国家自然科学基金(30471459)
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
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- 相关机构：天津医科大学中国科学院天津医学高等专科学校更多>>
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- 糖尿病大鼠补锌后新基因片段表达与鉴定
- 2007年
- 目的对糖尿病大鼠补锌后出现的新基因片段进行组织表达与鉴定。方法对前期研究中分离到的补锌糖尿病大鼠与糖尿病对照组比较有异差的基因片段进行克隆、测序、同源性分析后,对发现的6条新基因(Zn-2、Zn-6、Zn-10、Zn-14、Zn-19、Zn-20)进行RT-PCR鉴定,以排除假阳性并观察其在各组大鼠肝脏中的表达水平。结果20条cDNA片段经克隆、测序、同源性分析,发现了6个基因片段(Zn-2、Zn-6、Zn-10、Zn-14、Zn-19、Zn-20),在Gen Bank中未找到高同源性的序列,为新的表达序列标签(EST)。其中4个基因片段在糖尿病对照组、糖尿病补锌组肝脏中的表达量均低于正常对照组,糖尿病补锌组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05)。4个新基因片段被Gen Bank收录,接收号分别为AY952968,AY952970,DQ351838,DQ351839。结论分离并克隆了4条与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,在GenBank上成功登录。
- 孙忠吴蕴棠张万起王夏刘小勇周壮志王永明
- 关键词：糖尿病大鼠RT-PCR新基因基因克隆锌
- 补锌糖尿病大鼠差异显示新基因片段的克隆鉴定及组织表达
- 2006年
- 目的克隆补锌糖尿病大鼠差异显示的新基因片段并检测其在各组织中的表达分布。方法对前期研究中分离到的与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,同源性分析,对发现的2条新基因(2#差异显示片段及6#差异显示片段)设计特异性引物,进行RT-PCR检测,以观察新基因在各组大鼠肝脏中的表达变化,并检测新基因在不同组织中的表达情况。结果经克隆、测序、同源性分析,在GenBank中未找到与2#差异显示片段及6#差异显示片段高同源性的序列,确定2#及6#差异显示片段为新的基因片段;2#及6#新基因片段在糖尿病对照组、糖尿病补锌组的表达量均低于正常对照组,糖尿病补锌组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05);2#新基因片段在大脑及胰腺中表达量较高,在肾脏中表达量较低,在心肌、骨骼肌、胸腺中无表达。6#新基因片段在心肌、骨骼肌、大脑、肾脏、胰腺中均有表达,但在胸腺中无表达;2#及6#新基因片段被GenBank收录,接收号分别为AY952968、AY952970。结论分离并克隆了2条与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,经RT-PCR检测其在各组大鼠肝脏及其它各组织中表达分布后,在GenBank上成功登录。
- 孙忠吴蕴棠张万起王夏王永明
- 关键词：糖尿病大鼠RT-PCR新基因基因克隆
- 硒对氧化损伤大鼠肝细胞糖代谢关键酶影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究硒对氧化损伤大鼠肝细胞糖代谢关键酶表达的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用0.1 mmol/L的H2O2建立氧化损伤细胞模型,并施加不同剂量硒干预,通过实时定量PCR技术检测葡萄糖激酶（glu-cok inse,GK）、糖原合成酶（glycogen synthase,GS）和蛋白激酶B（protein kinase B,PKB/Akt）的mRNA表达,并采用蛋白免疫印迹（W estern-b lot）方法检测Akt的蛋白表达水平。结果补硒各组GK的mRNA表达量为（9.692~16.588）×10-6,均高于H2O2损伤组（P〈0.05）;高剂量补硒组GS和Akt的mRNA表达量分别为57.618×10-6和0.2398×10-3,均高于H2O2损伤组（P〈0.05）;补硒各组Akt的蛋白表达量为（0.3343~0.4346）×10-3,均高于H2O2损伤组（P〈0.05）。结论补硒可以在一定程度上改善氧化损伤对肝细胞糖代谢关键酶GK、GS的影响,其机制可能与上调胰岛素信号传导通路的关键信号分子Akt的表达有关。
- 林晓静廖明周书川吴蕴棠
- 关键词：硒葡萄糖激酶糖原合成酶蛋白激酶B
- 补锌糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因表达
- 2006年
- 目的探讨补锌对糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因蛋白磷酸酶2A(PP2A)和磷脂酶D(PLD)表达的调控。方法对补锌糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析;设计基因序列引物,RT-PCR检测观察各组大鼠肝脏中基因表达的变化。结果结果显示,片段Zn-4、Zn-8的碱基序列分别与PLD、PP2A同源性为100%,99%。糖尿病对照组PP2A mRNA表达量(0.5072±0.0574)低于正常对照组(1.3303±0.1855),P<0.05;糖尿病补锌组PP2A mRNA的表达量(0.7005±0.1563)与糖尿病对照组比较有所恢复(P<0.05)。糖尿病对照组PLD mRNA表达量(1.0754±0.0312)和糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量(1.0130±0.0992)均高于正常对照组(0.7995±0.1040),P<0.05;糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量与糖尿病对照组比较无变化(P>0.05)。结论补锌对糖尿病大鼠肝脏PP2A mRNA表达有上调作用,这可能是锌改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。
- 孙忠吴蕴棠张万起赵娜王夏王永明
- 关键词：基因表达
- 补硒糖尿病大鼠ABCa5基因克隆鉴定与表达
- 2008年
