国家自然科学基金(81072901)
- 作品数：8 被引量：30H指数：3
- 相关作者：华茜林森相谭琰梁迷丁海敏更多>>
- 相关机构：北京中医药大学北京中医药大学东直门医院中国科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TNFα和IL-1β靶点抗炎药物筛选细胞模型的构建被引量：2
- 2015年
- 目的:构建两个高表达人TNFα和IL-1β细胞系,建立抗炎药物筛选细胞模型。方法:运用PCR的方法从载体pCMVSport-TNFα和p CMVSport-IL1β上扩增目的基因,以亚克隆方法将目的基因分别插入真核表达载体pcDNA3.1和pFLAG-CMV中,用单酶切、PCR扩增和基因测序的方法鉴定重组效果,然后将重组成功的质粒转入HEK293细胞系内,挑选能够稳定表达并遗传的单克隆细胞株,用蛋白免疫印迹(Western blot)法分析其表达效果。结果:三种鉴定方法均显示重组质粒构建成功。Western blot结果显示,细胞株T3、T4均能较高表达炎症因子TNF-α;细胞株I2、I3、I5均能较高表达炎症因子IL-1β。结论:成功构建了TNFα和IL-1β靶标的药物筛选细胞模型,为筛选具有抗炎作用的中药提供了一个新平台。
- 王星华谭琰丁海敏张琦华茜
- 关键词：白介素1Β抗炎药物筛选稳定转染
- 非贴壁微球体培养法分离T-淋巴细胞瘤干细胞及鉴定被引量：2
- 2014年
- 通过非贴壁微球体无血清培养法,体外构建并鉴定了T-淋巴细胞瘤干细胞。采用细胞球悬浮培养方法富集T-淋巴细胞肿瘤干细胞,利用抑制分化作用的抑制剂CHIR99021和PD173074(2i)进行肿瘤干细胞的筛选,采用RT-PCR法检测Sox2、Oct4、Nanog、Klf4、Bmi1、C-Myc干细胞特征基因的表达,进一步采用Western blot验证Oct4蛋白水平表达,流式细胞术分析CD34、CD44抗体表达情况,用PI检测细胞周期,用CFSE观察细胞增殖能力,并将富集的T-淋巴细胞肿瘤干细胞进行裸鼠异体移植实验。在细胞球悬浮培养法基础上,利用具有抑制分化作用的抑制剂CHIR99021和PD173074,成功富集出Hut-102干细胞球。经RT-PCR鉴定,Hut-102干细胞球的其干细胞特征基因Sox2、Oct4、Nanog、Klf4、Bmi1、C-Myc表达均显著性高于Hut-102细胞并且高表达Oct4蛋白;经流式细胞术分析CD34、CD44抗体表达,有74.20%的Hut-102干细胞球表现为CD34+,有90.82%的Hut-102干细胞球表现为CD44+,证明抑制分化药物应用于细胞球悬浮培养方法中,能够有效富集出具有CD34+CD44+表型特征的Hut-102干细胞球;用PI检测细胞周期,富集的Hut-102干细胞球中处于G1/G0期的细胞为64%,处于S期的细胞为30.56%,表明该细胞暂不增殖或处于休止状态;用CFSE检测到富集的Hut-102干细胞球分化增殖能力显著高于Hut-102细胞。在NON/SCID裸鼠中,分别移植Hut-102细胞球和Hut-102细胞,结果显示,前者检测到67.74%±5.32%的淋巴细胞表达Hut-102细胞特异性标记物(CD3),而后者的裸鼠中未检测到,说明Hut102细胞球在NON/SCID裸鼠体内表现了T-淋巴细胞肿瘤干细胞特点和移植能力。首次在传统的非黏连微球体无血清培养法中加入两种抑制剂(CHIR99021和PD173074),富集出大量的微球体,通过干细胞特征鉴定及裸鼠移植实验,证明Hut-102细胞球具有T-淋巴细胞肿瘤干细胞特性。
- 王珊珊殷勤伟张洪杰谭琰华茜
- 关键词：CD34CD44裸鼠移植
- 三七和栀子有效成分对APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白的作用被引量：3
- 2013年
- 目的:研究三七和栀子有效成分对APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白的影响。方法:转基因小鼠雌雄各半,分别随机分为三七和栀子有效成分高剂量组、中剂量组、低剂量组,阳性药安里申组,模型组。同窝出生的野生型小鼠作为阴性对照组。小鼠自6月龄开始自主进食给药4个月,然后进行免疫组织化学、Western Blot、ELISA实验,检测海马和皮层区淀粉样蛋白Aβ1-40、Aβ1-42及APP的表达水平和脑内的淀粉样斑块。结果:在雌性小鼠各组中,三七和栀子有效成分低剂量组能够显著性降低海马区Aβ1-40和Aβ1-42的水平,且淀粉样蛋白前体蛋白APP水平显著性降低。结论:三七和栀子有效成分可能作用于APP生成阶段,通过下调APP的产生,从上游降低了Aβ产生的风险。
