国家科技支撑计划(2006BAK02A211)
- 作品数：12 被引量：85H指数：5
- 相关作者：王自良陈锡岭李广领姜金庆张淑静更多>>
- 相关机构：河南科技学院河南省动物免疫学重点实验室西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划河南省科技攻关计划河南省高校科技创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 19-去甲睾酮单克隆抗体的筛选及icELISA方法的建立被引量：5
- 2011年
- 采用细胞融合技术筛选抗19-去甲睾酮(nortestosterone,NT)单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)杂交瘤细胞株,体内诱性腹水法制备NT mAb,建立异源性间接竞争ELISA(indirect competitive ELISA,icELISA)标准曲线,并对其特异性、理化因素的影响和基质效应性进行探讨.结果表明,筛选的5株杂交瘤细胞分泌的单抗腹水效价为0.64×105～2.56×105,半数抑制浓度IC50为0.55～1.0ng/mL,抗体为IgG1亚型,具k轻链,亲和常数Ka为2.6×109～4.7×109L/mol.建立的icELISA标准曲线在磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)中的线性检测范围为0.004～85.8ng/mL,IC50值为0.55ng/mL,检测限(limit of detection,LOD)为0.002ng/mL;抗体与17a-去甲睾酮的交叉反应率(cross-reactivity,CR)为62%,与其他化合物无CR.标准品稀释液中甲醇的最佳含量为10%,牛尿1:20倍稀释可消除基质干扰,ELISA方法和液质联用检测(LC-MS/MS)的相关性良好(R2=0.9871).
- 姜金庆张海棠范国英马金友王自良王建华
- 关键词：杂交瘤细胞株单克隆抗体间接竞争ELISA牛尿
- 诺氟沙星单克隆抗体的制备及初步应用被引量：3
- 2011年
- 采用优化的碳二亚胺法制备诺氟沙星(NOR)人工抗原,紫外扫描和红外光谱图表明人工抗原偶联成功。采用细胞融合技术筛选抗NOR单克隆抗体(NORmAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备NORmAb,建立间接竞争ELISA(icELISA)标准曲线。结果表明,筛选的3株杂交瘤细胞分泌的抗体为IgG1亚型,具k轻链;建立的icELISA标准曲线在PBS中的的线性检测范围为0.04～43.6ng/mL,IC50值为0.62ng/mL,检测限(LOD)为0.02ng/mL;抗体与环丙沙星(87.2%)、培氟沙星(76.9%)、依诺沙星(66.8%)、恩诺沙星(48.6%)和洛美沙星(36.6%)有较高的交叉反应率;禽肉基质中NOR添加回收率满足检测要求。
- 李超英姜金庆
- 关键词：诺氟沙星人工抗原氟喹诺酮单克隆抗体间接竞争ELISA
- 噻虫嗪单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法的建立被引量：4
- 2012年
- 通过化学修饰合成了噻虫嗪人工半抗原,采用碳二亚胺法将该半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,成功制备了分子结合比合理的免疫原和包被原。经过免疫原免疫6周龄Balb/c小鼠、PEG介导免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞的融合和阳性杂交瘤细胞的筛选和克隆化,获得了效价高达1∶6.4×105的抗噻虫嗪单克隆抗体,抗体亚类为IgG1型。优化了ELISA实验条件,建立了基于单克隆抗体技术的噻虫嗪残留间接竞争ELISA方法。本方法的抑制中浓度(IC50)为0.0255mg/L,检测灵敏度(IC20)为0.0022mg/L,检出限(IC10)为0.001mg/L。除噻虫胺外,该抗体与其它噻虫嗪结构类似物无交叉反应。以自来水为基质的噻虫嗪添加回收实验显示,0.01,0.5和10.0mg/L添加水平的回收率均大于75%,且各添加水平重复测定8次的相对标准偏差均小于8%,说明所建立的间接竞争ELISA准确度高,重复性好,适合水中噻虫嗪残留的检测。
- 李广领王自良李金丽肖娜娜赵亚娟陈锡岭
- 关键词：噻虫嗪半抗原单克隆抗体酶联免疫吸附法
- 新型氯化烟碱杀虫剂啶虫脒最新研究进展被引量：19
- 2009年
- 从啶虫脒的化学结构和物理特性为起点,阐述了啶虫脒的毒理学、作用机理与杀虫活性和构效关系研究情况。从仪器分析和免疫分析方面概述了啶虫脒残留的现代分析方法。从抗性、作用机制、构效关系、毒理学和残留分析等方面指出了当前存在的问题,展望了啶虫脒未来研究方向和重点。
- 李广领王自良陈锡岭张淑静
- 关键词：啶虫脒毒理学杀虫活性
- 吡虫啉残留免疫学快速检测技术研究
- 研究了免疫学快速检测吡虫啉残留的方法，采用HPLC-MS、IR、UV和NMR技术,对通过化学修饰合成的吡虫啉(IMI)人工半抗原及EDC法合成的IMI完全抗原进行了结构表征,证明IMI人工半抗原和完全抗原合成成功,且完全...
