贵州省科技基础条件平台项目(2009)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 相关作者：何志旭舒莉萍周艳华黄惠敏马建娟更多>>
- 相关机构：贵州医科大学贵阳医学院更多>>
- 发文基金：贵州省科技基础条件平台项目国家自然科学基金贵州省优秀科技教育人才省长资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学天文地球更多>>
- Pax5基因在野生型斑马鱼全胚胎发育早期的表达被引量：1
- 2012年
- 目的为了深入了解在胚胎发育过程中,尤其是在早期B淋巴细胞的生成和中脑的发育过程中pax5基因可能的作用及其机制,选择斑马鱼作为实验动物,构建野生型斑马鱼pCS2+-pax5重组质粒,并观察pax5基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼pax5基因片段,将得到的pax5基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后,在T4DNA连接酶的作用下插入pCS2+质粒中,通过对重组质粒进行双酶切、菌落PCR以及插入片段序列测定鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的pax5基因的反义mRNA探针。将得到的探针用全胚胎原位杂交技术检测pax5基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果成功构建pCS2+-pax5重组质粒并制备了pax5基因的反义mRNA探针,通过斑马鱼原位杂交技术,发现在斑马鱼受精后18～72小时(18～72hpf)胚胎头部的小脑、中脑后脑交界处均可观察到pax5基因阳性杂交信号;在24～72hpf胚胎的耳蜗均可观察到pax5基因的阳性杂交信号,且随着时相的增长其表达逐渐增多;在18～48hpf胚胎的脊索部位可见pax5基因的阳性杂交信号。结论明确了pax5基因在斑马鱼胚胎的脑部、脊索神经系统高表达,并首次证实其在耳蜗听神经的早期发育过程中有表达,可能对斑马鱼早期胚胎神经系统的发育起着某些至关重要的作用。
- 姚冬静舒莉萍何志旭马建娟李涛黄惠敏
- 关键词：斑马鱼原位杂交
- Irx5a在野生型斑马鱼早期发育中的表达
- 2016年
- 目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a基因,将其克隆入pCS^(2+)质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Irx5a的反义mRNA探针;用该反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了Irx5a-pCS^(2+)重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测Irx5a基因的表达,发现从3.7 hpf开始有表达,并且在胚胎神经系统和造血系统都有明显表达。结论:Irx5a基因可能参与了Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统和造血系统的发育。
- 舒莉萍何志旭许威丁可军
- 关键词：RNA探针
- band3基因在斑马鱼早期胚胎中的表达被引量：1
- 2016年
- 目的:用band3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,检测band3基因在野生型Tüebingen斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:Trizol法提取斑马鱼胚胎总RNA并设计特异性引物,采用RTPCR法扩增band3基因cDNA编码区片段;通过基因重组技术构建PBSK-band3重组质粒,用Bam HⅠ酶切得到线性化PBSK-band3;以T7 RNA聚合酶转录合成反义地高辛标记的band3 RNA探针,用全胚胎原位杂交法检测band3基因在斑马鱼胚胎早期的表达情况。结果:成功克隆band3基因片段,构建PBSK-band3重组质粒;经体外转录获得地高辛标记的反义band3 mRNA探针,原位杂交后检测证实band3基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中间细胞群(ICM)和主动脉性腺中肾区(AGM)呈现高表达。结论:地高辛标记的反义band3 mRNA探针可检测到斑马鱼胚胎中band3基因的定位表达。
- 庹媛媛尚鲁俊夏海雄何志旭舒莉萍
- 关键词：斑马鱼胚胎探针
- p21基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达被引量：1
- 2016年
- 目的:探究p21基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。方法:Trizol法提取野生型斑马鱼胚胎总RNA,RT-PCR法扩增p21基因片段,与p^(CS2+)载体重组构建p21-p^(CS2+)重组质粒,以T3 RNA聚合酶制备地高辛标记的反义mRNA探针,通过斑马鱼全胚胎原位杂交检测p21基因在野生型斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达。结果:成功构建了p21-p^(CS2+)重组质粒,并制备反义mRNA探针;原位杂交结果显示野生型斑马鱼0.5~18 hpf的胚胎均未发现p21基因阳性杂交信号,24~36 hpf胚胎可在脊索部位观察到阳性信号,48~72 hpf胚胎可在头部胸腺附近观察到阳性信号,表达量均较低。结论:成功制备了p21-p^(CS2+)重组质粒及斑马鱼p21基因反义mRNA探针,p21基因在野生型斑马鱼胚胎不同发育时相中表达水平不同。
- 宋锦姬牧远吴西军周艳华舒莉萍何志旭
- 关键词：P21斑马鱼
- P21对HoxB4的调控机制及其影响造血干细胞增殖初步研究被引量：1
- 2018年
- 目的:利用转基因斑马鱼模型探讨P21是否作为Hox B4的下游基因参与调控造血干细胞(HSC)的增殖发育。方法:转基因斑马鱼系Tg(z Lmo2:LDe L-Hox B4-EGFP)与Tg(z Lmo2:Cre)交配后的胚胎作为Hox B4实验组、Tg(z Lmo2:LDe L-EGFP)与Tg(z Lmo2:Cre)交配后的胚胎作为EGFP对照组、野生型斑马鱼胚胎作为空白对照组,利用P21反义mRNA探针对斑马鱼全胚胎进行原位杂交,观察P21的表达情况。结果:Hox B4实验组胚胎、EGFP实验对照组胚胎及空白对照组胚胎在时相为18 hpf、24 hpf、72 hpf时原位杂交结果未见明显区别,30 hpf及36 hpf的Hox B4实验组斑马鱼胚胎脊椎部位P21的表达发生少量下调,48 hpf的Hox B4实验组、EGFP对照组两组胚胎胸腺部位P21较空白对照组发生少量下调。结论:转基因过表达Hoxb4的斑马鱼在造血细胞增殖异常旺盛的情况下,P21表达量出现下降,提示在胚胎期造血发育过程中P21可能作为Hox B4的下游基因,并通过Hox B4负调控作用来参与调节HSC的增殖发育。
- 李雪华姬牧远周艳华何志旭何志旭
- 关键词：造血干细胞斑马鱼转基因细胞增殖P21HOXB4
