国家自然科学基金(30672165)
- 作品数：16 被引量：63H指数：4
- 相关作者：尤永平傅震刘宁石磊赵鹏更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院天津医科大学总医院天津市神经病学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省医学重点人才培养基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Notch信号通路在脑胶质瘤中的研究进展被引量：1
- 2008年
- Notch信号通路通过细胞间受体及配体作用介导信号转导,在系统发育及肿瘤发生、发展等生理病理过程中发挥重要作用。Notch信号通路在脑胶质瘤方面也被广泛研究,Notch配体、受体及其下游基因在脑胶质瘤中都有不同程度的增高,且与胶质瘤级别呈一定的相关性。选择性抑制Notch信号通路,胶质瘤细胞生长受抑、凋亡增加,肿瘤动物模型存活时间延长。最近研究还发现Notch的配体之一DLL4(Deltalike-4)可以抑制肿瘤血管内皮细胞增殖,调控肿瘤血管形成,成为潜在的胶质瘤治疗靶点。
- 钱春发尤永平
- 关键词：NOTCH胶质瘤DLL4血管生成
- 靶向miR-221 siRNA表达载体的构建及有效靶序列的筛选和表达
- 2009年
- 目的构建靶向miR-221的siRNA表达载体,同时筛选出一条抑制效率最好的靶序列,为研究RNAi在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础。方法根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接入siRNA表达质粒pGCSIL-GFP,同时构建miR-221表达载体pEGFP-miR-221,共同转染293T细胞,Western blot检测转染后293T细胞中Flag蛋白表达,间接反映各靶序列抑制效率,最后将筛选出的抑制效率最好的质粒转染U87胶质瘤细胞,应用细胞增殖曲线及流式细胞仪检测其对U87细胞生长的影响。结果重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,并筛选出1号靶序列对miR-221抑制率最高,该组Flag蛋白的表达量仅为对照组的34.3%,同时该序列能有效抑制U87胶质瘤细胞的生长并诱导细胞凋亡,凋亡率达21.89%。结论成功构建了靶向miR-221的siRNA表达载体,并筛选出一个抑制效率最好的序列,在体外实验中该序列能有效抑制U87细胞的生长。
- 赵鹏傅震尤永平陆小明鲁艾林刘宁
- 关键词：MIR-221RNAI
- OPN基因RNAi对U87胶质瘤细胞生长和侵袭的抑制作用被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨靶向骨桥蛋白基因(osteopontin,OPN)的siRNA片段对U87胶质瘤细胞生长和侵袭力的影响及其可能的作用机制。方法:根据OPN基因序列设计并合成的siRNA片段(OPN-RNAi)转染U87细胞。MTT法检测U87细胞增殖;Western blotting检测OPN及基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)2、MMP9蛋白的表达;Transwell小室侵袭实验检测U87细胞的侵袭力;明胶酶谱法检测MMP2、MMP9的酶活性。结果:体外合成的OPN-RNAi能有效抑制U87细胞中OPN蛋白的表达(P<0.05),OPN-RNAi同时还能下调MMP2、MMP9蛋白的表达(P<0.05)及其酶活性(P<0.01),并抑制U87细胞的增殖(P<0.05)和侵袭力(P<0.05)。结论:OPN-RNAi能够有效抑制U87胶质瘤细胞的生长及其侵袭力,其机制与其抑制OPN下游基因MMP2、MMP9的表达和酶活性有关。
- 赵鹏陆小明鲁艾林陈云祥刘宁傅震
- 关键词：RNAI基质金属蛋白酶
