国家自然科学基金(30901768)
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
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- 微小RNA-301a介导高糖促进前列腺癌细胞周期G1/S时相转换被引量：2
- 2013年
- 目的 探讨微小RNA（miR）-301a介导高糖促进前列腺癌细胞生长的分子机制.方法 通过实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测miR-301a的表达.细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测转染miRNAs和/或高糖（4.5 g/L）培养的前列腺癌DU145细胞的增殖.应用微管聚合抑制剂诺考达唑（Nocodazole,40 μg/L）处理16h或者血清饥饿处理48 h使细胞周期同步化,流式细胞仪分析miR-301a对细胞周期时相转换的影响.CCK-8法测定细胞生长活性,检测高糖及miR-301a对前列腺癌细胞增殖的影响.结果 miR-301a在前列腺癌细胞PC3、DU145的表达分别为正常前列腺上皮细胞RWPE-1的（2.86±0.75）倍和（4.05±0.96）倍.高糖培养DU145细胞24、48 h后miR-301a的表达分别为对照组的（1.88±0.34）倍和（13.15 ±3.45）倍.抑制miR-301a可部分逆转高糖的促增殖作用.过表达miR-301a后经细胞周期同步化处理,与对照组比较miR-301a可促进前列腺癌DU145细胞G1/S时相转换.结论 miR-301a在前列腺癌细胞中表达上调,miR-301a介导高糖促进前列腺细胞周期G1/S时相转换,促进细胞增殖.
- 蔡燚李小娟朱宝益陶奕然李骏蔡松旺陈锐涵温星桥
- 关键词：高糖前列腺癌细胞周期
- 高糖诱导前列腺上皮细胞微小RNA的差异表达及miR-301a的促增殖作用被引量：1
- 2012年
- 目的检测高糖刺激下微小RNA（miRNA）在前列腺组织及细胞中的差异表达，探讨高血糖对前列腺影响的分子机制。方法将成年雄性SD大鼠随机分为对照组和高血糖组（〉300mg／d1），应用miRNA芯片技术检测两组间miRNA表达谱的差异，并通过实时定量聚合酶链反应（qRT—PCR）方法验证；以qRT．PCR检测差异表达的miRNAs在高糖（50mmoL／L）培养的RWPE-1细胞中的表达；噻唑蓝（MTT）比色法检测转染miRNAs和／或高糖（25～50mmol／L）培养的RWPE—1的增殖。结果高血糖组大鼠前列腺组织中4个miRNA上调（miR-1862．405倍、miR-301a2．202倍、miR-3652．093倍、miR-1932．317倍），2个miRNA下调（miR-4340．298倍、miR-3610．386倍），差异均有统计学意义（P〈0．05）；高糖培养下，RWPE-1细胞中各miRNAs的表达趋势与之一致。MTT实验中25mmol／L组、50mmol／L组、miR-301a转染组的细胞吸光度（A）值分别为起始的175％、197％、188％，与对照组（122％）比较差异有统计学意义（P〈0．05）；50mmol／L高糖联合miR-301a抑制物转染组的A值为起始的143％，与50mmol／L组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体内外高糖条件均可引起前列腺miRNA表达谱变化，高糖通过miR-301a对前列腺上皮细胞的增殖有明显促进作用。
- 陈锐涵朱宝益叶志强蔡松旺蔡燚叶春伟陶奕然温星桥
- 关键词：高糖前列腺微小RNA增殖
- 微小RNA-23a-p21活化激酶6通路对前列腺癌细胞迁移与侵袭能力的影响被引量：8
- 2012年
- 目的探讨调控p21活化激酶6（PAK6）的微小RNA（miRNA）与前列腺癌侵袭及迁移的关系。方法生物信息学预测靶向PAK6的miRNA，转染miRNA模拟物及抑制剂，Western blot法及实时定量逆转录-聚合酶链反应（Real—timePCR）检测PC-3细胞PAK6的表达，荧光素报告酶实验检测预测NmiRNA对PAK6的调控，并行体外迁移及侵袭实验，检测转染miRNA对PC-3细胞迁移及侵袭能力的影响。结果生物信息学预测miRNA-23a可能是调控PAK6的靶miRNA。Westernblot检测转染miRNA-23a组PAK6表达量下降79％，而转染miRNA-23a抑制剂组PAK6表达量上升40％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。荧光素报告酶实验结果显示，转染miRNA-23a后野生型PAK6组荧光素酶活性下降32％，而突变组差异无统计学意义（P〉0．05）。Real-timePCR检测3组PAK6mRNA的表达，差异无统计学意义（P〉0．05）。体外迁移及侵袭实验示，转染miRNA-23a组迁移细胞数减少57％，侵袭的细胞数减少91％。结论微小RNA-23a通过下调靶蛋白PAK6的表达从而引起前列腺癌迁移及侵袭能力下降。
