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组合抗原ELISA法和潜伏态IFA在HHV-8血清检测中的对比研究: 2007年; 目的比较HHV-8组合抗原ELISA检测法与潜伏态病毒IFA法的检测灵敏性与特异性,并验证组合抗原ELISA法作为分子流行病学调查方法的可行性。方法组合抗原ELISA检测法与潜伏态病毒IFA法对32例法国AIDS相关KS患者血清和23例法国肝移植后皮肤癌患者血清检测对比;组合抗原法对12例新疆地区KS患者血清和不同地区儿童血清进行HHV-8检测,结果32例KS患者血清组合抗原ELISA与潜伏态IFA的检出效率分别为75.0%和40.6%,其中潜伏态IFA检出的13例阳性血清,12例被组合抗原ELISA成功检出。潜伏态IFA检测阴性的19例KS血清中,组合抗原检出12例阳性血清;23例肝移植后皮肤癌患者血清潜伏态IFA检测全部阴性,而组合抗原ELISA检出1例弱阳性,2方法符合率达95.6%。组合抗原对不同地区小样本血清HHV-8检测显示出不同的结果:新疆地区12例KS血清阳性率100%;儿童血清HHV-8检测结果:新疆地区儿童感染率17.8%,四川儿童1.4%,法国儿童0。结论该实验室建立的HHV-8组合抗原ELISA法在灵敏性方面较传统方法有明显提高,特异性方面差异较小,HHV-8组合抗原ELISA初步具备分子流行病学调查的灵敏性、特异性要求。; 何方平王星张跃新惠艳林仁勇卢晓梅何斌温浩; 关键词：免疫荧光法 ELISA法人类8型疱疹病毒

三种人类8型疱疹病毒特异性抗原表达及复合抗原血清学检测方法的建立被引量：3: 2007年; 目的建立人类8型疱疹病毒(HHV-8)血清学检测办法。方法利用E.coli系统合成HHV-8三个抗原性较强的融合蛋白:K8.1,ORF65和ORF73 C,作为检测抗原,阳性血清为本地12份卡波西肉瘤患者血清和32份AIDS相关型卡波西肉瘤患者血清;阴性血清为20份皮肤肿瘤患者血清和77份15岁以下儿童血清。以Western印迹及ELISA法确定各重组蛋白免疫原性和该混合抗原ELISA法的敏感度和特异度。结果获得高纯度的3种8型疱疹病毒特异重组蛋白,均具备较强的抗原特性。应用上述复合抗原ELISA法与传统免疫荧光法共同筛查同批次阳性和阴性血清,发现前者敏感度远高于后者,分别为81.8%和34.4%,特异度则为97.9%。结论K8.1、ORF65、ORF73 C是建立HHV-8血清学检测方法较佳的候选抗原,有更高的敏感度和特异度。; 王星何方平卢晓梅赵淑君林仁勇何斌温浩; 关键词：抗原重组融合蛋白质类

人类8型疱疹病毒开放读码框_(73C)基因原核表达、纯化及鉴定研究: 2006年; 目的构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)基因开放读码框(ORF)_(73C)重组原核表达质粒并诱导表达,获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白,并对其免疫活性进行初步鉴定。方法软件设计引物,分别在引物两端添加特异的酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF_(73)质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增ORF_(73C)基因序列,克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET28a- ORF_(73C)；转化E．coli DH_(5α),经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性,转入E．coli BL21(DE3),并诱导表达,以多聚组氨酸亲合层析柱纯化,凝胶蛋白电泳、Western印迹方法行表达蛋白的分析和抗原特异性免疫鉴定。结果测序结果表明构建的pET28a-ORF_(73C)原核表达质粒连接正确,插入的ORF_(73C)基因片段为453 bp。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明ORF_(73C)基因成功表达,在相对分子质量20000处有表达条带；Western印迹分析显示重组蛋白能被卡波济肉瘤患者阳性血清识别,具有良好的抗原性。结论成功构建了pET28a-ORF_(73C)原核表达质粒,获得的纯化HHV-8潜伏态相关核抗原蛋白与卡波济肉瘤患者血清具有特异性识别,显示其作为检测抗原的可能,但其敏感性和特异性则有待进一步的验证。; 何方平王星林仁勇卢晓梅冯晓辉张亚楼张跃新何斌温浩; 关键词：疱疹病毒8型开放阅读框架

人类8型疱疹病毒K8.1基因原核表达重组质粒的构建: 2007年; 目的:构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)K8.1基因原核表达重组质粒,获得HHV-8外壳蛋白重组融合蛋白,为制备检测抗原建立平台。方法:根据基因库K8.1全长基因序列和pET41a载体的多克隆位点设计引物,分别在引物两端添加特异酶切位点,以pGEM-Teasy/K8.1质粒为模板,PCR扩增K8.1基因全长序列,克隆入原核表达载体pET-41a,构建原核表达质粒pET41a-K8.1;转化大肠杆菌DH5α,经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性。结果:酶切鉴定表明在约500bp处可见酶切片段,测序结果表明构建的pET41a-K8.1原核表达质粒连接正确,插入的K8.1基因片断为494bp。结论:成功构建了pET41a-K8.1原核表达质粒,为获得重组融合HHV-8外壳蛋白建立了平台。; 何方平王星林仁勇卢晓梅冯晓辉张亚楼张跃新何斌温浩; 关键词：人类8型疱疹病毒原核表达