- miR-181家族的表达与人脑胶质瘤恶性程度的关系被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨miR-181家族,miR-181a、miR-181b和miR-181c,在不同恶性程度的人脑胶质瘤中的表达。方法:收集病理确诊的15例不同恶性程度胶质瘤以及5例正常脑组织手术标本,提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181a、miR-181b和miR-181c基因在人脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达,并进一步比较miR-181家族表达情况与不同级别胶质瘤的相关性。结果:miR-181a和miR-181b,在人脑不同级别胶质瘤中表达均明显下降。miR-181a表达水平呈随胶质瘤级别增高而下降趋势。miR-181b在胶质瘤级别Ⅲ级以上表达水平趋于稳定,Ⅲ级和Ⅳ级组织中的表达无明显差异。miR-181c表达量在正常脑组织与胶质瘤Ⅱ级和Ⅲ级组织间差异不显著,在胶质瘤Ⅳ级组织miR-181c表达水平降低。结论:miR-181a、miR-181b和miR-181c在胶质瘤组织中呈不同程度低表达,miR-181a表达与胶质瘤级别呈负相关。
- 石磊程子昊张军霞李瑞尤永平傅震
- 关键词：微RNA实时荧光定量PCR胶质瘤
- 荧光定量PCR检测脑胶质瘤中miR-125b被引量：2
- 2011年
- 背景与目的:从分子水平研究胶质瘤,为临床提供可能的诊断和治疗靶基因已十分必要。本实验拟建立检测荧光定量PCR的方法,了解脑胶质瘤中miR-125b的表达水平及其与肿瘤恶性程度的关系。方法:从18例不同恶性程度胶质瘤组织和6例正常脑组织标本提取总的microRNA,然后通过反转录的方法得到c-DNA,再用带荧光探针的miR-125b引物进行荧光定量PCR检测,测出其CT值,通过2-△△CT的相对定量的方法对荧光定量PCR检测的CT值进行标准化,从而比较miR-125b在正常脑组织和胶质瘤中的表达情况。结果:正常脑组织相对表达量为1.0732±0.1225,胶质瘤II、III、IV分别为0.7914±0.06 752、0.53 92±0.08180、0.2497±0.05065,并且之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过荧光定量PCR技术测定miR-125b在脑胶质瘤中表达下调,且与脑胶质瘤恶性程度成负相关,为研究miR-125b表达水平下调的机制、表达水平和肿瘤预后的关系,为利用miR-125b对胶质瘤的诊断和个性化治疗打下基础。
- 朱海峰耿晓增沈洲明伏承平尤永平程刚傅震
- 关键词：胶质瘤荧光定量PCR
- 骨桥蛋白与胶质瘤关系的研究进展
- 2009年
- 骨桥蛋白（OPN）是一种分泌型、黏附性的磷酸化糖蛋白，广泛分布于体内多种组织和细胞内。OPN在多种恶性肿瘤组织的表达明显上调。脑胶质瘤是一种低分化瘤，恶性度高，外科手术和其他辅助治疗都无法达到生物学切除或杀灭，残余的肿瘤细胞极易复发。近年来，随着分子生物学的发展及对胶质瘤研究的深入，发现OPN与胶质瘤的发生发展有着十分密切的关系。
- 吴绮鋆尤永平
- 关键词：骨桥蛋白胶质瘤
- 微RNA与神经胶质瘤的关系
- 2007年
- 近来研究表明，某些微RNA（microRNAs，miRNA）在不同组织分型的胶质瘤中呈特异性表达，通过上调或下调相应的miRNA可诱导胶质瘤细胞的凋亡或抑制其增殖。应用微阵列技术分析不同胶质瘤中miRNA表达谱将有助于进一步探讨胶质瘤发生发展的机制，实现胶质瘤的个性化诊断，探索miRNA为靶点的胶质瘤基因治疗的可行性。
- 石磊尤永平傅震
- 关键词：微RNAS神经胶质瘤微阵列分析基因疗法
- 慢病毒介导的靶向骨桥蛋白的siRNA对人脑胶质瘤细胞侵袭和凋亡的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究骨桥蛋白（osteopontin，OPN）下调后对胶质瘤细胞侵袭和凋亡的影响。方法在体外以慢病毒介导的OPN小干扰RNA（smallinterference，siRNA）感染胶质瘤细胞系U251细胞，实时PCR和Western印迹检测OPN表达。通过Transwell实验、流式细胞仪检测，观察OPN表达下调后对胶质瘤细胞侵袭和细胞凋亡的影响。结果慢病毒介导的OPNsiRNA感染能显著降低U251细胞0PNmRNA水平及蛋白表达，有效抑制U251细胞侵袭能力，并诱导其凋亡，0PNsiRNA感染组中Bcl-2、尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）、MMP-2和MMP-9明显减少，Bax显著增多。结论慢病毒介导的0PNsiRNA可显著抑制U251细胞的侵袭，并促进其凋亡。
