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黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11531077)

作品数：5 被引量：4H指数：1
相关作者：钟照华赵文然林乐勋陈晓凤王燕更多>>
相关机构：哈尔滨医科大学内蒙古民族大学更多>>
发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生

主题

  • 3篇柯萨奇
  • 3篇柯萨奇病毒
  • 3篇病毒
  • 2篇B组柯萨奇病...
  • 1篇蛋白
  • 1篇毒力
  • 1篇心肌
  • 1篇心肌细胞
  • 1篇易感
  • 1篇易感性
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光蛋白
  • 1篇诱变
  • 1篇稳定性分析
  • 1篇细胞
  • 1篇柯萨奇病毒B...
  • 1篇基因
  • 1篇基因重组
  • 1篇基因组
  • 1篇肌细胞

机构

  • 3篇哈尔滨医科大...
  • 1篇内蒙古民族大...

作者

  • 3篇赵文然
  • 3篇钟照华
  • 2篇张凤民
  • 1篇钟学宽
  • 1篇沃晓嫚
  • 1篇王博
  • 1篇武帅钦
  • 1篇佟雷
  • 1篇张淑娟
  • 1篇张中海
  • 1篇林乐勋
  • 1篇李晓波
  • 1篇王燕
  • 1篇李倩
  • 1篇张燕芳
  • 1篇范徐妃
  • 1篇包琳

传媒

  • 2篇微生物与感染
  • 1篇中国地方病学...

年份

  • 1篇2012
  • 1篇2011
  • 1篇2010
共 5 条 记 录，以下是 1-3
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排序方式：
5＇非编码区嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型毒力的影响被引量：1
2010年
目的 观察5＇非编码区（5＇UTR）嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型（CVB1）毒力和致病性的影响.方法 定点诱变将CVB1基因组5＇UTR第563～573碱基嘧啶富集区5个嘧啶置换为嘌呤,获得突变株CVB1/m563-573.空斑纯化病毒后,利用细胞病变效应（CPE）试验、空斑形成试验、一步生长曲线和半数致死量（LD50）等方法比较CVB1/m563-573与其原型株CVB1/wt的毒力.结果 测序结果显示,CVB1/m563-573的5＇UTR嘧啶富集区发生C565A、U567C、U568A、U570A、U572G突变,与预期一致.CPE试验表明,CVB1/m563-573的感染性较CVB1/wt稍弱（A 490分别为0.710±0.074、0.812±0.092）,但差异无统计学意义（t=-2.204,P〉0.05）.空斑形成试验显示,46、58 h时间点CVB1/m563-573形成空斑的数量为（6.40±1.52）×103、（11.60±2.19）×103 pfu（空斑形成单位）/L,直径为（2.00±0.35）、（2.47±0.41）mm,CVB1/wt的空斑数量为（8.40±2.51）×103、（11.80±1.92）×103 pfu/L,直径为（1.80±0.27）、（2.85±0.44）mm,二者比较差异无统计学意义（t值分别为8.000、0.985、10.000、9.000,P均〉0.05）.一步生长曲线法显示,经过3、5、7 h的扩增,CVB1/m563-573所得的活病毒颗粒数（×103 pfu/L）的常用对数（lg）分别为2.10±0.09、4.28±0.03、7.44±0 CVB1/wt的活病毒颗粒数（×103 pfu/L）的lg值分别为2.80±0.02、4.77±0.02、8.55±0.01.CVB1/m563-573株在3个时间点均较CVB1/wt复制显著慢（t值分别为-13.151、-24.319、-47.714,P均〈0.01）.CVB1/m563-573和CVB1/wt的LD50分别为3.10×109、1.26×107 pfu/L,CVB1/m563-573致病力较CVB1/wt明显减弱.结论 减少5＇UTR嘧啶富集区的嘧啶碱基数量可致CVB1的感染和毒力减弱,该位点突变可能是研发CVB减毒活疫苗的策略之一.
钟照华包琳李倩张燕芳范徐妃李晓波张凤民赵文然
关键词：肠道病毒属诱变毒力
H9c2细胞对B组柯萨奇病毒3型重组株的易感性
2011年
H9c2细胞是来源于大鼠胚胎心脏组织的成肌细胞系,B组柯萨奇病毒(group B Coxsackievirus,CVB)是心肌炎和扩张型心肌病的主要病原。本研究观察了CVB3在H9c2细胞中的感染性,探讨H9c2细胞是否可用于CVB致心肌疾病的实验研究。用整合了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或海肾荧光素酶(RLuc)的CVB3重组株EGFP-CVB3、RLuc-CVB3攻击H9c2细胞及大、小鼠原代心肌细胞和骨骼肌细胞,应用荧光显微镜、流式细胞术和化学发光技术观察感染细胞的EGFP和RLuc表达,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测病毒在核酸水平的表达。结果显示,在病毒攻击的H9c2细胞未检测到EGFP和RLuc表达;RT-PCR显示在CVB3感染9 d后检测不到CVB3 RNA;CVB3毒株可感染小鼠心肌细胞、骨骼肌细胞和大鼠心肌细胞,但不感染大鼠骨骼肌细胞和H9c2细胞。本研究结果表明,H9c2细胞不是CVB3易感细胞,不能用于CVB3致心肌疾病的研究;该结果从病毒感染方面也支持H9c2具有大鼠骨骼肌细胞表型。
林乐勋赵文然武帅钦佟雷王燕张凤民钟照华
关键词：H9C2细胞心肌细胞骨骼肌细胞
表达红色荧光蛋白重组柯萨奇病毒B组3型基因组稳定性分析被引量：1
2012年
本文旨在分析含红色荧光蛋白mCherry基因的重组柯萨奇病毒B组3型(CVB3)基因组的稳定性。用重组质粒pCVB3-mCherry转染HeLa细胞,观察细胞病变和mCherry的表达。收获病毒后,用噬斑形成实验纯化病毒并测定病毒毒力。将重组病毒CVB3-mCherry在HeLa细胞中连续传代,提取第2～6代重组病毒总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出报告基因mCherry及CVB3部分序列,进行测序分析。结果表明,pCVB3-mCherry转染的HeLa细胞出现细胞病变并表达红色荧光蛋白mCherry;从第2代开始,CVB3-mCherry出现报告基因mCherry及部分CVBVP4基因序列丢失,基因序列丢失导致病毒开放读码框架移位。本研究表明,mCherry基因序列的插入导致CVB3基因组不稳定。随着病毒的传代逐渐丢失插入的报告基因mCherry及CVB3基因组的部分序列,病毒读码框架移位,产生致死性突变株。因此,应用CVB3-mCherry时,病毒的传代次数不超过2代,否则应重新从重组质粒中收获病毒,并对每代重组病毒进行纯化和毒力测定。
赵文然钟学宽张淑娟沃晓嫚张中海王博钟照华
关键词：柯萨奇病毒B组3型红色荧光蛋白MCHERRY基因重组
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