国家自然科学基金(30960285)
- 作品数：10 被引量：33H指数：3
- 相关作者：孙永科杨玉艾杨亮宇初晓辉毕保良更多>>
- 相关机构：云南农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所云南省保山市动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高层次科技人才培引工程国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪瘟病毒E0和E2蛋白融合表达的重组腺病毒构建及免疫保护性研究被引量：10
- 2010年
- 为评价重组腺病毒融合表达猪瘟病毒(CSFV)E0和E2蛋白的免疫保护效果,本研究以CSFV基因组为模板,应用RT-PCR扩增E0和E2蛋白的编码基因,通过pET-32a载体将E0和E2基因串联,形成pET-E0-E2重组质粒。用KpnⅠ和NotⅠ双酶切pET-E0-E2得到E0-E2融合基因,定向亚克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,采用"两步转化法"在细菌内同源重组,构建携带E0-E2基因的重组腺病毒转移载体质粒pAdEasy-E0-E2,经PacⅠ酶切线性化后转染人胚胎肾细胞(HEK293),成功包装出重组腺病毒(rAd-E0-E2),PCR和western blot检测表明,E0-E2基因已重组于腺病毒基因组中并获得表达。将rAd-E0-E2接种于小鼠和猪,并通过ELISA进行抗体检测。另外,将rAd-E0-E2经肌肉2次(间隔7d)免疫接种6周龄～7周龄猪,3周后用103TCID50CSFV石门株攻毒。结果表明,rAd-E0-E2免疫组6/7头存活,各组织器官带毒时间不超过10d,而非重组腺病毒rAd-CMV免疫组和空白对照组全部死亡,各组织器官均能分离到CSFV。结果提示,rAd-E0-E2能使免疫猪抵抗CSFV强毒攻击,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗提供了实验依据。
- 杨玉艾初晓辉毕保良杨亮宇吴翱邱春富孙永科
- 关键词：重组腺病毒猪瘟病毒
- 一步法RT-PCR同时检测CSFV和PRRSV方法的建立及应用被引量：1
- 2011年
- 猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害云南养猪业的传染病,为了建立一种能快速诊断猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的方法,根据NCBI上已发表的猪瘟病毒(CSFV)保守基因Erns和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因M基因的核苷酸序列,利用Oligo 6.0设计了2对特异性引物,经过PCR反应条件优化后,建立了CSFV和PRRSV一步法RT-PCR的检测方法。对云南部分地区猪高热病病料检测的结果表明,本方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,为云南猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的快速检测提供了重要的技术支持。
- 李圣郑欢莉李红炳孔令富张晓敏钏有科孙永科杨玉艾
- 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法RT-PCR
- 非典型性猪瘟病毒云南株/石门株嵌合病毒的构建和拯救被引量：2
- 2012年
- 为研究猪瘟病毒(CSFV)云南株(YN株)突变位点在致非典型性猪瘟中的作用,本研究在CSFV石门株全长感染性克隆的基础上,利用分子克隆技术,将CSFV YN株的1 510位～1 532位、2 471位～2 658位、3 152位～3 176位和11 785位～11 816位突变位点基因序列替换CSFV石门株的相应基因序列,构建出嵌合的CSFV感染性克隆质粒pAC-SM-YN。全基因测序鉴定后,体外转录得到病毒RNA,经脂质体转染PK-15细胞方法拯救出了嵌合病毒vSM-YN。经直接荧光染色、对突变位点RT-PCR以及ELISA检测表明拯救嵌合病毒vSM-YN传代稳定。本研究为研究CSFV结构蛋白、病毒致病机理、新型疫苗,尤其是非典型猪瘟的致病机理奠定了基础。
- 孙永科孔令富张晓敏郑欢莉林明星陈海婷杨玉艾
- 关键词：猪瘟感染性克隆嵌合病毒
- 云南一株猪瘟流行毒株的分离鉴定
- 2010年
