国家高技术研究发展计划(2008AA10Z135)
- 作品数：4 被引量：21H指数：3
- 相关作者：罗军赵旺生王伟张晓李建华更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学石河子大学北京市理化分析测试中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 不同泌乳期奶山羊乳腺OPN基因表达及其对MCF-7细胞生长的影响被引量：6
- 2009年
- 为了研究骨桥蛋白基因(OPN)在奶山羊(Capra hircus)乳腺组织不同泌乳期的变化规律及其功能,采用SYBR Green染料建立该基因的实时荧光定量PCR(QPCR)分析方法,以β-actin基因为内参,对该基因在乳腺组织泌乳28d、60d、100d、190d、270d和330d的mRNA表达水平进行检测;同时将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA3.1-OPN,所获重组质粒经过酶切和测序鉴定后,转染MCF-7细胞,采用MTT(四唑盐,3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromid)法检测OPN对MCF-7细胞的增殖差异,结果表明:OPN基因在泌乳初期(28d)和泌乳后期(190d)表达水平较高,干奶期最低,其表达水平总体呈现高-低-高-低的变化模式。MTT实验表明转染OPN基因的MCF-7细胞较未转染基因组细胞的生长具有显著差异(P<0.05),说明OPN的表达具有促进MCF-7细胞生长的作用。
- 孙杰罗军刘俊霞李大全
- 关键词：奶山羊乳腺组织荧光定量PCR细胞生长
- 奶山羊乳腺正反消减文库的构建及序列分析
- ＜正＞引言在奶山羊一个泌乳周期的不同阶段,产奶量的高低与乳成分的变化存在很大的差异。目前,人们逐渐认识到导致这些差异产生的原因,是由乳腺组织中诸多相关功能基因时空表达决定的,但其中的调控机理尚不
- 孙杰罗军武会娟刘俊霞李大全
- 关键词：奶山羊乳腺
- 文献传递
- 西农萨能羊FAS基因shRNA序列筛选及其腺病毒载体的构建被引量：8
- 2010年
- 山羊脂肪酸合酶（Fatty acid synthase,FAS）是脂肪酸合成的关键酶,对乳腺短、中链脂肪酸合成起重要调控作用。设计了shRNA-5544、shRNA-5936s、hRNA-6132 3条针对FAS基因不同区域的小发夹RNA（Short hairpin RNA,shRNA）及一条阴性对照序列shRNA-NC,并构建表达这4条shRNA序列的入门载体及其靶基因与红色荧光蛋白基因的融合表达载体,二者共转染HEK 293细胞进行有效序列筛选,结果显示shRNA-5544和shRNA-5936序列具有明显的干扰效果。在LR Clonase-Ⅱ重组酶作用下,分别将pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-5544、pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-5936及pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-NC入门载体与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST进行LR重组,经氨苄青霉素及氯霉素抗性筛选后成功获得3个重组腺病毒载体,ScaⅠ酶切鉴定及测序分析证实所构建的重组腺病毒载体中插入序列与设计序列一致。重组腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,利用Lipofectamine 2000转染HEK 293细胞,10~12 d后收集病毒,在HEK 293细胞中反复扩增3次后,获得高滴度的重组腺病毒,利用TCID50法测定重组腺病毒滴度分别为6×108PFU/mL（表达shRNA-5544序列）、5×108PFU/mL（表达shRNA-5936序列）及6×108PFU/mL（表达shRNA-NC序列）,为进一步在原代培养的山羊乳腺上皮细胞中进行FAS基因的RNA干扰研究奠定基础。
- 王伟罗军赵旺生李建华张晓王龙坛
- 关键词：乳腺SHRNA腺病毒载体
- 西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺组织差异基因的筛选被引量：2
- 2010年
- 旨在利用抑制性削减杂交（SSH）技术筛选西农萨能奶山羊泌乳中期和后期的差异表达基因,并用实时定量PCR（Q-PCR）分析差异基因的表达丰度,探讨奶山羊不同泌乳阶段乳腺组织的基因表达规律。本研究以西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺组织的mRNA互为检测子（Tester）和驱动子（Driver）构建cDNA消减文库（M-L和L-M）,随机挑选克隆测序,进行序列比对分析,并检测部分差异基因在乳腺组织中的表达丰度。结果,成功构建了泌乳中期和后期的cDNA文库,随机挑选30个克隆测序,得到M-L和L-M文库中与细胞凋亡、抗氧化、脂类代谢、能量代谢等生理过程相关的差异基因,对其中的6个基因进行实时定量分析,发现5个均为阳性克隆,表达水平增加了1.3~5.5倍不等。结果表明,利用SSH技术成功构建了泌乳中期和后期乳腺组织正反向消减cDNA文库,筛选出24个差异基因,为进一步研究奶山羊乳腺组织基因调控机理奠定了基础。
- 武会娟罗军赵旺生王伟
- 关键词：乳腺组织差异表达基因实时定量PCR
- 猪Antizyme-1基因结构分析
- 引言抗酶蛋白是由许多序列保守的同源蛋白组成的一个大家族,目前报道的有四种(AZ1、AZ2、AZ3、AZA)。人和鼠的AZ1基因都由5个外显子和4个内含子组成,其转录起始位点都定位于第一个ATG密码子上游75和76位核苷酸...
- 李仕新吴雪艳张豪
- 文献传递
- 奶山羊POU1F1基因CDs区的克隆、分析及原核表达被引量：5
- 2010年
- 【目的】克隆奶山羊垂体特异性转录因子POU1F1基因CDs区,并对其进行生物信息学分析和原核表达。【方法】采集关中奶山羊垂体组织,提取其总RNA,根据绵羊POU1F1基因序列,利用反转录RT-PCR克隆POU1F1基因CDs区,对其进行生物信息学分析,并构建原核表达载体pET-32a-POU1F1,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达。【结果】关中奶山羊POU1F1基因(GenBank登陆号:FJ547813)开放读码框由876个碱基组成,编码291个氨基酸,基中包含1个POU-specific结构域(从第124～198个氨基酸)和1个Homeobox结构域(从第214～276个氨基酸);奶山羊POU1F1基因CDs区核苷酸序列与绵羊(NM_001009350)、牛(NM_174579)、人(NM_000306)和小鼠(NM_008849)的同源性分别为98%,97%,91%和86%,其氨基酸序列与绵羊、牛、人和小鼠的同源性分别为98%,98%,96%和92%;成功构建了重组质粒pET-32a-POU1F1的原核表达系统,并在体外条件下诱导表达出融合蛋白His-POU1F1。【结论】POU1F1基因编码的功能氨基酸在奶山羊、绵羊、牛、人和小鼠上高度保守,推测奶山羊POU1F1基因与其他物种的POU1F1基因具有相似的功能。
- 李建华罗军张晓樊睿王伟郝娟赵旺生
- 关键词：关中奶山羊POU1F1克隆生物信息学分析原核表达