- 蔡松旺李小娟陈锐涵朱宝益蔡燚叶春伟陶奕然冯淑君温星桥
- 关键词：微小RNA前列腺癌
- miR-96调控生育酚结合蛋白的表达及前列腺癌细胞生长被引量：1
- 2012年
- 目的筛选并鉴定调控生育酚结合蛋白（TAP）的miRNAs，并观察其对前列腺癌细胞增殖的影响。方法生物信息学分析和双荧光报告筛选调控TAP的miRNAs；以前列腺组织总RNA1ug反转录并扩增TAP基因（SEC14L2，GeneID：23541）及其3’端非翻译区（3’-UTR），克隆入p3×FLAG—CMV TM7．1载体；miR-96类似物与TAP表达载体pCMV7．1-TAP、pCMV7．1-TAP-3’-UTR转染前列腺癌细胞DU-145，Westernblot检测TAP的表达，噻唑蓝（MTT）法观察DU-145的增殖。结果miR-96可作用于TAP的3’UTR；pCMV7．1-TAP-3’-UTR分别经NotI／BglⅡ、Sal I／Xba酶切后电泳，在1200、1400bp附近有目的条带，测序结果与GeneBank报道一致。Westernblot检测结果表明miR-96可使TAP表达下降65．1％（P〈0．05）。MTT分析显示对照组以及空载体转染组的细胞吸光度（A）值分别为0．972±0．023、0．967±0．042；pCMV7．1-TAP转染组、pCMV7．1-TAP-3’-UTR转染组的A值分别为0．625±0．037、0．731±0．043，差异均有统计学意义（P〈0．05）；pCMV7．1-TAP-3’-UTR和miR-96共转染组的4值为0．914±0．034，与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论miR-96可通过3’-UTR调节TAP的表达，并减弱TAP对前列腺癌细胞增殖的抑制作用。
- 朱宝益李小娟蔡松旺蔡燚叶春伟王喻陶奕然冯淑君温星桥
- 关键词：前列腺癌增殖
- 微小RNA-23a调节前列腺癌细胞骨架蛋白的分子机制被引量：3
- 2012年
- 目的探讨微小RNA-23a（miR-23a）影响前列腺癌细胞骨架迁移及侵袭行为的分子机制。方法PC-3前列腺癌细胞转染siPAK6、miR-23a模拟物，48h后以共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变；Westernblot法检测LIMK1、磷酸化LIMK1（p-LIMKl）、丝切蛋白（cofilin）和磷酸化丝切蛋白（p-cofilin）蛋白的表达。结果转染siPAK6组及miRNA一23a组PC-3细胞骨架的应力纤维均明显减少，肌动蛋白形态皱缩。Westernblot检测显示转染siPAK6组的p-LIMKl、p-cofilin的表达分别下降75％、80％（P〈0．01），而LIMKl、cofilin表达量无明显变化（P〉0．05）；转染miRNA-23a组的p-LIMKl、p-cofilin的表达分别下降60％、70％（P〈0．01），LIMKl、cofilin的表达量无明显变化（P〉0．05）。结论miR-23a可通过p21活化激酶6（PAK6）-LIMK1-cofilin信号通路，影响前列腺癌细胞骨架的重构，抑制癌细胞迁移及侵袭能力。
- 蔡松旺黄怀球李小娟陈锐涵蔡燚朱宝益陶奕然叶春伟温星桥
- 关键词：前列腺癌COFILIN
- 糖尿病大鼠前列腺的形态及基因改变被引量：3
- 2011年
- 目的观察糖尿病对大鼠前列腺形态及基因表达的改变。方法链脲霉素（STZ，60mg／kg）诱导糖尿病动物模型，观察前列腺组织形态、筛选表达差异基因及测定8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学染色法验证Mre11和Xrcc3表达差异，并检测高糖（25～75mmol／L）刺激下细胞内活性氧（ROS）强度。结果糖尿病大鼠前列腺形态上出现显著变化。基因芯片发现糖尿病大鼠的前列腺组织中有2304个差异基因，糖尿病大鼠和糖尿病患者前列腺组织中Mrell和Xrcc3的表达均下降，而DNA氧化损伤标记物8-OHdG增加，高糖还可导致细胞内氧化应激水平上升。结论糖尿病可引起前列腺形态异常以及多基因的改蛮。
