宁夏回族自治区自然科学基金(NZ12174)
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- 人线粒体融合蛋白-2基因真核表达载体的构建与鉴定
- 2014年
- 目的构建人线粒体融合蛋白-2(mitofusin-2, MFN2)基因真核表达载体并对其进行鉴定。方法在pEGFP-N1载体多克隆位点插入人MFN2基因编码区序列,酶切、测序验证是否插入及正确性。将所构建载体转染原代培养的人血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cel s,VSMCs),荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达;荧光定量PCR和Western blot分别检测MFN2的mRNA及蛋白表达。结果成功构建了人MFN2基因真核表达载体,其转染VSMCs后,可以检测到MFN2 mRNA及蛋白水平高表达(<0.01)。结论成功构建了人MFN2基因真核表达载体,且能够在原代VSMC中过表达。
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- DNMT3B mRNA3′非编码区报告基因载体的构建与功能验证
- 2014年
- 目的构建用于鉴定microRNA(miRNA)靶基因的报告基因系统并进行功能验证,为研究动脉粥样硬化的发生发展机制奠定良好基础。方法在pGL3-control载体的荧光素酶基因下游克隆位点插入DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)3′非编码区序列,经酶切、测序验证是否插入及正确性。生物信息学分析DNMT3B与miRNA-125b的靶向关系,并用miRNA-125b过表达载体与所构建载体共转染人血管平滑肌细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了DNMT3B3′非编码区报告基因载体,经酶切和测序鉴定正确;共转染细胞24h后,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性,结果显示与空载体对照组相比,构建载体组荧光素酶活性下降了54.8%(P<0.01)。结论成功构建了DNMT3BmRNA 3′非编码区报告基因载体,且提示miRNA-125b靶向调控了DNMT3B。
- 曹成建杨晓玲王磊杨程蔡欣徐华王洁姜怡邓
- 关键词：DNA甲基转移酶3B微RNAS表遗传学
