教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-08-0893)
- 作品数：8 被引量：64H指数：7
- 相关作者：王仲孚黄琳娟徐莎张萍王博更多>>
- 相关机构：西北大学咸阳师范学院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：理学生物学医药卫生更多>>
- 苹果果胶活性寡聚半乳糖醛酸的分离制备及其ESI-MS分析研究被引量：8
- 2010年
- 苹果果胶多糖经脱酯化得到果胶酸,以果胶酸为底物通过酶解得到聚合度为2～8的果胶寡糖混合物,并运用阴离子交换柱层析对果胶寡糖混合物进行了分离制备.结果表明,以果胶酸为底物在40℃酶解反应1h为最佳酶解条件得到果胶寡糖混合物,经分离制备得到聚合度为2～5的寡聚半乳糖醛酸单体,总得率为37%,TLC和ESI-MS检测其纯度为92%以上.运用ESI-MS分析寡聚半乳糖醛酸时发现除单体的分子离子峰外,还存在二聚体的分子离子峰,并对二聚体的存在进行了确认。
- 徐溪李潇黄琳娟王仲孚
- 关键词：苹果果胶阴离子交换树脂电喷雾质谱
- 基于电喷雾电离质谱(ESI-MS)的苯胺稳定同位素标记对还原性寡糖(链)的定性定量分析方法被引量：12
- 2010年
- 建立了一种基于电喷雾电离质谱的苯胺稳定同位素标记对还原性寡糖链进行定性及相对定量分析的研究方法.用苯胺标记乳糖标准品,优化了影响标记效率的各种因素,在弱酸性环境下,选择糖链/苯胺/硼氢氰化钠的摩尔比为1∶1.2∶10,于70℃反应15 min即可标记完全;同时考察了4对d0/d5苯胺标记的麦芽糊精寡糖在电喷雾电离质谱中的线性、动态范围以及重现性.结果表明,在15倍动态范围内,相对定量方法呈良好的线性关系(R=0.9986)和重现性(CV=10.20%).为进一步验证定量方法的可靠性,将其应用于人奶中游离寡糖(HMOs)和牛奶中游离寡糖(BMOs)的分析.研究结果表明,人奶中的乳糖含量高于牛奶,人奶游离寡糖比牛奶游离寡糖种类复杂,且岩藻糖基化程度高.该方法成本低廉,标记效率高且后处理方法简单方便,适于微量样品通量化分析,对差异糖组的研究有重要意义.
- 薛向东张萍王仲孚黄琳娟
- 关键词：电喷雾电离质谱
- 高效液相色谱-质谱联用法分析3-氨基-9-乙基咔唑柱前衍生化壳寡糖被引量：7
- 2010年
- 以3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethylcarbazole,AEC)为衍生化试剂对壳寡糖进行柱前衍生,壳寡糖(COS)的还原端与AEC的伯氨基反应生成烯胺,再被硼氢氰化钠(NaBH3CN)还原为二级胺。采用反相C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈和乙酸铵水溶液为流动相(pH4.5),梯度洗脱,在254nm波长处检测,建立了一套壳寡糖衍生物的高效液相色谱(HPLC)分离分析、电喷雾质谱(ESI-MS)及液相色谱-电喷雾质谱联用(LC-ESI-MS)的分析方法。该方法操作简单、灵敏度高、重复性好,在COS的组分分析、质量控制及构效关系研究方面有潜在的应用价值。
- 郭文张英黄琳娟王仲孚
- 关键词：柱前衍生壳寡糖
- κ-卡拉胶寡糖AEC柱前衍生物的LC-ESI-MS/MS^n分离分析被引量：7
- 2011年
- 以κ-卡拉胶为原料,经盐酸水解得到一系列寡糖混合物.以3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethylcarbazole,AEC)为衍生化试剂,对酸解得到的κ-卡拉胶寡糖进行柱前衍生,采用反相C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈和乙酸铵水溶液(pH 4.5)为流动相,梯度洗脱,在254 nm波长处检测,建立了κ-卡拉胶寡糖衍生物的高效液相色谱(HPLC)分离以及液相色谱-电喷雾质谱联用(LC-ESI-MS)分离分析的方法,并对AEC衍生后的κ-卡拉胶寡糖进行多级质谱裂解(MSn),进一步获得了κ-卡拉胶寡糖的结构信息.该方法对κ-卡拉胶寡糖的结构分析、构效关系等方面的研究有参考价值.
