广东省自然科学基金(2007)
- 作品数：9 被引量：63H指数：4
- 相关作者：姜晓丹邹雨汐张洪钿徐如祥于淑娟更多>>
- 相关机构：南方医科大学广东省农业科学院华南理工大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 荔枝粗多糖脱蛋白方法的研究被引量：21
- 2008年
- 以脱蛋白率和多糖损失率为指标,比较Sevag法、三氯乙酸-Sevag联合法以及酶-Sevag联合法对荔枝粗多糖的脱蛋白效果,结果表明:Sevag法、三氯乙酸-Sevag联合法和酶-Sevag联合法的脱蛋白率分别为42.83%、78.57%和90.97%,多糖损失率分别为31.55%、25.74%和24.78%,综合比较分析发现酶-Sevag联合法效果最好,是一种有效的荔枝多糖脱蛋白方法。
- 孔凡利张名位于淑娟池建伟魏振承张雁张瑞芬
- 关键词：荔枝多糖脱蛋白
- Scriptaid对小鼠体细胞核移植克隆胚早期发育能力的提高作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨抗肿瘤药物Scriptaid对小鼠体细胞核移植（SCNT）克隆胚体外发育的影响及提高移植效率的新途径。方法以C57／BL6小鼠卯母细胞为受体、卯丘细胞为供体进行SCNT，构建克隆胚，并采用数字随机表法将克隆胚分为5组，分别在含0nmol／L（阴性对照组1、50、100、250、500nmol／LScriptaid的无钙激活剂中激活6h．然后在含相应浓度Scriptaid的KSOM培养基中处理4h，最后转移至KSOM培养基中孵育96h。观察、记录各组克隆胚的发育情况并进行囊胚细胞计数。结果各组克隆胚激活率和2．cell率之间差异无统计学意义（P〉O．05）；250nmol／LScript,aid组的囊胚形成率（24．2％）和囊胚细胞数（56．27±2．43）与0 nmol／L组、50nmol／L组、100nmol／L、500nmol／LScriptaid组之间f其囊胚形成率分别为5．3％、6．5％、9．4％和6．9％．囊胚细胞数分别为44.67±1.53, 50.25±1.26, 52.33± 2.50 和 50.75±1.50比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论250nmol／LScrimaid能有效提高小鼠SCNT克隆胚体外早期发育能力。
- 李正阳邹雨汐孙海涛姜晓丹
- 关键词：核移植组蛋白去乙酰化干细胞
- 骨髓源及脂肪源干细胞向神经元样细胞诱导分化潜力的比较研究被引量：12
- 2009年
- 目的比较骨髓源基质干细胞（BMSCs）和脂肪源间充质干细胞（ADSCs）向神经元样细胞诱导分化的潜力。方法体外分离培养来自成年SD大鼠的BMSCs和ADSCs．传至第5代时加入表皮生长因子（EGF，10ng／mL）和碱性成纤维细胞生长因子fbFGF，20ng／mL），诱导6h、12h、24h、72h、1周、2周后，用免疫荧光染色和Western blot检测两种细胞的神经细胞特异性标志（巢蛋白和B．微管蛋白Ⅲ）的表达，并做统计学分析。结果BMSCs和ADSCs经诱导后，细胞形态发生变化，均表达神经细胞特异性标志。免疫荧光染色结果显示诱导后各时间点BMSCs和ADSCsnstin^J性率或B．tubulinllI阳性率比较差异均有统计学意义（P〈O．05），且诱导后ADSCs表达nestin阳性细胞或B—mbulinIII的能力在各个时间点都EE诱导后BMSCs强，说明诱导后的ADSCs向神经元样细胞方向分化的能力更强。Westernblot结果也与免疫荧光染色结果类似。结论两种不同来源的干细胞在分化成神经元样细胞方面的能力不同，ADSCs比BMSCs具有相对更强的神经元样细胞分化能力。
- 马旭姜晓丹张洪钿林建浩闫中杰秦玲莎
- 关键词：脂肪源间充质干细胞神经元样细胞细胞分化
- 白细胞介素8表达与星形细胞肿瘤增殖与凋亡的相关性研究
- 2008年
