国家自然科学基金(30960276)
- 作品数：4 被引量：21H指数：2
- 相关作者：盛金良杨霞陈创夫王远志张辉更多>>
- 相关机构：石河子大学中国农业科学院兰州兽医研究所黔西南民族职业技术学院更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 单核细胞增生李斯特菌prfA基因重组菌的构建及其生物学特性研究被引量：1
- 2012年
- 为制备单核细胞增生李斯特菌(LM)减毒的prfA基因重组菌,本研究通过构建重组质粒pKSV7-ΔprfA-gfp,电转化至LM TA感受态细胞中,将绿色荧光蛋白基因gfp插入LM的prfA基因第25 bp～93 bp之间,在42℃和10μg/mL氯霉素的双重选择压力下,筛选LM重组菌(rLM-ΔprfA-gfp),并对其生物学特性进行鉴定。试验结果表明,重组菌与亲本菌相比具有相似的体外生长特性,溶血素基因(hly)mRNA的转录水平降低;对小鼠的毒力显著减弱,其LD50由105.53升高到109.79,对肝、脾、肾的损伤不明显;免疫保护力试验显示重组菌与LM TA灭活疫苗的保护率分别为90%和35%,表明rLM-ΔprfA-gfp比传统疫苗具有更高的保护力。本研究构建的rLM-ΔprfA-gfp具有良好的遗传稳定性,并且具有较好的免疫原性,为LM活疫苗载体和分子标记疫苗的研制奠定了基础。
- 丁波孟庆玲乔军陈创夫才学鹏张再超杨丽红
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌同源重组
- 羊种布鲁氏菌BP26蛋白的生物信息学分析
- 2020年
- 目的采用生物信息学方法预测羊种布鲁氏菌BP26蛋白的抗原表位。方法从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌的BP26蛋白的氨基酸序列,利用ExPASy蛋白分析在线软件ProtParam、SOPMA、SWISS MODEL、ProtScale、Signal 5.0、TMHMM 2.0、PSOTR,分析BP26蛋白的理化性质,二、三级结构,亲、疏水性,信号肽,跨膜区及亚细胞定位;使用IEDB分析BP26蛋白的B细胞表位;使用PROSITE SCAN分别BP26蛋白的结构域分析。结果BP26蛋白由250个氨基酸组成,分子式为C1152H1898N328O364S12,相对分子质量为26.5×10^3,理论等电点为6.39,不稳定系数为27.93,为稳定蛋白。二级结构以α-螺旋为主,占41.2%;无规卷曲占36.8%,延伸链占17.2%;β-转角占4.8%。预测其三级结构与同源模板S19株BP26蛋白相似性99.55%,16个BP26分子形成一个新颖的通道状结构。BP26蛋白存在1个跨膜区,该跨膜区域位于7-29位氨基酸,可能为信号肽,与信号肽分析结果一致。Signal 5.0分析BP26蛋白在7-29位氨基酸有一个分泌型蛋白信号肽。BP26蛋白包含有14个线性表位,其中以27-42、108-125、224-240位氨基酸区段为BP26蛋白的优势抗原表位区段。BP26蛋白包含2个N-糖基化位点,2个蛋白激酶C磷酸化作用位点,2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点,5个N-豆蔻酰基化位点;亚细胞定位分析BP26蛋白为膜周质蛋白。结论生物信息学分析羊种布鲁氏菌BP26蛋白存在多个B细胞抗原表位,可以作为布鲁氏菌诊断和疫苗研究的候选抗原。
- 赵庆亮卢梅谭艳冉光鑫王慧颖赵新霞盛金良
- 关键词：布鲁氏菌抗原表位生物信息学分析
- 绵羊Toll样受体家族在肺泡巨噬细胞的分布及脂多糖(LPS)刺激对TLR2、TLR4表达的影响被引量：16
- 2010年
- 为确定toll样受体家族在绵羊肺泡巨噬细胞的分布及脂多糖（LPS）刺激过程中TLR2、4的动态表达规律。通过RT-PCR方法检测绵羊TLR1-TLR10表达分布;以α-tubulin和GAPDH为内标基因,对绵羊TLR2、4进行克隆和测序,将重组质粒作为标准品建立实时定量PCR标准曲线,通过实时定量PCR方法检测LPS诱导0-48 hTLR2、4的动态表达。结果表明,在绵羊肺泡巨噬细胞中检测到TLR1、2、4、6、7、8、9、10的表达,而TLR3、5未见表达;α-tubulin和GAPDH在LPS诱导前后表达量存在显著差异,均不适合作为内标基因,以使用的细胞数和总RNA量进行均一化校正,发现TLR2、4在诱导后20 min就达到高峰,且在整个诱导过程中维持较高水平。绵羊肺泡巨噬细胞TLR2、4对LPS刺激的应答反应很灵敏,参与机体的早期应答反应。
- 盛金良陈创夫杨霞王远志张辉
- 关键词：绵羊肺泡巨噬细胞脂多糖TOLL样受体实时定量PCR
- 绵羊Toll样受体7基因多态性分析被引量：4
- 2017年
- 对新疆萨福克羊Toll样受体7基因单核苷酸进行多态性分析,探索绵羊TLR7基因多态性与抗病力的关系,为家畜抗病育种提供候选分子标记。采集新疆地区种羊场萨福克羊血液600份,提取DNA,设计扩增引物进行聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)检测,对突变位点进行测序分析。结果表明,12对扩增引物中,第2、5、6、7对引物扩增产物具有多态性。其中第2对和第7对引物扩增产物存在错义突变,第5对和第6对引物扩增产物存在同义突变。经SSCP分析,第2对引物扩增产物表现为3种带型,第7对引物有2种带型.经序列比对分析存在A343G、A350G、A1244G的错义突变,氨基酸改变分别是Lys突变为Gln,Asp突变为Ser,Glu突变为Arg,且突变都发生在胞外区亮氨酸重复区内。其中第2对引物的带型AB是位点A343G和A350G同时发生突变。位点A343G的突变频率最高为45.0%,A350G突变频率12.0%,而A1244G突变频率为5.8%。检测的突变可能改变TLR7基因的功能,进而影响其对病源的免疫应答。为进一步的疾病相关的研究奠定基础,以调查这些研究结果在家畜育种方面的用处。
- 梁田杨霞张勋肖媛媛陈新凯宋佳玮盛金良
- 关键词：TOLL样受体7多态性萨福克羊基因型