- 李广领陈锡岭王自良李新安
- 关键词：吡虫啉
- 苯巴比妥人工免疫原合成及抗体特性研究被引量：1
- 2008年
- 将苯巴比妥(PB)经硝化和还原两步化学修饰后,在其苯环上引入活性基团氨基,合成具有半抗原结构特征的对氨基苯巴比妥(pAPB);用重氮化法将pAPB偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成人工免疫原BSA-pAPB和包被抗原OVA-pAPB,用红外(IR)、紫外(UV)、SDS-PAGE进行鉴定,推算分子结合比;用BSA-pAPB免疫新西兰白兔和SPF雏鸡,间接ELISA测定多克隆抗体(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,WestGold层析试验和交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-pAPB偶联成功,分子结合比为1∶19;获得了高价、敏感、特异的pAb,为PB残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。
- 张海棠王自良王艳荣钟华范国英
- 关键词：苯巴比妥半抗原人工免疫原抗体
- 沙丁胺醇免疫原的合成与鉴定被引量：2
- 2010年
- 将沙丁胺醇(SAL)经过琥珀酸单酯化后,采用混合酸酐法与载体蛋白偶联,用紫外扫描(UV)和变性凝胶电泳(SDS-PAGE)方法检验偶联效果,推算分子结合比;制备全抗原后免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗血清效价,阻断ELISA鉴定其敏感性。UV和SDS-PAGE分析结果表明,成功制备了BSA-HS-SAL,SAL-HS与BSA的分子结合比为11∶1;ELISA结果表明,获得了高效价、敏感的SAL多克隆抗体,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。
- 吴玉苹王宾王自良张海棠
- 关键词：沙丁胺醇人工抗原
- 杀虫剂啶虫脒的免疫学特性被引量：2
- 2011年
- 啶虫脒（Acetamiprid,ACE）是当前大面积使用的氯化烟碱类杀虫剂,化学名为（E）-N1-[（6-氯-3-吡啶）-甲基]-N2-氰基-N1-甲基乙酰胺,易溶于大部分有机溶剂,在碱性环境中有水解反应,对光稳定[1]。ACE作为乙酰胆碱受体（nAChRs）激动剂,通过干扰昆虫神经信号传导,
- 李广领姜金庆陈锡岭王自良张淑静张会英闫慧慧于文霞
- 关键词：啶虫脒免疫学特性
- 氟喹诺酮类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：12
- 2011年
- 为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法。标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL～376 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为8 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL;抗体对恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星均能特异性识别,IC50值分别为7.3 ng/mL、10.6 ng/mL、和13.2 ng/mL;标准品稀释液中NaOH和甲醇的最高容忍度分别为10%和30%;牛奶基质中添加5 ng/mL、20 ng/mL和50 ng/mL的标准品,环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星的回收率分别为93%～108%、96%～110%、92.5%～104%和93%～102%。
- 姜金庆杨雪峰王自良常新耀王三虎刘兴友
- 关键词：环丙沙星间接竞争ELISA氟喹诺酮药物多残留检测
- 杀虫剂啶虫脒人工抗原的合成与表征被引量：1
- 2010年
- 以啶虫脒原药与β-巯基丙酸为起始原料,在热碱作用下合成啶虫脒的人工半抗原.再采用EDC两步法使该半抗原与牛血清蛋白偶联得到啶虫脒的完全抗原.通过质谱、核磁共振谱、红外光谱和紫外光谱对啶虫脒人工半抗原进行结构表征,利用紫外光谱对合成的半抗原与载体蛋白的偶联情况分析,证明啶虫脒人工半抗原合成成功、啶虫脒人工半抗原与载体蛋白偶联成功,偶联比为1∶18.5.通过啶虫脒免疫抗原免疫实验小鼠,获得到了高效价抗血清,最终证明啶虫脒半抗原、人工抗原合成成功.
- 李广领陈锡岭王自良张淑静张会英
- 关键词：啶虫脒
