国家自然科学基金(30960278)
- 作品数：12 被引量：32H指数：4
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- 相关机构：延边大学梅河口市动物疫病预防控制中心更多>>
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- 牛瑟氏泰勒虫与牛卵形巴贝斯虫多重PCR检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫内转录间隔子基因(ITS基因)和牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列,设计合成了2对特异性引物。通过对反应条件进行优化,建立了同时检测牛瑟氏泰勒虫和牛卵形巴贝斯虫的多重PCR方法。结果显示,用该多重PCR方法可同时扩增出2条与试验设计相符的1 020bp(牛瑟氏泰勒虫)和537bp(牛卵形巴贝斯虫)的特异性条带,对牛瑟氏泰勒虫和牛卵形巴贝斯虫的最低检出限分别为10pg/μL和1pg/μL。用该方法对采自吉林省珲春市的23份临床样本进行检测,结果牛瑟氏泰勒虫的阳性率为69%,牛卵形巴贝斯虫的阳性率为52%,混合感染率为52%。表明,建立的多重PCR方法可用于临床诊断。
- 王轶男钱年超黄国明胡诗悦薛书江贾立军张守发
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫多重PCR
- 新孢子虫致密颗粒蛋白截短型NcGRA7t的体外表达及免疫活性检测被引量：1
- 2012年
- 为构建新孢子虫致密颗粒截短型NcGRA7t基因的原核表达质粒,研究其在体外细胞中的表达情况和免疫活性,运用PCR方法和基因克隆技术,构建了pGEX-4T3-NcGRA7t重组质粒,并在大肠杆菌中进行诱导蛋白表达,用SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白在体外的表达情况和免疫活性。结果显示:以新孢子虫的cDNA为模板,从新孢子虫Nc-1株扩增出了NcGRA7t基因,并克隆到了表达载体上。本试验成功构建了重组表达质粒pGEX-4T3-NcGRA7t,表达出的NcGRA7t重组蛋白具有免疫活性,为新孢子虫病的流行病学调查和亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 金春梅于龙政张守发
- 关键词：新孢子虫体外表达免疫活性
- 牛瑟氏泰勒虫不同靶基因PCR检测方法的比较被引量：4
- 2011年
- 为筛选出检测牛瑟氏泰勒虫更为特异、敏感的PCR方法,本试验以牛瑟氏泰勒虫p23和p33基因、HSP70基因及18S rRNA基因为靶基因进行PCR检测,并从其敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,4种靶基因引物对牛瑟氏泰勒虫的检测均有较高的特异性,当牛瑟氏泰勒虫基因组DNA浓度为127 ng/μL时,p23、p33、HSP70及18S rRNA4种基因的最小检测量分别为1×105、1×105、1×104和1×106copies/μL;检测临床样本阳性检出率分别为30.19%(16/53)、39.62%(21/53)、47.17%(25/53)和54.72%(29/53)。表明以18SrRNA基因为靶基因的PCR方法从敏感性和临床检出率上明显优于其他3种基因。
- 金超贾立军王妍王娜莫添添张守发
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫P33HSP70RRNA
- 牛瑟氏泰勒虫重组腺病毒载体Ad-p33的构建与鉴定
- 2011年
- 为了研究并构建出牛瑟氏泰勒虫p33基因重组腺病毒载体,试验根据GenBank(D87198)上发表的牛瑟氏泰勒虫p33基因序列设计合成1对特异性引物,采用PCR技术扩增p33基因,克隆至pMD18-TSimple载体后,亚克隆到腺病毒穿梭载体pCR259中,将经酶切鉴定和PCR鉴定正确的重组穿梭质粒pCR259-p33转化至含腺病毒骨架质粒Transpose-Ad294的E.coliHighQ-1TM感受态细胞中,同源重组产生重组腺病毒载体Ad-p33,并进行了PCR鉴定。结果表明:已成功构建重组腺病毒载体Ad-p33。
- 金超贾立军王妍王娜莫添添张守发