- 孙玉姣王承建耿腾飞王仲孚黄琳娟
- 沙蒿籽水溶性胶多糖ASPI-A的结构与免疫活性的初步研究被引量：3
- 2010年
- 从沙蒿籽中提取出水溶性胶多糖,经柱色谱分离纯化得到一种中性多糖组分ASPI-A.采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定其为均一性多糖,平均分子量为5.42×104Da.经IR,GC部分酸水解、甲基化分析等方法对该多糖的化学结构进行了表征.结果表明,该多糖由阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖及半乳糖组成,其物质的量的比为1∶2.8∶4.9∶1.9.ASPI-A为多分支结构,以(1→4)-β-Glc构成主链,部分葡萄糖C6存在分支,由甘露糖以-4)Man(1-连接在葡萄糖C6位,Glc(1-和Gal(1-连接在甘露糖C4位构成.免疫活性实验结果表明,ASPI-A在10～50μg·mL-1浓度范围内对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖反应具有促进作用.
- 郝毓倩黄琳娟春会王仲孚
- 关键词：沙蒿籽多糖免疫活性
- 白芨多糖BSPI-A的分离纯化及结构研究被引量：12
- 2010年
- 从白芨[Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.]块茎中提取出粗多糖(crude Bletilla striata polysaccharide,CBSP),然后经DEAE-cellulose柱层析分离得到BSPI、BSPII两个多糖组分。BSPI过Bio-Gel P-300柱层析纯化后得到组分BSPI-A。高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测得BSPI-A的分子质量大于4.0×105D。经IR、GC、GC-MS、甲基化等方法对该多糖的结构进行表征。结果表明:BSPI-A为直链多糖,主要由β(1,4)甘露糖和β(1,4)葡萄糖组成,其物质的量比为8.09:1。
- 王博徐莎黄琳娟王仲孚
- 关键词：白芨多糖分离纯化
- 糖链的生物质谱分析被引量：12
- 2011年
- 糖链是重要的生物信息分子,在许多生理和病理过程中都发挥着独特作用。糖链结构非常复杂,具有微观不均一性,其分析和结构解析一直是糖生物学研究的瓶颈。质谱具有灵敏度高、可获得多种结构信息和适于分析混合物等优点,是糖链定性定量分析的一种理想手段。电喷雾电离质谱和基质辅助激光解析电离质谱两大生物质谱技术已被广泛应用于糖链的相对分子质量指纹谱分析、序列和连接方式测定及相对定量分析。对近年来以质谱为主要分析手段的糖链分析方法研究进展做一综述。
- 王承健王仲孚
- 关键词：糖链质谱
- Pronase E酶解释放糖蛋白N-糖链的方法及荧光标记衍生物的LC-MS分析被引量：11
- 2010年
- 建立了一种用非特异性酶链酶蛋白酶E(Pronase E)从糖蛋白上释放N-糖链的方法.以牛胰核糖核酸酶B(Ribo B)和鸡白蛋白(Chicken Albumin)为材料,用Pronase E代替N-糖苷酶F(PNGase F)释放N-糖链.当蛋白酶质量与糖蛋白质量比为1∶1时,得到只带一个天冬氨酸(Asn)的闭环N-糖链,称其为糖氨酸(gly-can-Asn),这样既为糖链引入了天然的-NH2活性基团,同时还保持了糖链原有的还原端闭环结构.以9-氯甲酸芴甲酯(Fmoc-Cl)为衍生试剂对解离后的糖氨酸进行衍生,采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI/MS)对Fmoc-Cl糖氨酸衍生物进行分析,建立了糖蛋白的Pronase E酶解、微量糖氨酸的Fmoc-Cl衍生以及糖氨酸衍生物的HPLC-ESI/MS分析方法,该方法保持了N-糖链的天然结构,便于以-NH2为功能基团进一步进行荧光标记、分离制备以及糖链与蛋白质的相互作用研究.
- 徐莎张萍黄琳娟王仲孚
- 关键词：PRONASE糖蛋白电喷雾质谱荧光标记
