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糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建被引量：11: 2004年; 在多年糖尿病肾病 (diabeticnephropathy ,DN)肾虚证的研究中 ,结果发现血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotensinI -convertingenzyme,ACE)基因多态性与肾阴虚证密切相关[1 ] 。这提示肾阴虚证存在其相关基因。目前克隆疾病的相关基因有多种方法 ,其中抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)对研究复杂基因组的差异基因具有一定的优越性。目的 :采用抑制性消减杂交技术 (suppressionsub tractivehybridization ,SSH)构建汉族人糖尿病肾病 (diabeticnephropathy ,DN)肾阴虚证DNA消减文库。方法 :选择汉族DN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组 ,进行正向和反向消减杂交。用硅胶法抽提血白细胞DNA ,用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段 ,分别与两种不同的接头连接 ,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将PCR产物与U载体连接 ,经蓝白斑筛选后 ,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒 ,构建DN肾阴虚证DNA消减文库。结果 :用SSH方法筛选出了DN肾阴虚证的差异DNA片段 ,得到 5 86个白色克隆 ,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒 ,从而成功地构建了DN肾阴虚证的DNA消减文库。结论 :SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DN肾阴虚证DNA消减文库 ,为进一步筛选和克隆DN肾阴虚证?; 赵晓山罗仁薛耀明张曦倩代方国崔丽娟傅婷婷; 关键词：糖尿病肾病肾阴虚证抑制性消减杂交

运用抑制性消减杂交技术构建糖尿病肾阳虚证DNA消减文库被引量：1: 2006年; 目的:运用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建糖尿病(Diabetic mellitus,DM)肾阳虚证DNA消减文库。方法:选择汉族中医辨证为肾阳虚证的DM患者以及正常人做对照组,进行正向和反向消减杂交。用RsaⅠ酶切用硅胶法抽提基因组DNA成大小不等的片段,分别连接两种不同的接头,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U/A载体连接,经蓝白斑筛选及菌液PCR筛选出阳性重组质粒,构建DM肾阳虚证DNA消减文库。结果:用SSH方法筛选出DM肾阳虚证的差异DNA片段,经克隆及PCR筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了DM肾阳虚证的DNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DM肾阳虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆DM肾阳虚证相关基因奠定了基础。; 崔丽娟赵晓山罗仁董晓蕾周琳孙晓敏; 关键词：糖尿病肾阳虚证抑制性消减杂交

肾虚型糖尿病肾病与血管紧张素Ⅰ转换酶活性的关系(英文)被引量：9: 2004年; 背景:糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)与血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotensinI-convertingenzyme,ACE)基因多态性关系密切,血清ACE活性增高是DN发生发展的危险因素。然而ACE是否与DN肾虚证的发生有关目前尚未清楚。目的:探讨DN肾虚证与血清ACE活性的关系。设计:以诊断为依据的病例对照研究。地点、对象和方法:选择解放军第一军医大学南方医院内分泌科确诊为DN的住院87例患者为研究对象。依据肾虚证诊断标准对患者进行中医辨证,分为肾气虚组(26例)、肾阴虚组(20例)、肾阳虚组(18例)以及对照组(非肾虚患者,23例)。对所有受试者进行ACE活性测定主要观察指标各组DN患者血清ACE活性比较。结果:非肾虚组、肾气虚组、肾阴虚组和肾阳虚组DN患者血清ACE活性分别为(413±112),(492±142),(632±153),(654±125)nkat。非肾虚组与其他3组比较,差异有显著性意义(P<0.05),肾阴虚组、肾阳虚组与其他两组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。肾阴虚组、肾阳虚组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:DN患者血清ACE活性与肾虚证的发生发展密切相关,血清ACE活性可能是DN容易发生肾虚证的物质基础。; 赵晓山罗仁吕建勇薛耀明代方国雷作熹; 关键词：肾虚

慢性肾炎肾阳虚证cDNA消减文库的构建被引量：2: 2009年; 目的:采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建汉族人慢性肾炎(chronicglomerulonephritis CGN)肾阳虚证cDNA消减文库。方法:选择汉族人CGN且中医辨证为肾阳虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交。采用Trizol一步法提取总RNA,用SMART(Switch Mechanism At 5 end of RNATemplate)技术逆转录并扩增总cDNA,用RsaⅠ酶切基因组cDNA成大小不等的片断,分别与两种不同的接头连接,进行2次消减杂交及两交抑制性PCR,建立抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH),在SSH基础上进行镜像选择(mirror orientation selection,MOS),将PCR产物与U载本连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建CGN肾阳虚证消减文库。结果:用SSH方法筛选出了CGN肾阳虚证的差异cDNA片段,得到了443个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了CGN肾阳虚证的cDNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异cDNA片段以构建CGN肾阳虚证cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆CGN肾阳虚证相关基因奠定了基础。; 李玉萍罗仁赵晓山吴敏; 关键词：慢性肾炎肾阳虚证抑制性消减杂交