- 林森相姚娜华茜杨开宇张颖易六书刘灵丽王爱敏赵亚楠陈金燕
- 关键词：阿尔茨海默病栀子淀粉样蛋白APP
- TDP-43在人胚胎肾细胞中的代谢及其产物对细胞活力的影响
- 2014年
- 目的研究TAR DNA结合蛋白43 kD(TDP-43)在人胚胎肾细胞HEK293中的代谢过程及其产物对细胞活力的影响。方法应用不同浓度十字孢碱(STS)作用于HEK293细胞,检测TDP-43含量的变化,并联合使用不同的蛋白降解通路阻滞剂研究其代谢机制,再通过转染外源性TDP-43研究其对细胞活力的影响。结果 STS对HEK293细胞中TDP-43蛋白含量影响不大,在较高浓度时(5、10μM)会诱导HEK293细胞产生35 kD片段。进一步研究发现这一35 kD片段是通过泛素-蛋白酶体通路降解的,且其过表达时会明显降低HEK293细胞的活力。结论过表达外源性TDP-43及其35 kD片段可对HEK293细胞活力产生抑制作用,可能是导致TDP-43相关疾病的原因。
- 南一楠孙梦茹李澎涛华茜
- 关键词：DNA结合蛋白质类代谢蛋白降解细胞活性
- 靶向淀粉样蛋白的阿尔茨海默病药物研究进展被引量：11
- 2012年
- 淀粉样蛋白级联假说是阐释阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病机制的主要学说之一,即脑内过量的β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)是促发AD的核心因素.因此,靶向Aβ形成、聚集和清除等关键环节的药物开发是目前药物研究的热点.但近年来AD新药临床试验屡屡失败,至今尚未得到一种切实有效的治疗药物.淀粉样蛋白级联假说的局限性和痴呆期患者疾病进程的难以逆转,可能是临床试验反复失败的两个主要原因.借助AD早期诊断技术的发展,将药物干预的时间窗口前移,重视痴呆前期病理机制与治疗的研究,可能是研制延缓AD发生和发展有效药物的新途径.
- 华茜丁海敏梁迷
- 关键词：阿尔茨海默症Β-淀粉样蛋白免疫治疗
- 三七和栀子有效成分对AD转基因小鼠早期脑内淀粉样蛋白清除作用的研究被引量：7
- 2012年
- 目的研究三七和栀子有效组分(三七总皂苷和栀子苷)对APPV717I转基因小鼠脑内淀粉样蛋白的影响。方法转基因小鼠♀♂各半,分别随机分为三七和栀子有效成分高剂量组,中剂量组,低剂量组,阳性药安里申组,模型组。阴性对照组为同窝出生的野生型小鼠。小鼠自3月龄开始自主进食给药3个月,进行免疫组织化学、Western blot、ELISA实验,检测海马和皮层区淀粉样蛋白Aβ1-40、Aβ1-42,降解酶IDE和NEP的表达水平。结果在♀性小鼠各组中,三七栀子中剂量组能够明显降低其脑内Aβ1-42的水平,且淀粉样蛋白的主要降解酶之一IDE的水平也有升高的趋势;而在♂性小鼠各组中,三七栀子的作用并不明显。结论三七和栀子有效成分可能通过促进Aβ的降解来降低♀小鼠Aβ1-42水平,对♂小鼠作用不明显。
- 张颖林森相华茜杨开宇姚娜易六书王爱敏陈文举陈金燕
- 关键词：阿尔采末病栀子淀粉样蛋白NEPIDE
- 四逆散及生慧汤拆方对神经突触可塑性的作用研究被引量：5
- 2014年
- 目的研究四逆散及生慧汤拆方对神经突触可塑性的作用。方法以SH-SY5Y细胞作为神经生长,通过CCK-8法检测细胞活力,检测不同浓度四逆散及生慧汤拆方对神经细胞增殖的影响。以PC12细胞为神经分化模型,通过细胞形态学观察及统计分析细胞突起长度及分化率,检测不同浓度四逆散及生慧汤拆方对神经细胞分化的影响。结果四逆散对细胞增殖并无显著作用,对细胞分化具有抑制作用。生慧汤拆方4(熟地、山茱萸)具有促进细胞增殖,抑制细胞分化的作用;生慧汤拆方6(茯神、红参)具有促进细胞分化和增殖的双重作用;生慧汤拆方7(远志、石菖蒲、白芥子)具有抑制细胞增殖,促进细胞分化的作用。结论传统改善学习记忆能力中药中的疏肝理气药物具有抑制突触可塑性的作用,祛痰益智和补气健脾类药物具有促进突触可塑性的作用。
- 梁迷林森相马捷宋月晗孙梦茹王星华张琦谭琰李峰华茜
- 关键词：四逆散突触可塑性
- 20(S)-原人参二醇诱导U87细胞凋亡的机理研究
- 2014年
- 目的研究20(S)-原人参二醇(aPPD)诱导人胶质瘤细胞U87凋亡的分子生物学机制。方法采用MTS法检测不同浓度aPPD对U87细胞的抑制作用,并用免疫印迹法研究caspase3的激活情况。结果不同浓度的aPPD对U87细胞均有杀伤或抑制作用,免疫印迹结果显示pro-caspase3在aPPD作用时减少,caspase3底物PARP发现被切割,说明caspase3被激活。结论 aPPD能通过激活caspase3的方式诱导U87细胞凋亡。
- 南一楠李娇李澎涛华茜
- 关键词：20(S)-原人参二醇U87CASPASE3凋亡