- 颜伟钱春发石磊钱进傅震刘宁鲁艾林尤永平
- 关键词：骨桥蛋白小干扰RNA凋亡
- 骨桥蛋白剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨骨桥蛋白(OPN)剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响及其作用机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应或逆转录-聚合酶链反应分别检测正常脑组织、WHOⅡ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及人胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44和TJ905骨桥蛋白各剪接变体表达水平;小干扰RNA(siRNA)技术沉默野生型骨桥蛋白,慢病毒质粒表达载体分别导入三种突变型剪接变体OPN-a、OPN-b和OPN-c;细胞体外侵袭实验检测U251和U87细胞体外侵袭力。整合素α_vβ_3受体抗体和磷脂酰肌醇3-激酶(PI_3K)抑制剂LY294002抑制骨桥蛋白的作用,阻断PI_3K/Akt信号转导通路。Western blotting法检测侵袭相关蛋白尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,以及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT磷酸化水平和核因子-κB(NF-κB)p65转录进入细胞核水平,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性。结果 WHOⅢ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及U251和U87细胞骨桥蛋白各剪接变体呈高表达,而正常脑组织、WHOⅡ级胶质瘤组织及SHG44和TJ905细胞呈低表达。OPN-a和OPN-c可升高U251和U87细胞AKT磷酸化水平,诱导NF-κB p65转录进入细胞核,提高uPA、MMP-2和MMP-9表达水平,增强MMP-2和MMP-9活性,从而增强胶质瘤细胞侵袭力;OPN-b对胶质瘤细胞侵袭力无明显作用。结论 OPN-a和OPN-c通过激活PI_3K/Akt/NF-κB信号转导通路而增强胶质瘤细胞侵袭力。
- 钱春发颜伟赵鹏张军霞李瑞石磊孙关孙利华钱进傅震刘宁尤永平
- 关键词：骨桥蛋白质剪接体神经胶质瘤
- 反义miR-21抑制异种移植U87人脑胶质瘤生长的体内研究被引量：11
- 2008年
- 目的探讨敲低miR-2，表达抑制裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤生长的疗效和机制。方法原位注射miR-21反义寡聚核苷酸（AS—miR-2I）台疗裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤，定时测量肿瘤大小评估原位注射AS—miR-21的治疗效果，使用RT—PCR和原位杂交方法鉴定治疗后miR-2，表达水平．采用HE染色和免疫组织化学染色（增殖细胞核抗原、细胞周期抑制因子-21、基质金属蛋白酶-9和隔蛋F1—7）评价治疗后肿瘤生物学性状的变化，TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果肿瘤生长曲线显示AS—miR-21治疗组肿瘤生长速度及体积明显小于对照组与无义序列治疗组，差异有统计学意义（F=6．056．P=0．007）；RT—PCR检测显示AS—miR-21治疗组miR-21表达下调为对照组的（0．031±0．008）％：原位杂交硅示AS—miR-21治疗组miR-21表达水平较对照组与无义序列治疗组下调：组织病理学检测表明AS—miR-21治疗后肿瘤恶性度降低；TUNEL法检测可见AS—miR-21治疗组细胞凋广数明显高于对照组与无义序列治疗组．差异有统计学意义（F=141．021．P=0．0001。结论 以miR-21作为靶点治疗异种移植U87人脑胶质瘤效果令人满意．miR-21可作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点。
- 周旋康春生浦佩玉尤永平许鹏张安玲王广秀贾志凡刘晓智徐嵩傅震赵鹏
- 关键词：MIR-21反义寡聚核苷酸