运用抑制性消减杂交技术构建2型糖尿病肾阴虚证的相关基因文库被引量：6: 2005年; 目的:运用抑制性消减杂交技术构建2型糖尿病肾阴虚证DNA消减文库,为制定2型糖尿病的一、二级康复预防提供理论参考。方法:选择2004-08南方医科大学南方医院内分泌科就诊的汉族2型糖尿病患者1例,符合中医肾虚证诊断标准中关于典型肾阴虚证的诊断,肝肾功能正常,无急慢性感染。以同时期、同性别、年龄相当的自愿者1名作为正常人对照。参照Maxim方法采用硅胶法抽提2例观察对象血白细胞DNA,用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将聚合酶链反应产物与U/A载体连接,经蓝白斑筛选及菌液聚合酶链反应筛选出阳性重组质粒,构建糖尿病肾阴虚证DNA消减文库。测定抽提基因组DNA的纯度及含量;基因组DNARsaI酶切产物;消减杂交产物扩增结果;蓝白斑筛选阳性克隆;聚合酶链反应方法筛选重组质粒。结果:用抑制性消减杂交技术筛选出了糖尿病肾阴虚证的差异DNA片段,基因组DNA经过RasI酶切消化后,所得DNA片段主要集中在200～2000bp;消减杂交产物经两次聚合酶链反应扩增后,产物明显增多,内含数条隐约可见的条带,主要集中在0.2～1.5kb;蓝白斑α互补筛选出含有外源插入片段的阳性克隆,结果正向消减杂交产物得到286个克隆,反向消减杂交产物得到262个克隆;随机挑取92个阳性克隆,经聚合酶链反应分析证实86个克隆的质粒内均载有差异性DNA片段,大小为200～1000bp,从而成功构建了糖尿病肾阴虚证特异的DNA消减文库。结论:抑制性消减杂交技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建糖尿病肾阴虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆糖尿病肾阴虚证相关基因奠定了基础。; 崔丽娟赵晓山罗仁周琳李玉萍; 关键词：肾阴虚杂交基因文库

肾虚型糖尿病肾病患者尿白蛋白排泄变化规律的研究被引量：6: 2004年; 目的 :探讨肾虚型糖尿病肾病患者 2 4h尿白蛋白排泄 ( 2 4hUAE)变化规律。方法 :对糖尿病肾病患者 87例进行了中医辨证 ;利用放免法测定糖尿病肾病患者 2 4hUAE。结果 :发现糖尿病肾病患者以肾虚为主 ,其中非肾虚组 2 3例、肾气虚组 2 6例、肾阴虚组 2 0例、肾阳虚组 18例 ;非肾虚组糖尿病肾病患者 2 4hUAE最低 ,其他肾气虚组、肾阳虚组、肾阴虚组则依次增加。结论 :2 4hUAE与糖尿病肾病患者肾虚证的发生发展密切相关 ,这提示 2 4hUAE可为糖尿病肾病中医诊治提供客观依据。; 赵晓山罗仁吕建勇薛耀明代方国雷作熹; 关键词：糖尿病肾病尿白蛋白排泄肾虚证中医

慢性肾炎肾阴虚证cDNA消减文库的构建被引量：8: 2006年; 目的:采用抑制性消减杂交(SSH)技术构建汉族人慢性肾炎(CGN)肾阴虚证cDNA消减文库。方法:选择汉族人CGN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交。采用Trizol一步法提取总RNA,用SMART技术逆转录并扩增总cDNA,用RsaI酶切基因组cDNA成大小不等的片断,分别与两种不同的接头连接,进行2次消减杂交及2次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建CGN肾阴虚证消减文库。结果:用SSH方法筛选出了CGN肾阴虚证的差异cDNA片段,得到了386个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了CGN肾阴虚证的cDNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异cDNA片段以构建CGN肾阴虚证cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆CGN肾阴虚证相关基因奠定了基础。; 李玉萍罗仁赵晓山李俊聂晓莉; 关键词：慢性肾炎肾阴虚证抑制性消减杂交

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广东省科技计划工业攻关项目(2003B31712)

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