河南省科技攻关计划(0624420036)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：王小纯祖向阳徐良张贵星陈小让更多>>
- 相关机构：河南农业大学郑州大学郑州牧业工程高等专科学校更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 肠激酶消化融合蛋白Trx-Exendin-4的特性被引量：4
- 2012年
- 选用Invitrogen公司开发的重组肠激酶,在不同反应条件下消化融合蛋白Trx-Exendin-4,用16%的Tricine-SDS-PAGE检测目的多肽Exendin-4与其他切割产物的量.结果表明:温度对肠激酶消化融合蛋白Trx-Exendin-4的影响很大,37℃时酶活力高,以非特异性切割为主;16℃时酶活力居中,特异性切割与非特异性切割共存;4℃时酶活力较低,但以特异性切割为主.获得Exendin-4的最佳消化条件是:1 U肠激酶在4℃条件下6 h消化3 mg的Trx-Exendin-4,效率最高,特异性最好.
- 徐良王文静祖向阳王小纯
- 关键词：肠激酶酶活力
- Exendin-4的表达及其降糖活性研究被引量：5
- 2009年
- 根据GeneBank中登录的Exendin-4的氨基酸序列(AAB22006),结合大肠杆菌的密码子偏嗜性,对原有基因70%的密码子进行改造,使其在大肠杆菌中高效表达;同时添加KpnI和NcoI酶切位点和肠激酶识别位点,构建成重组表达载体pET-32a(+)-Exendin-4,转化大肠杆菌BL21(DE3)。在30℃条件下1mmol/L的IPTG诱导表达6h,融合蛋白表达量占细菌蛋白总量的32%。利用亲和层析纯化融合蛋白,每克湿菌体可获得纯度98%的融合蛋白6.44mg。利用肠激酶切除融合蛋白的N端融合部分,用亲和层析吸附N端融合肽,每克湿菌体可获得纯度99%的Exendin-41.59mg。腹腔注射糖尿病基因小鼠(BKS.Cg-m+/+Leprdb/J鼠),血糖浓度下降极显著,最佳用量为7μg/kg,注射后4h血糖降低达51.93%。
- 祖向阳张贵星陈小让王小纯
- 关键词：EXENDIN-4基因改造血糖浓度
- Exendin-4基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
- 2012年
- 根据GenBank中已公布的编号为AAB2200的Exendin-4氨基酸片断,及酵母密码子偏好性,设计了Exendin-4在酵母中的表达序列。利用基因工程技术,将编码Exendin-4的蛋白基因亚克隆到含有分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成分泌型重组表达栽体pPIC9K-E4。用电转化法将线性化的pPIC9K-E4转化入毕赤酵母菌株GSll5,转化子经MD平板筛选,得到的阳性菌株再用浓度梯度递增的G418筛选多拷贝重组子。将MM和MD平板筛选得到Muts菌株用甲醇诱导表达6d,每隔24h取样。Tricine-SDS-PAGE检测结果显示,诱导后第6天表达量达到最高。
- 徐良王文静邱宇航杨好冬王小纯
- 关键词：毕赤酵母EXENDIN-4真核表达