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫重组腺病毒载体
- 延边地区牛瑟氏泰勒虫病的分子流行病学调查被引量：11
- 2012年
- 为了解吉林省延边地区牛瑟氏泰勒虫病的流行情况,分别采用血涂片染色镜检法和PCR方法对采自延边地区的206份牛血液样本进行了牛瑟氏泰勒虫病的分子流行病学调查。结果显示,PCR检测的阳性率为62.6%,显著高于血涂片染色镜检法检测的阳性率(17.5%)。采用统计学分析方法对PCR检测的206份血液样本进行了不同地区、不同年龄、不同品种及饲养方式的比较;结果,不同地区之间和不同品种之间瑟氏泰勒虫感染率差异不显著(P>0.05);而不同年龄阶段之间和不同饲养方式之间牛瑟氏泰勒虫感染率差异显著(P<0.05)。结果表明,吉林省延边地区是牛瑟氏泰勒虫病的流行地区。
- 胡诗悦钱年超王轶男贾立军张守发
- 关键词：瑟氏泰勒虫PCR分子流行病学调查
- 吉林省延边地区羊泰勒虫病的分子流行病学调查被引量：4
- 2013年
- 为了解羊泰勒虫病在吉林省延边地区的流行情况,本研究采用PCR方法和血液涂片染色镜检法对吉林省延边地区延吉市、龙井市、和龙市、珲春市4个地区采集的93份羊血液样品进行检测,并对不同地区、饲养方式、地理条件以及不同年龄间羊泰勒虫病的感染情况进行比较分析。结果显示,PCR方法检测样品的阳性率为31.18%,显著高于血涂片染色镜检法19.35%的阳性率。经统计学分析,不同地区和不同品种,羊泰勒虫感染率差异不显著(p>0.05);而不同年龄阶段和不同饲养方式,羊泰勒虫的感染率差异显著(p<0.05)。调查结果表明,吉林省延边地区是羊泰勒虫病的流行地区。
- 王轶男胡诗悦钱年超薛书江贾立军张守发
- 关键词：羊泰勒虫病PCR分子流行病学调查
- 牛瑟氏泰勒虫ITS基因PCR诊断方法的建立被引量：5
- 2012年
- 本试验根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫ITS基因序列(AY661522.1),应用Primer Premier 5.0和Oligo 6.31软件设计合成1对特异性引物,以牛瑟氏泰勒虫DNA为模板,建立了牛瑟氏泰勒虫ITS基因PCR诊断方法。该方法扩增片段大小为1020 bp,与参考序列的同源性为98%;建立的PCR方法与猪附红细胞体、犬新孢子虫和弓形虫均无交叉反应,最低DNA检出量为1.5 pg/μL;通过对60份临床样品的检测,并与血涂片方法进行比较,结果显示PCR方法具有特异、敏感等特点,适用于牛瑟氏泰勒虫的检测。
- 王轶男贾立军薛书江张影钱年超张守发
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫ITS基因PCR
- 牛瑟氏泰勒虫MPSP双表位基因的克隆及真核表达
- 为研究表位融合蛋白作为牛瑟氏泰勒虫病疫苗的可行性,本试验根据GenBank(FJ515689.1)登录的基因序列设计合成1对引物,以重组质粒pMD18-T-E1-2为模板,PCR扩增出长约360 bp的双表位基因融合片段...
- 钱年超贾立军薛书江张影张守发
- 文献传递
- 牛瑟氏泰勒虫二温式PCR诊断方法的建立及应用
- 为寻求一种能快速、特异、敏感地诊断牛瑟氏泰勒虫病的方法,本试验根据GenBank上的牛瑟氏泰勒虫MPSP基因(GQ180198.1)设计合成了1对特异性的引物T1、T2,建立了检测牛瑟氏泰勒虫病的二温式PCR。该方法与犬...
- 钱年超贾立军薛书江张影黄国明张守发
- 文献传递
- 吉林省部分地区牛瑟氏泰勒虫病流行病学调查被引量：9
- 2013年
- 为了解吉林省牛瑟氏泰勒虫病的流行情况,本研究采用PCR方法和血涂片染色镜检法对采自吉林省6个地区的234份牛血液样品进行了检测,并对不同地区、不同饲养方式、不同地理条件以及不同年龄间牛瑟氏泰勒虫的感染情况进行了比较分析。结果显示,PCR方法检测的样本阳性率为53.4%(125/234),而血涂片染色镜检法检测的阳性率为12.4%(29/234)。经统计学分析,不同年龄间,牛瑟氏泰勒虫感染率差异显著(p<0.05);而不同地区、不同饲养方式以及不同地理条件之间牛瑟氏泰勒虫感染率差异极显著(p<0.01);调查结果表明,吉林省是牛瑟氏泰勒虫病的流行地区,尤其珲春地区牛瑟氏泰勒虫病感染严重。本次调查为吉林省牛瑟氏泰勒虫病的防控提供了依据。
- 胡诗悦张守发钱年超贾立军薛书江孙柯楠林文娟
- 关键词：分子流行病学PCR
