辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(2008773)
- 作品数：3 被引量：23H指数：2
- 相关作者：贾长青梁峰韩长旭佟浩柏树令更多>>
- 相关机构：中国医科大学天津医院江苏省苏北人民医院更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 生长分化因子5诱导兔脂肪干细胞成软骨细胞分化的实验研究被引量：17
- 2009年
- 目的探讨应用生长分化因子5(growth differentiation factor5,GDF-5)诱导脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)成软骨细胞分化的可能性及效果。方法3月龄清洁级健康日本大耳白兔6只,雌雄不限,体重2～3kg。取兔皮下脂肪4～6mL,采用胶原酶消化离心贴壁培养法培养ADSCs,取第3代细胞进行实验。波形蛋白免疫组织化学和CD44、CD49d、CD106免疫荧光染色鉴定ADSCs。调整细胞密度为1×106个/mL,分别用普通细胞培养液以及含0、10、100ng/mLGDF-5的软骨细胞诱导液诱导培养。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖情况;RT-PCR检测诱导细胞ColⅡ和蛋白多糖mRNA的表达;免疫组织化学、阿利新蓝染色、甲苯胺蓝染色和Westernblot法检测诱导细胞ColⅡ和蛋白多糖表达。结果ADSCs呈小圆形、梭形、多角形分布,表面抗原标志CD44、CD49d呈阳性表达,CD106和波形蛋白呈阴性表达。100ng/mLGDF-5诱导的ADSCs呈圆形或类圆形,且细胞增殖旺盛。普通培养液和0、10、100ng/mLGDF-5成软骨细胞诱导培养后7d,ColⅡ、蛋白多糖mRNA表达均呈浓度依赖性增加,除0、10ng/mLGDF-5两组间差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组差异均有统计学意义(P<0.05);100ng/mLGDF-5诱导培养14d,ColⅡ、蛋白多糖mRNA以及蛋白表达达高峰,阿利新蓝、甲苯胺蓝染色以及ColⅡ免疫组织化学染色均呈阳性。结论经一定浓度的GDF-5诱导的ADSCs,ColⅡ和蛋白多糖表达明显增加,具有软骨细胞的部分生物学功能。
- 刘振宁贾长青韩长旭梁峰王俊丰柏树令佟浩
- 关键词：脂肪干细胞生长分化因子5细胞培养分化软骨细胞
- 负载人骨形态发生蛋白-7基因的兔脂肪干细胞向成骨细胞分化的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨人骨形态发生蛋白-7（hBMP-7）基因修饰对兔脂肪干细胞（ADSCs）成骨能力的影响. 方法 原代培养兔脂肪干细胞,免疫组织化学方法检测细胞表面抗原CD44、CD49d、CD106的表达,对细胞进行鉴定;阳离子脂质体介导hBMP-7基因转染ADSCs,绿色荧光蛋白表达观察转染效率、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测目的基因hBMP-7的表达;ALP定量测定,Western blot检测Ⅰ型胶原、骨钙素的表达,以评价转基因ADSCs向成骨细胞分化的情况. 结果 从兔脂肪组织中分离出来的ADSCs CD44、CD49d表达呈阳性,CD106表达呈阴性.RT-PCR检测筛选后的ADSCs稳定表达hBMP-7.转染后7、10、14 d ALP定量测定转染组明显高于未转染组,差异有统计学意义（P〈0.05）;成骨标志物Ⅰ型胶原、骨钙素的表达转染组明显高于未转染组.结论 从脂肪组织中分离出的ADSCs是一种较好的组织工程种子细胞.hBMP-7重组质粒转染ADSCs后表达目的蛋白,并诱导ADSCs向成骨细胞分化.
- 韩长旭贾长青刘振宁梁峰佟浩柏树令
- 关键词：成体干细胞骨形态发生蛋白质类转染细胞分化
- 缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1在不同月龄大鼠椎间盘中的表达被引量：5
- 2010年
- 目的检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)在不同月龄大鼠椎间盘纤维环组织中的表达及其相关性,探讨HIF-1α及GLUT-1在椎间盘退变过程中的作用。方法取Wistar大鼠50只,分别以1,3,6,12,18个月龄分为5组。采用免疫组化法及Western blot法检测各组椎间盘中HIF-1α和GLUT-1表达情况。结果随着大鼠月龄的增长,其椎间盘纤维环组织中HIF-1α和GLUT-1的表达也发生变化,由低月龄组(1-3月龄)至成年组(6-12月龄)HIF-1α和GLUT-1表达逐渐减少,而老年组(18月龄)二者表达显著增加。且这种变化有显著统计学意义(P<0.01)。纤维环中HIF-1α和GLUT-1的蛋白表达呈正相关。结论HIF-1α、GLUT-1表达水平的变化与椎间盘退变的发生关系密切相关,HIF-1α可以通过上调GLUT-1等相关因子并延缓椎间盘退变,可能作为椎间盘退变治疗研究的切入点。
- 齐峰贾长青赵嘉国张圣飞
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α葡萄糖转运蛋白-1椎间盘退变