- 叶春伟李小娟王喻朱宝益文娅冯淑君陈泽斌温星桥
- 关键词：糖尿病前列腺基因芯片氧化应激
- 生育酚结合蛋白对氧化应激所致前列腺癌细胞凋亡的调控作用被引量：3
- 2010年
- 目的 观察生育酚结合蛋白（TAP）对氧化应激所致前列腺癌细胞凋亡的调控作用.方法 脂质体法分别转染pEGFP-N3-TAP质粒及空载体质粒进入前列腺癌细胞PC-3.以过氧化氢（H2O2）刺激PC-3细胞构建氧化应激模型,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测TAP的表达,流式细胞技术检测各组细胞的凋亡.结果转染TAP后的PC-3细胞中TAP表达量明显升高.RT-PCR结果显示,H2O2单独或联合促氧化剂丁胱亚磺酰亚胺（BSO）刺激细胞后TAP的mRNA表达量分别为（2.457±0.113）、（3.643±0.162）较对照组（0.721±0.048）显著上升,差异有统计学意义（P〈0.01）;在无H2O2刺激的对照组PC-3、PC-3-vector、PC-3-TAP细胞的凋亡率分别为2.42%、3.69%、15.37%;在H2O2刺激下,各组凋亡率分别为7.56%、16.71%、43.93%;联合应用BSO与H2O2,各组凋亡分别为13.73%、26.36%、49.19%.结论 TAP基因可参与前列腺癌细胞对氧化应激的应答反应,并促进氧化应激所致的前列腺癌细胞凋亡.
- 王喻李小娟叶春伟朱宝益阮星星陈泽斌冯淑君陶奕然高新温星桥
- 关键词：前列腺癌氧化应激脱噬作用
- 前列腺癌miRNA表达谱及miR-96在氧化应激信号通路中的作用被引量：1
- 2012年
- 【目的】检测miRNA在前列腺癌与正常前列腺组织的表达差异,并探讨表达异常的miRNA在前列腺癌发病中的作用。【方法】前列腺癌和正常前列腺组织样品(100 mg),Trizol法提取RNA,应用聚合酶链反应(PCR)芯片检测miRNA的表达;同时以250μmol/L的过氧化氢(H2O2)刺激前列腺癌PC-3细胞4 h,继续正常培养12 h。检测不同时间点细胞内活性氧(ROS)水平,以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-96在各组细胞中的表达。【结果】与正常前列腺组织相比,前列腺癌组织中miR-144、miR-216a上调5.9倍,miR-96上调30.4倍,miR-488、miR-873下调到4.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。PC-3细胞内ROS为RWPE-1细胞的5.2倍(P<0.05),miR-96在PC-3细胞中的表达为RWPE-1细胞的15.4倍(P<0.05)。H2O2刺激PC-3细胞1、4 h后,胞内ROS为对照组的4.3、6.4倍(P均<0.05),miR-96表达水平为对照组的10.2、18.9倍(P均<0.05);10、16 h组胞内ROS为对照组的2.5倍、1.2倍,miR-96表达水平为对照组的2.7、1.9倍(P均>0.05)。【结论】在前列腺癌组织中发现了若干有表达差异的miRNA;miR-96参与前列腺癌细胞的氧化应激信号途径,可能是防治前列腺癌的重要分子靶点。
- 朱宝益李小娟黄怀球蔡燚叶春伟陶奕然高新温星桥
- 关键词：前列腺癌MIRNA氧化应激
- 生育酚结合蛋白基因重组腺相关病毒的制备及抗癌作用
- 2011年
- 目的制备生育酚结合蛋白（TAP）重组腺相关病毒，并探讨其对前列腺癌生长的作用。方法构建重组腺相关病毒质粒pSNAV-TAP-EGFP，酶切、聚合酶链反应（PCR）、测序。225cm2细胞培养瓶中，接种293T细胞，以重组质粒转染。扩增、纯化病毒，并转染DU-145细胞，噻唑蓝（MTT）比色法观察第2、4、6天的细胞增殖。结果成功构建pSNAV—TAP—EGFP质粒，并制备滴度6．4×10^11vg／ml、纯度95％的rAAV2-TAP。该病毒转染DU-145细胞后TAP表达量明显上升。转染后第4天，TAP转染组的细胞吸光度（A值）0．546±0．072，对照组以及空载体转染组的A值分别为0．673±0．015、0．638±0．051，生长明显受到抑制（P〈0．05）。至第6天各组细胞生长差异更显著。结论成功制备高滴度的rAAV—TAP—EGFP病毒，并可抑制前列腺癌细胞的生长。
- 李小娟王喻朱宝益叶春伟杨钦泰黄振华洪莹芬文娅温星桥
- 关键词：重组腺相关病毒前列腺癌增殖
