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H3、H9亚型流感病毒多表位核酸疫苗毒构建及其表达研究: 构建流感病毒多表位的的核酸疫苗,并研究表位基因在BHK细胞内表达产物的生物学活性。筛选流感病毒主要抗原(HANANP M)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感通用多表位基因(Epi),然后定向克隆至真...; 陈义锋金宁一赵建增田明尧鲁会军南文龙赵翠青霍晓伟; 关键词：多表位流感病毒核酸疫苗; 文献传递

乳酸菌质粒提取方法的建立被引量：5: 2008年; 目的建立简便、快速、安全的乳酸菌质粒提取方法。方法将文献报道的乳酸菌质粒提取方法和大肠杆菌质粒提取方法相结合,建立乳酸菌质粒提取方法。通过方法比较、溶菌酶浓度优化和酶切分析,验证该方法的可行性。结果用所建立的方法提取的乳酸菌质粒电泳与酶切图谱与文献报道的提取方法相比均无明显差异。溶菌酶最佳浓度为10mg/ml,避免了毒性物质溴化乙锭的应用,减少了溶菌酶的用量和溶液体积。结论所建立的方法可用于乳酸菌质粒的快速提取,为乳酸菌分子生物学研究奠定了基础。; 马海利金宁一李昌杜桢阚秋霞陈晓月; 关键词：乳酸菌质粒溶菌酶

绿色荧光蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的表达被引量：1: 2008年; 目的探讨异源基因在枯草芽孢杆菌中表达的可行性。方法以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的穿梭质粒为基本骨架,在大肠杆菌中完成含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组表达质粒的构建,通过酶切鉴定筛选阳性克隆,采用电转化的方法,将重组质粒转入枯草芽孢杆菌进行表达,通过检测GFP的存在,评价枯草芽孢杆菌对异源基因的表达。结果重组表达质粒pGJP-GFP酶切鉴定结果与预期片段大小相符。绿色荧光蛋白可在枯草芽孢杆菌中表达,且表达蛋白具有较好的生物学活性。结论利用枯草芽孢杆菌的自身启动子,可以实现外源基因在枯草芽孢杆菌中的表达。; 陈晓月金宁一海洋邹伟马海利李昌; 关键词：枯草芽孢杆菌绿色荧光蛋白异源基因

β-半乳糖苷酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达被引量：9: 2008年; 为检测本课题组构建的枯草芽孢杆菌分泌表达载体pGPST中启动子和信号肽的活性,将β-半乳糖苷酶基因插入表达载体的多克隆位点,构建含有β-半乳糖苷酶基因的重组质粒pGPST-lacZ,重组质粒转化枯草芽孢杆菌,分别测定液体培养基中上清液和菌体沉淀中β-半乳糖苷酶的活性。培养上清液中的酶活在22h达到峰值,约为26mU/ml,之后开始下降;菌体沉淀中的酶活在14h最高,达6mU/ml,而阴性对照pGPST没有检测到酶活性。结果表明分泌型表达载体中的启动子和信号肽具有较好的活性,能实现异源基因在枯草芽孢杆菌中的分泌表达。本试验为该表达载体的进一步研究和应用提供重要的数据资料,也为外源基因在枯草芽孢杆菌中的表达提供参考资料。该载体将在研究外源基因在枯草芽孢杆菌中表达发挥重要作用。; 陈晓月金宁一邹伟海洋马海利李昌屈勇刚; 关键词：分泌表达

H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位核酸疫苗构建及表达研究被引量：8: 2007年; 目的构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗,并研究其在幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)内表达产物的生物学活性。方法筛选流感病毒主要抗原(HA、NA、NP、M)表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构,合成流感通用的复合多表位基因(Epi),以H5、H7亚型流感病毒HA融合表达基因为骨架,将多表位基因Epi插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至pVAX1,构建抗A型流感H3579亚型的pVAX1-H7HA-Epi-H5HA。最后将该重组质粒转染BHK细胞,提取细胞总RNA,以RT-PCR方法检测目的基因;以间接免疫荧光试验(IFA)初步测其表达产物抗原性。结果RT-PCR检测到目的基因;IFA检测到特异性荧光存在。结论本试验所构建的重组质粒pVAX1-H7HA-Epi- H5HA,在真核细胞内均获了有效地转录和表达;而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合,证明了其具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗多种A型流感病毒的通用核酸疫苗。; 陈义锋金宁一贾雷立鲁会军田明尧南文龙马鸣潇刘成宏沈国顺马海利陈晓月; 关键词：表位流感病毒核酸疫苗

H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒构建被引量：9: 2007年; 目的构建表达H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒活载体疫苗候选株。方法筛选流感病毒主要抗原(HANANPM)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感多表位基因(Epi),以H5、H7HA融合表达基因为骨架,将多表位基因插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至鸡痘病毒表达载体pUTA-2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游,构建重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA。应用脂质体介导的转染法,将该重组鸡痘病毒中间转移载体与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压筛选挑斑纯化后传代,并对重组以鸡痘病毒进行PCR和IFA检测和Western blot分析。结果成功构建了重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA,PCR、IFA和Western blot检测阳性。结论筛选出稳定共表达H5H7HA基因和通用多表位基因的重组鸡痘病毒vUTA2-H7HA-Epi-H5HA株,该重组鸡痘病毒的构建为跨种通用型流感病毒活载体疫苗的研究奠定了物质基础。; 陈义锋金宁一贾雷立鲁会军南文龙田明尧陈晓月马海利马鸣潇刘成宏; 关键词：重组鸡痘病毒

霍乱毒素黏膜免疫佐剂作用研究进展被引量：1: 2007年; 　　霍乱(cholera)是由霍乱弧菌(vibrio cholerae)引起的急性传染病,属三大国际检疫传染病之一,也是我国法定管理的甲类传染病.其病理变化主要由霍乱弧菌的肠毒素所致,临床表现为不同程度的腹泻、呕吐、失水,少数患者出现肌肉痉挛、代谢性酸中毒、循环衰竭等.……; 陈晓月金宁一邹伟海洋; 关键词：霍乱毒素黏膜免疫 CHOLERA 甲类传染病亚单位毒素蛋白

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教育部科学技术研究重点项目(306006)