- 目的探讨白细胞介素8（IL－8）mRNA、增殖细胞核抗原（PCNA）在星形细胞肿瘤组织中的表达及其与细胞凋亡之间的关系。方法应用RT—PCR方法检测64例星形细胞肿瘤组织及10例正常大脑组织中IL－8 mRNA的表达情况。用免疫组织化学方法检测PCNA在肿瘤组织石蜡标本中的表达，并用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡。结果星形细胞肿瘤组织中IL－8mRNA表达与星形细胞肿瘤的恶性程度有关。随着肿瘤恶性程度的增高，PCNA表达增高，细胞凋亡指数增高。IL－8mRNA表达与PCNA表达呈正相关关系（r=0．938，P〈0．01），与细胞增殖亦呈正相关关系（r=0．907，P〈0．01）。结论IL-8 mRNA表达与星形细胞肿瘤的恶性增殖呈正相关，星形细胞肿瘤通过抑制凋亡并且上调IL-8分泌促进肿瘤细胞增殖，从而导致肿瘤恶性转化。
- 陈保东徐如祥姜晓丹高永中蒋太鹏丁建军李维平
- 关键词：白细胞介素8增殖细胞核抗原细胞凋亡星形细胞肿瘤
- 骨髓基质细胞分化为神经元样细胞后与皮质神经元间突触的建立被引量：1
- 2009年
- 目的观察与大脑皮质神经元共培养的骨髓基质细胞（BMSCs）经诱导分化成神经元样细胞后，与脑皮质神经元之间形成功能性突触的情况。方法无菌条件下取绿色荧光蛋白（GFP）转基因小鼠骨髓，用贴壁筛选法体外培养获得GFP转基因小鼠BMSCs（GFP-GM-BMSCs），在体外培养、扩增、纯化。取第3代GFP-GM-BMSCs，种植到源于小鼠大脑的原代皮质神经元和胶质细胞中，培养介质为加有20ng／mL表皮生长因子（EGF）、20ng／mL碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清培养基（Neurobasal-A＋2％B27），体外模拟建立细胞移植的共培养体系。共培养第10天，利用FM1-43荧光染料染色活动突触小泡的特性，通过荧光显微镜观察共培养的两种细胞之间形成的突触。结果与神经元共培养的GFP-GM-BMSCs在含有EGF、bFGF的无血清培养基中7d后分化为神经元样细胞。共培养10d后，FM1-43染色阳性的突触囊泡明显增加，主要位于神经元样细胞胞体、突起及其末端结构上。结论在体外模拟细胞移植共培养体系中，分化自GFP-GM-BMSCs的神经元样细胞能与神经元之间形成突触样连接。
- 周辉姜晓丹陈祎招杨丽法志强邹雨汐
- 关键词：突触骨髓基质细胞神经元共培养
- 大鼠脂肪基质细胞的分离培养及二步法诱导分化神经细胞被引量：6
- 2009年
- 目的研究脂肪基质细胞体外培养扩增及向神经细胞诱导分化的新方法。方法取SD大鼠的腹膜后脂肪组织，以Ⅰ型胶原酶消化离心，含10％胎牛血清的DMEM／F12培养基重悬细胞，增殖传代，取第5代细胞进行二步法诱导分化。首先以无血清Neurobasal培养基联合应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）20ng／mL、表皮生长因子（EGF）20ng／mL和N2（1：100）添加剂将细胞先诱导成神经球；再取第二代神经球加入1％胎牛血清、5％马血清、0．5μmol／L的维甲酸（RA）和50ng／mL脑源性神经营养因子（BDNF），促进其向神经元和胶质细胞方向分化；免疫荧光染色鉴定细胞分化结果。结果初接种的细胞大多呈圆球状，悬浮在培养基中，24h后贴壁。随着细胞密度加大，形态变成单层成纤维样细胞，呈漩涡状排列。无血清Neurobasal培养基诱导5～7d可见悬浮的神经球出现；神经球迅速增殖，14d时直径可达100μm。分化后的大部分细胞呈现典型的神经元样改变，细胞体为圆形，内可见明显的细胞核，细胞伸出细长突起或网状突起，可见较多的细胞形成网络连接。免疫荧光染色鉴定结果证实，除了神经球可以高表达巢蛋白（nestin）（阳性率75．62％±1．34％）之外，分化细胞还可有效表达β-tubulinⅢ（未成熟神经元标记物，阳性率达57．62％±4．92％）或微管相关蛋白2（MAP2ab）（成熟神经元标记物，阳性率11．25％±3．87％）；有少量细胞表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP）（阳性率18．34％±3．87％）和GalC（阳性率14.35％±3．98％）。结论从成年大鼠脂肪中分离得到的脂肪基质细胞可在体外培养得到大量分化潜能稳定的子代细胞。应用本实验二步诱导法，可得到较高比例的nestin及β-tubulinⅢ阳性细胞，并有一定比例MAP2ab阳性细胞出现。