人类8型疱疹病毒K8.1N基因编码包膜糖蛋白的原核表达及其抗原特异性分析: 2007年; 目的:制备人类8型疱疹病毒(HHV-8)K8.1N基因编码包膜糖蛋白的原核表达融合蛋白,并鉴定其抗原特异性。方法:将重组质粒pET41a-K8.1N转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽S转移酶(GST)/K8.1N融合蛋白,经Glutathione Sepharose4B亲和层析柱纯化。采用Western blot法观察GST/K8.1N融合蛋白(作为抗原)与新疆地区、法国卡波西肉瘤(KS)患者血清以及四川健康儿童血清的血清学反应。结果:IPTG诱导后的菌体裂解蛋白,经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后,显示有一个46kD的融合蛋白表达,经Westernblot法鉴定此融合蛋白能被KS患者血清特异性地识别,新疆地区KS患者血清检出率为78.6%,法国KS为12.0%,四川健康儿童血清无一例与GST/K8.1N融合蛋白发生反应。结论:HHV-8包膜糖蛋白编码基因在大肠杆菌BL21中获得正确表达,并与KS患者血清具有特异识别性。; 赵淑君何方平王星陈晓何斌温浩; 关键词：人类疱疹病毒8型原核表达

人类8型疱疹病毒小衣壳蛋白ORF65基因的原核表达及其生物信息学分析: 2007年; 目的:构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)小衣壳蛋白(ORF65)基因重组原核表达质粒并诱导表达,获得其重组融合蛋白。方法:软件设计引物,在引物两端添加特异性酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF65为模板,PCR扩增基因序列,克隆入原核表达载体pET-41a中,构建原核表达质粒pET41a-ORF65,转化大肠杆菌(E.coli)DH5x,经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性,转入E.coli BL21(DE3),并诱导表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法以及序列分析软件DNAMAN 5.0、Vector NTI Suite 6、Primer Primier 5对表达蛋白进行生物信息学分析。结果:测序结果表明所构建pET41a-ORF65原核表达质粒连接正确,SDS-PAGE表明ORF65基因获得成功表达,生物信息学分析显示该蛋白含有1个N糖基化位点,2个蛋白激酶C磷酸化位点,4个胆碱激酶Ⅱ磷酸化位点,4个N肉豆蔻酰化位点,1个酰胺化位点。BlastP数据库的相似性检索发现有与之有较高同源性的蛋白。结论:成功表达HHV-8病毒小衣壳蛋白ORF65,该蛋白与疱疹病毒衣壳蛋白的同源性较高,是疱疹病毒衣壳蛋白家族中的一员。; 热依汗.谢以提克迪亚阿斯哈尔王星何方平温浩何斌; 关键词：人类疱疹病毒8型原核表达生物信息学分析

新疆地区200例汉族HHV-8重组抗原血清流行病学调查分析被引量：1: 2007年; 目的:了解新疆地区汉族人群人类8型疱疹病毒(HHV-8)流行状况。方法:随机选择新疆地区2所三级甲等医院收治的155例汉族肿瘤患者,同时采集45例门诊就诊10岁以下汉族儿童血清,以77例四川儿童血清作为对照。采用组合抗原酶联免疫(ELISA)方法对277例样本血清进行HHV-8特异性抗体的流行病学调查。结果:155例肿瘤患者中41例血清HHV-8抗体呈现阳性反应,阳性率26.5%,45例新疆儿童8例血清阳性,阳性率17.8%,77例四川儿童中1例血清阳性,阳性率1.3%。结论:新疆地区汉族人群为HHV-8高流行区,儿童感染率高于其他地区,性传播途径可能不是新疆地区普通人群HHV-8主要传播途径。; 何方平王星张跃新惠艳林仁勇卢晓梅何斌温浩; 关键词：人类8型疱疹病毒血清流行病学调查卡波西肉瘤

新疆地区487例肿瘤患者HIV血清流行病学调查分析被引量：4: 2007年; 目的:了解新疆地区肿瘤患者艾滋病病毒(HIV)感染情况。方法:随机收集新疆地区487例肿瘤患者血清,盲法检测HIV抗体,HIV(+)者行蛋白印迹(Western-blot)确诊试验,对HIV(+)的肿瘤患者分别从病种、年龄、性别、族别、吸毒史、地域、临床诊断等方面进行分析。结果:487例肿瘤患者中检出HIV(+)14例,检出率2.88%,其中维吾尔族、汉族HIV(+)检出率分别为3.64%(12/330)和1.27%(2/157),男性、女性HIV(+)分别为4.07%(7/172)、2.22%(7/315),女性7例中4例为宫颈癌患者。结论:新疆地区普通人群HIV传播以性传播为主要途径。; 何方平王星张跃新张朝霞林仁勇卢晓梅何斌温浩; 关键词：艾滋病病毒感染

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新疆维吾尔自治区自然科学基金(200421122)

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