- 目的克隆补硒糖尿病大鼠三磷酸腺苷(ATP)结合盒(ABC)转运蛋白A亚族的成员之一-ABCa5基因片段并检测其在肝脏中的表达水平。方法将前期分离到与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段(简称差显片段)进行克隆、测序和同源性分析,并对ABCa5基因片段重新设计特异性引物,进行半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测,观察其在各组大鼠肝脏组织中表达的变化。结果发现差显片段Se-12的碱基序列与ABCa5基因的同源性为99%。RT-PCR结果表明,与正常对照组(NC)(0.5729±0.0241)相比,糖尿病对照组(DM)(0.1606±0.0075)和糖尿病补硒组(DM+Se)(0.3857±0.0194)中ABCa5基因mRNA的表达水平明显降低,但DM+Se组中的该mRNA表达水平较DM组有所升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ABCa5在糖尿病的发病及代谢过程中起着一定的调节作用;补硒可以上调糖尿病大鼠肝脏中ABCa5mRNA的表达水平,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。
- 廖明吴蕴棠孙忠谢娟王夏王永明
- 关键词：硒糖尿病
- 硒对氧化损伤大鼠肝细胞凋亡的影响被引量：8
- 2010年
- 目的研究硒对于H2O2诱导大鼠肝细胞(BRL)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法采用0.1mmol/L的H2O2建立氧化损伤的细胞模型,并施加不同剂量的补硒干预。通过测定细胞活力(MTT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)活力、丙二醛(MDA)含量和细胞凋亡率,研究硒对氧化损伤肝细胞的保护作用,采用实时定量PCR技术检测细胞GPH-Px和凋亡信号调节激酶1(ASK1)的mRNA表达水平,并通过Western blot技术检测ASK1的蛋白表达水平。结果补硒组细胞MTT(OD)值和GSH-Px活力高于损伤组,MDA的含量和细胞凋亡率低于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05)。补硒组GPH-Px的mRNA表达水平高于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05),补硒组ASK1的mRNA和蛋白表达水平低于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论硒可能通过增加细胞GSH-Px的mRNA表达和酶活性、下调ASK1 mRNA和蛋白的表达、降低细胞中MDA含量等作用,对氧化损伤所致的肝细胞凋亡起到一定的保护作用。[营养学报,2010,32(5):466-469]
- 廖明吴蕴棠孙忠周书川林晓静
- 关键词：硒肝细胞细胞凋亡
- 硒对糖尿病大鼠肝脏磷脂酶D基因表达的影响
- 2006年
- 目的:研究硒对糖尿病大鼠代谢相关基因表达的调控作用。方法:对前期研究分离到的与补硒50μg/kgbwd有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析,选择目的基因进行RT-PCR验证,以观察各组大鼠之间肝脏中基因表达的变化。结果:差异显示基因片段Se-4的碱基序列与磷脂酶D(PLD)基因片段的同源性为100%。RT-PCR验证结果显示:PLDmRNA在糖尿病对照组、糖尿病补硒组大鼠肝脏中的表达水平较正常对照组明显增高,但糖尿病补硒组PLDmRNA的表达较糖尿病对照组有所降低(P<0.05)。结论:硒可抑制糖尿病大鼠肝脏中PLDmRMA的表达,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。
- 吴蕴棠孙忠王夏刘小勇周壮志王永明
- 关键词：硒糖尿病基因表达PLD
- 硒对糖尿病大鼠肝脏蛋白磷酸酶基因表达影响被引量：2
- 2006年
- 目的研究补硒对糖尿病大鼠肝脏代谢相关基因表达的影响。方法通过对前期研究分离到的与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,并进行同源性分析。根据待检测的基因序列设计引物,进行RT-PCR检测,以观察各组大鼠之间肝脏中基因表达的变化。结果经过克隆、测序、同源性比较,差异显示片段Se-8的碱基序列与蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的同源性为99%。糖尿病对照组(0.507 2±0.057 4)、糖尿病补硒组(0.698 2±0.039 6)PP2A表达量低于正常对照组(1.330 3±0.185 5)(P<0.05);糖尿病补硒组PP2A的表达量(0.698 2±0.039 6)高于糖尿病对照组(0.507 2±0.057 4)(P<0.05)。结论补硒对糖尿病大鼠肝脏PP2AmRNA表达有上调作用,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。
- 吴蕴棠孙忠张万起王夏刘小勇周壮志王永明刘紫萍赵娜
- 关键词：蛋白磷酸酶2A糖尿病大鼠RT-PCR基因克隆硒
- 补硒糖尿病大鼠新基因片段的鉴定及组织表达
- 2007年
- 目的:克隆补硒糖尿病大鼠差异显示的新基因片段并检测其在各组织中的表达水平。方法:对前期研究中分离到的补硒糖尿病大鼠与糖尿病对照组之间差异显示的基因片段进行克隆、测序、同源性分析,对发现的5条新基因(Se-2、Se-6、Se-10、Se-14、Se-18)设计特异性引物,进行RT-PCR检测,以排除假阳性并观察其在各组大鼠肝脏中的表达水平及在不同组织中的表达分布。结果:经克隆、测序、同源性分析,发现有5个基因片段(Se-2、Se-6、Se-10、Se-14、Se-18)在GenBank中未找到高同源性的序列,为新的EST片段。其中4个基因片段(Se-2、Se-10、Se-14、Se-18)在糖尿病对照组、糖尿病补硒组肝脏中的表达量均低于正常对照组,糖尿病补硒组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05);在大鼠多种组织中表达水平也不甚相同。4个新基因片段被GenBank收录,接收号分别为AY952968、DQ351839、DQ351838、DQ351840。结论:分离并克隆的4条与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,可能与硒改善糖尿病糖脂代谢紊乱有一定关系。
- 孙忠吴蕴棠王夏刘小勇周壮志王永明
- 关键词：糖尿病大鼠RT-PCR新基因基因克隆硒
