浙江省科技厅资助项目(2005C33031)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 相关作者：林陈水梅建凤黎小军王平付水星更多>>
- 相关机构：浙江工业大学新余高等专科学校更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 带信号肽DsbA-胸腺素α_1融合蛋白的表达及其分离纯化
- 2007年
- 以构建好的人胸腺素α1基因工程菌为研究材料,研究影响DsbA-胸腺素α1融合蛋白分泌效率的因素,优化信号肽酶表达得到阻遏的培养条件,获得含带信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白的菌体,破碎细胞后利用疏水层析与Ni2+螯合亲和层析进行目标蛋白分离纯化,获得较高纯度底物蛋白(信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白,其分子量约为34 kD),为进一步研究及分离纯化DsbA信号肽酶创造条件.
- 郑小玲林陈水倪建良夏楠
- 关键词：融合蛋白信号肽疏水层析
- 人胸腺素α_1基因工程菌的构建与表达被引量：6
- 2005年
- 胸腺素α1(Thymosinalpha1,Tα1)是一种针对T淋巴细胞的免疫增强剂,临床用途广泛.为大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子合成编码Tα1的基因,克隆于pUCmT,转化E.coliJF1125,经测序证明序列正确后,克隆入pET39(b)的BspT 和BamH 位点,成功地构建出包含信号肽,DsbA,连接肽,6个His,EKsite(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys),胸腺素α1的表达载体,转化E.coliBL21(DE3),获得胸腺素α1基因工程菌.SDS-PAGE分析表明,经0.1mmol/LIPTG和30℃诱导8h,在大肠杆菌周质中大量表达表观分子量31kD左右的融合蛋白.为进一步获得大量可供实验研究和临床应用的重组胸腺素α1创造条件.
- 林陈水黎小军王平梅建凤
- 关键词：基因克隆
- 分泌型人胸腺素α_1基因工程菌高密度发酵工艺的研究被引量：1
- 2006年
- 探索分泌型重组人胸腺素1α工程菌的高密度高表达发酵工艺.在摇瓶培养获得大肠杆菌分泌型重组人胸腺素1α融合蛋白发酵的最佳条件的基础上,用15 L自控发酵罐进行分批补料培养,发酵中分阶段限制性流加氮、碳源,保持溶氧在30%以上,OD600约为25的时候,添加0.5 mmol/LIPTG于28℃诱导10 h.最终菌体密度OD600可达40以上,目的产物占菌体总蛋白25%以上.分泌型人胸腺素1α基因工程菌高密度发酵工艺的建立为工业化生产重组人胸腺素1α提供基础.
- 林陈水黎小军付水星许明梅建凤
- 关键词：高密度发酵胸腺素Α1大肠杆菌
