CYP4F3A浓度为0.12 mg/ml,Km=2.643±0.106μmol/L,Vmax=24.97±1.163 nmol/(min.nmol)。结论:获得从哺乳动物细胞中纯化的CYP4F3A具有较强LTB4降解活性,并通过测定其酶动力学常数,为研究CYP4F3A活性调节机制打下基础。
- 蔡瑜刘萱杨尧李平曹诚张部昌
- 关键词：细胞色素P450酶系统白三烯B4酶联免疫吸附测定米氏常数
- 胎球蛋白A的纯化及其对3T3-L1脂肪细胞胰岛素通路的抑制作用被引量：6
- 2010年
- 目的对胎球蛋白A(AHSG)蛋白进行纯化,并探讨其对脂肪细胞胰岛素通路的调节作用。方法通过硫酸铵沉淀、PEG沉淀、DEAE离子交换和Protamine亲和层析方法纯化血浆中的AHSG蛋白。培养3T3-L1前脂肪细胞并分化为成熟脂肪细胞,置于低糖DMEM培养基培养,然后加入终浓度为100μg/ml和600μg/ml的AHSG及终浓度为600μg/ml的人白蛋白(HAS)分别进行培养,最后用不同浓度(0、10、20nmol/L)的胰岛素刺激细胞。采用Western blotting检测AHSG和HSA对3T3-L1脂肪细胞胰岛素下游分子IRS-1和Akt的磷酸化水平的影响。结果从血浆中纯化的AHSG蛋白纯度达90%以上。纯化的AHSG在100μg/ml浓度下可以减弱胰岛素对IRS-1蛋白磷酸化的影响,在600μg/ml浓度下可以完全抑制IRS-1蛋白磷酸化;纯化的AHSG在100μg/ml浓度下可以减弱胰岛素对Akt蛋白磷酸化的影响,在600μg/ml的浓度下可以明显抑制Akt蛋白的磷酸化,而600μg/ml的HAS则不能抑制IRS-1和Akt蛋白的磷酸化。结论从血清中纯化出的AHSG在生理浓度下可以抑制胰岛素对3T3-L1细胞中IRS-1和Akt蛋白的磷酸化作用,在脂肪细胞胰岛素通路中扮演着重要角色。
- 陈婷靳彦文瞿秀华崔艳李大培何章荣朱晓辉曹诚
- 关键词：胎球蛋白A胰岛素蛋白激酶类
- 严重急性呼吸系统综合征冠状病毒N蛋白对甘油三酯和总胆固醇含量的影响
- 2010年
- 目的:研究严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白对甘油三酯和总胆固醇含量的影响。方法:检测分析144例SARS患者甘油三脂和总胆固醇含量在发病后的变化;将小鼠随机分组,分别注射生理盐水和SARS-CoV N蛋白,连续给药9 d后检测小鼠血清中甘油三酯和总胆固醇含量的变化。结果:SARS患者的甘油三酯和总胆固醇含量随发病时间有升高变化(P<0.05),在发病40 d前后甘油三酯和总胆固醇含量超标的病例数占本时间段内的病例数的比例显著高于其他时间段,而且超标的含量也明显升高。SARS-CoV N蛋白使小鼠体重明显高于对照组(P<0.05),甘油三酯含量在39和51 d明显高于对照组(P<0.05),总胆固醇含量在21和39 d也明显高于对照组(P<0.05)。结论:SARS-CoV N蛋白可以升高小鼠的甘油三酯和总胆固醇的含量,其升高最为明显的时间段与SARS患者的甘油三酯和总胆固醇含量升高的时间段基本一致。由此推测,SARS-CoV N蛋白可能是促使SARS患者发病后甘油三酯和总胆固醇含量升高的重要原因。
- 陈婷王德刚李平刘萱李晓明彭莉曹诚
- 关键词：严重急性呼吸系统综合征冠状病毒N蛋白甘油三酯总胆固醇
- SARS-CoV N蛋白和MAP19的相互作用被引量：6
- 2009年
- 目的:研究SARS-CoV N蛋白与MAP19之间的相互作用。方法:利用免疫共沉淀试验验证SARS-CoV N蛋白与MAP19的相互作用,并利用Western blot检测SARS-CoV N蛋白对MAP19表达量的影响。结果:SARS-CoV N蛋白与MAP19能够在细胞内相互作用,且SARS-CoV N能够显著提高MAP19的表达量。结论:SARS-CoV N蛋白与MAP19能够在细胞内形成复合物,将为进一步研究SARS-CoV N蛋白与MAP19相互作用的生物学功能提供实验基础。
- 刘俊丽曹诚马清钧
- 关键词：SARS-COVN相互作用
- SARS冠状病毒核衣壳蛋白抑制胞质分裂和细胞增值被引量：1
- 2006年
- 目的:SARS冠状病毒(SARS-CoV)的核衣壳蛋白(N蛋白)能够结合病毒RNA形成螺旋状的核衣壳。在3种不同的细胞系中分别表达SARS-CoVN蛋白,研究它对转染细胞生长的影响。方法:将重组质粒pEGFP-N和pEGFP(作为对照)分别转染人胚肾HEK293细胞、成纤维细胞3T3、人宫颈癌HeLa细胞,通过激光共聚焦显微镜、荧光显微镜观察SARS-CoVN蛋白在细胞内的定位以及细胞的生长变化。结果:SARS-CoVN蛋白能定位于细胞质,并不像其他冠状病毒N蛋白那样能够定位到细胞核。同时发现SARS-CoVN蛋白能够诱导形成多核细胞,多核细胞的百分率可达33.9%。结论:SARS-CoVN蛋白抑制胞质分裂,延缓细胞生长。
- 刘俊丽冯怡李楚芳曹诚马清钧
- 关键词：SARS冠状病毒核衣壳蛋白
