福建省科技计划重点项目(2008I0011)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 相关作者：孙蓬明毛晓丹林芬阮冠宇董滨华更多>>
- 相关机构：福建医科大学北京肿瘤医院北京大学更多>>
- 发文基金：福建省科技计划重点项目国家自然科学基金留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人ERRα基因小分子干扰RNA慢病毒载体构建及鉴定
- 2011年
- 目的构建并鉴定靶向人ERRα基因的小分子干扰RNA的慢病毒载体。方法针对ERRαmRNA设计了4条si RNA,并构建pGCSIL-GFP-siERRα慢病毒质粒,PCR扩增阳性克隆并测序鉴定。用pGCSIL-GFP-siERRα、pHelp-er1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将慢病毒干扰RNA及含有ERRα过表达载体共转染293T细胞,Western-blot检测ERRα表达,观察蛋白表达抑制效果。结果 PCR和测序结果与设计的干扰序列一致,病毒滴度达2×109TU/ml。转染细胞中ERRα蛋白表达显著降低。结论成功构建高表达、高效率的人ERRα基因小分子干扰RNA慢病毒载体,为进一步研究ERRα在细胞核内转导中的作用机制和靶向ERRα治疗奠定基础。
- 孙蓬明毛晓丹林芬蔡良知吴齐斌宋一一
- 关键词：RNA干扰
- 靶向ERR α siRNA对不同类型子宫内膜癌细胞凋亡的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探究si RNA作用于不同类型子宫内膜癌细胞雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-related receptorα,ERRα)的表达及细胞的凋亡情况。方法 si RNA处理RL952、AN3-CA、HEC-1A和HEC-1B细胞,以RL952、AN3-CA为Ⅰ型子宫内膜癌体外模型,HEC-1A、HEC-1B为Ⅱ型子宫内膜癌体外模型;采用荧光定量PCR法检测ERRαm RNA的表达,Western blot法检测ERRα蛋白的表达,流式细胞仪分别检测si RNA干扰后4株子宫内膜癌细胞的凋亡情况。结果 si RNA组较对照组ERRαm RNA表达水平显著下降(RL952:0.701±0.017 vs.1.165±0.019;AN3-CA:0.899±0.019 vs.1.362±0.007;HEC-1A:0.093±0.004 vs.0.541±0.038;HEC-1B:0.158±0.004 vs.0.356±0.001;P均<0.05)。各株细胞si RNA组与对照组ERRαm RNA的表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),ERRαm RNA表达分别减少了39.77%、34.01%、82.82%和55.78%。West ern blot结果显示,4株细胞RNA干扰后ERRα蛋白表达与m RNA表达趋势一致。4株细胞凋亡率:RL952为(30.000±1.056)%vs.(10.572±1.027)%;AN3-CA为(32.931±1.613)%vs.(10.274±0.882)%;HEC-1A为(17.272±0.950)%vs.(8.704±0.608)%;HEC-1B为(18.703±1.877)%vs.(3.801±0.265)%,si RNA干扰4株细胞后凋亡率与各自对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 si RNA能够有效抑制子宫内膜癌中ERRα的表达,ERRα低表达可能与子宫内膜癌细胞的凋亡增加密切相关。
- 毛晓丹孙蓬明林东红阮冠宇董滨华林芬
- 关键词：SIRNA凋亡子宫内膜癌细胞
- ERRα过度表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞内分泌治疗的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨孤儿受体-雌激素受体相关受体α(ERRα)在子宫内膜癌Ishikawa细胞中过度表达对内分泌治疗的影响。方法重组并构建含有绿色荧光蛋白(GFP)和G418耐药筛选标记的真核表达质粒pEGFP-N1-3FLAG-ERRα,瞬时转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa后采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测ERRαmRNA和蛋白的表达情况。使用不同浓度的ICI182780处理子宫内膜癌Ishikawa细胞、Ishikawa-空载体细胞(Ishikawa-空)和ERRα过度表达的(Ishikawa-ERRα)细胞,流式细胞技术检测分析10-6mol/LICI182780对细胞诱导的凋亡情况。结果瞬时转染pEGFP-N1-ERRα质粒后,Ishikawa在mRNA和蛋白水平均能检测到ERRα的表达增加。流式细胞仪细胞凋亡分析表明,ERRα过度表达导致子宫内膜癌细胞Ishikawa耐受ICI182780的诱导凋亡作用(P<0.05)。结论 ERRα过度表达为激素依赖性的子宫内膜癌细胞株Ishikawa提供了一种耐受内分泌治疗的机制。
- 孙蓬明宋一一高敏毛晓丹赵丽君林芬魏丽惠
- 关键词：内分泌治疗耐受机制
- 下调雌激素受体相关受体α对不同类型子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨雌激素受体相关受体α(Estrogen receptor-related receptorα,ERRα)特异性拮抗剂XCT790作用于不同类型子宫内膜癌细胞时ERRα的表达改变及细胞增殖、凋亡情况。方法将XCT790药物作用组设为XCT组,未加药物处理组设为阴性对照组(Negtive Control,NC),加入XCT790溶剂DMSO设为空白对照组(Control,CON),比较ERRαmRNA表达改变。采用定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)和免疫印迹法(Western blot,WB)分别检测RL952、AN3-CA[(Estrogen receptorα+,ERα+),ERRα+]和HEC-1A、HEC-1B(ER-,ERRα+)细胞的ERRαmRNA和蛋白表达水平;采用XCT790处理4株子宫内膜癌细胞,qPCR检测ERRαmRNA的表达情况,WB检测ERRα蛋白的表达情况。应用噻唑蓝比色法(MTT)及流式细胞术分别检测4株子宫内膜癌细胞生长和凋亡情况。结果RL952、AN3-CA细胞ERRαmRNA表达量高于HEC-1A、HEC-1B细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。WB显示,ERRα蛋白在RL952、AN3-CA中均呈较高表达,而HEC-1A、HEC-1B中均呈较低表达,与mRNA水平相吻合。XCT790处理后,XCT组与CON组相比ERRαmRNA和蛋白表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。NC组与CON组ERRαmRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。MTT法显示,肿瘤细胞数量在XCT790作用下显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术显示各株细胞的XCT790组凋亡率较各自CON组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 XCT790能有效抑制子宫内膜癌中ERRα的表达水平,ERRα表达下调与子宫内膜癌细胞增殖、凋亡密切相关。
- 毛晓丹孙蓬明林东红阮冠宇董滨华林芬
- 关键词：增殖凋亡子宫内膜癌细胞