- 唐艳平张洪钿邹雨汐姜晓丹肖中举
- 关键词：脂肪基质细胞细胞分化神经元样细胞
- 不同方法诱导大鼠脂肪基质细胞定向分化为神经细胞的比较研究
- 2009年
- 目的探索提高大鼠脂肪基质细胞（ADSCs）向神经细胞定向诱导分化比例的实验方法。方法根据所采用的不同细胞诱导分化方法分为A组f直接诱导组：以含血清及神经营养因子的Neurobasal培养基直接诱导ADSCs向神经细胞分化）和B组[神经球诱导组：先以无血清Neurobasal培养基将ADSCs诱导为神经干细胞CNSCs）球，再以含血清及营养因子的Neurobasal培养基诱导神经球干细胞向神经细胞分化]。通过细胞形态学观察以及免疫细胞化学检测巢蛋白（nestin）、β-微管蛋白Ⅲ（β-tubulin Ⅲ）、微管相关蛋白2（MAP2ab）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达，鉴定细胞分化结果。结果免疫细胞化学结果证实，两组细胞均有效表达nestin和β-tubulin Ⅲ。A组细胞在诱导6h时nestin表达可达高峰（73．8％±6．5％），并很快下降（24h为50.3％±3．8％，72h为10．5％±3．0％），72h后即检测不到；β-tubulinⅢ在诱导后24h开始表达（33．5％±6．6％），1周达高峰（84.3％±33％）。B组nestin的高表达持续整个神经球阶段，β-tubulinⅢ在神经球阶段有少量表达（成球后7d为14．1％±3.3％），神经球细胞分化后其表达明显增加（分化后3d为46．4％±6．1％）；B组在由NSCs向神经细胞诱导一定时间后可检测到一定比例的MAP2ab阳性细胞（24．5％）。结论ADSCs在体外稳定扩增传代并在适宜诱导条件下，可以向神经细胞定向分化。应用神经球诱导法和直接诱导法均可得到较高比例的nestin及β-mbulinⅢ阳性细胞，神经球诱导组nestin表达稳定，并有一定比例MAP2ab阳性细胞出现。
- 唐艳平姜晓丹张洪钿邹雨汐徐如祥
- 关键词：脂肪基质细胞细胞诱导神经元样细胞
- 脑胶质瘤干细胞鉴定与增殖及耐药特性的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的从胶质瘤组织中分离和培养出肿瘤干细胞，并初步探讨其生长特性。方法收集脑胶质瘤手术标本并获取细胞，用含有表皮生长因子（EGF）、白血病细胞抑制因子（LIF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）的无血清培养液原代培养，再经免疫磁珠分离得到CD133^＋细胞。并用免疫细胞化学技术检测CD133、NSE和GFAP在细胞中的表达以鉴定CD133^＋细胞，比较不同恶性级别胶质瘤组织的CD133^＋细胞生长情况，并用CCK8法比较CD133^＋和CD133^-细胞对替尼泊苷（VM-26）的耐药性。结果从胶质瘤组织中成功分选获得CD133^＋细胞，这些细胞能自我更新，增殖，并分化成NSE^＋和GFAP^＋的细胞。恶性度高的胶质瘤组织中CD133^＋细胞生长速度明显比低级别中的CD133^＋细胞快，且CD133^＋细胞在含有VM-26培养基中的存活细胞数显著多于CD133^-细胞（P〈0.05）。结论胶质瘤组织中存在肿瘤干细胞，这类细胞具有很强的耐药性，高恶性度胶质瘤组织中的CD133^＋细胞具有更强的增殖能力。
- 秦琨姜晓丹肖志诚徐如祥邹雨汐秦玲莎王建奇田歌
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤干细胞CD133替尼泊苷
- 荔枝多糖活性炭脱色方法研究被引量：23
- 2008年
- 研究温度、时间、pH和活性炭添加量对荔枝多糖脱色的影响,并在单因素试验的基础上进行正交试验以确定荔枝多糖的最佳脱色工艺。试验结果表明,脱色的最佳条件为温度60℃、时间30min、pH4.0、活性炭添加量1.5%。
- 孔凡利张名位于淑娟池建伟唐小俊魏振承
- 关键词：荔枝多糖脱色