- 猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的猪的一种高度接触性传染病，其流行广、传染性强、致死率高，所以国际兽疫局将之列为A类传染病。我国从20世纪50年代起广泛应用猪瘟兔化弱毒疫苗预防注射，基本上控制了猪瘟的流行。近年来，猪瘟的流行特点发生了很大的变化，多以非典型性、慢性及隐性形式出现，
- 杨玉艾杨亮宇初晓辉毕保良吴翱邱春富孙永科
- 关键词：猪瘟病毒流行毒株猪瘟兔化弱毒疫苗接触性传染病VIRUS
- RNA干扰及其在动物传染病方面的研究概况被引量：3
- 2012年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种沉默靶基因活动的过程,可以实现对特定的mR-NA的选择性降解,进而抑制其翻译过程。论文介绍了RNAi的发现、作用机理、作用特点及其在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、禽流感、新城疫、狂犬病等动物传染病方面的研究概况。
- 杨亮宇孙永科杨玉艾王凯王玉娥孔令富
- 关键词：RNAIMRNASIRNA
- 猪瘟病毒云南毒株的分离鉴定及E2基因的原核表达被引量：1
- 2010年
- 从云南10个地州15个大型猪场采集到的21份样品中分离得到5株猪瘟病毒。经测序鉴定昆明、玉溪、曲靖地区分离株的核苷酸序列99.99%同源,大理和宝山地区的核苷酸序列99.99%同源,5株分离毒均属于基因二群。5株分离毒在PK-15细胞上的平均毒价约为2×106TCD50/mL,应用荧光抗体染色可以检测到CSFV。通过RT-PCR扩增猪瘟病毒约1 200 bp的E2蛋白全部抗原编码区序列,并将其分别克隆到pMD18-T载体中。序列分析结果表明,5株分离株的E2基因片段为1173bp,与猪瘟病毒Shimen株的核苷酸同源性为82.5%和84.3%,与C-株的核苷酸同源性分别为83.3%和85.4%。将E2基因插入原核表达载体pET-41a(+),转化进BL21(DE3)内进行表达,经IPTG诱导,E2蛋白能在菌体内高效表达,表达量达26.5%,蛋白分子质量约为41kD。本研究为猪瘟诊断抗原及基因工程疫苗的研制打下基础。
- 杨玉艾杨亮宇杨忠良初晓辉毕保良郑欢莉孙永科
- 关键词：猪瘟病毒原核表达
- 板栗花提取物体外抑菌效果研究被引量：5
- 2010年
- 板栗花作为民间用药在临床上已有应用,并有一定的治疗效果,但是缺乏相关理论研究。为了解板栗花的抑菌效果,本研究将板栗花的水煮提取物制备含0.001 g/mL,0.01 g/mL,0.1 g/mL和1 g/mL的板栗花提取物药平板和药敏片,分别对供试菌株大肠埃希菌O4、大肠埃希菌O8、大肠埃希菌O101、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌进行药敏试验。结果表明:当板栗花提取物浓度为0.01 g/mL时,所有供试菌株均高度敏感,这为板栗花的开发利用提供了理论基础。
- 孙永科杨林富杨亮宇毕保良初晓辉杨玉艾
- 关键词：板栗花最小抑菌浓度
- 我国伴侣动物诊疗行业的现状、问题及对策被引量：9
- 2015年
- 近年来,我国伴侣动物相关行业处于快速发展的阶段,新兴的产业层出不穷,同时也带来了一些管理和法规方面相对滞后的问题。论文通过介绍近年来伴侣动物行业的发展情况,分析总结了伴侣动物行业、特别是犬猫诊疗行业发展中出现的宠物医院管理、宠物防疫监督、宠物尸体处理等问题,针对这些出现的问题提出了一些对策,并且通过对一些省市出台的相关政策进行的整合,希望对伴侣动物诊疗行业的规范发展做出贡献。
- 李宇昕杨玉艾孙永科
- 关键词：动物防疫法
- 犬产后低钙血症的病因调查与防治被引量：1
- 2011年
- 随着经济的发展和城市化进程的加速,饲养宠物已成为居民生活的新亮点,这使得昆明地区出现养犬新热潮的同时,犬的疾病也明显增加,犬产后低钙血病已成为危害宠物行业的主要疾病之一。
- 杨玉艾杨亮宇初晓辉毕保良孙永科
- 关键词：产后低钙血症养犬病因调查城市化进程宠物
- 猪PRRSV云南分离株主要蛋白基因克隆及序列分析被引量：1
- 2010年
- 采用RT-PCR技术,分别对PRRSV云南分离株-YN株编码GP3、GP5、M蛋白的基因进行扩增,获得764、602、524 bp特异性目的片段,经纯化后,克隆至pMD18-T载体中,分别进行序列测定与分析。结果表明,云南PRRSV与已知代表毒株核苷酸序列同源性分别为89.72%～98.80%;遗传进化分析表明,云南分离株与HB-2(sh)/2002、CH-1a等毒株关系最近,与VR-2332、respPRRS mlv等同属一个大分支,而与JXA1、GD、NM1等毒株处于不同的分支。
- 杨玉艾肖晶杨亮宇初晓辉毕保良孙永科
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因克隆
