“十五”国家科技攻关计划(2004DA754C)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：金连弘孙博李呼伦雷蕾申景岭更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学中国科学院华中科技大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项黑龙江省海外学人科研资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高浓度RA诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞被引量：6
- 2007年
- 目的:高浓度RA诱导小鼠ESC体外向神经细胞分化。方法:通过5μMRA刺激拟胚体向神经前体细胞分化,在不同基质上进一步诱导神经前体细胞分化为神经细胞,通过免疫荧光鉴定。结果:5μmol/LRA诱导神经前体细胞分化;神经前体细胞分化为β-tubulinⅢ阳性神经细胞,β-tubulinⅢ阳性细胞中有55%为GABA阳性,4%为CHAT阳性细胞。
- 申景岭单智焱王燕黄小义赵勇雷蕾金连弘
- 关键词：RAESC诱导分化神经细胞
- NK1.1^+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力疾病发病中的免疫调节作用
- 2007年
- 目的:探讨NK1.1+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)疾病发病中的作用以及其调节机制。方法:腹腔注射抗小鼠NK1.1单克隆抗体(mAb)清除C57BL/6(B6)小鼠体内的NK1.1+细胞,建立NK1.1+细胞缺陷小鼠模型;用AChR+CFA免疫小鼠诱发EAMG,通过Lennon等的肌无力评分标准分析各组小鼠之间EAMG的发病情况和病情严重程度;应用ELISA法检测单核细胞(MNC)上清液中IFN-γ、IL-4的分泌和表达;应用放射免疫测定法检测血清中AChRIgG含量;用抗IFN-γmAb中和小鼠体内IFN-γ,观察发病情况及血清中AChRIgG的含量。结果:NK1.1+细胞缺陷的小鼠同正常免疫组小鼠相比,发病率和病情严重程度均明显降低(发病率:36%vs86%,P<0.01);免疫后NK1.1+细胞缺陷组和正常免疫组小鼠相比,发病率和病情严重程度无明显统计差异;NK1.1+细胞缺陷降低IFN-γ的表达,但是IL-4的分泌和表达无统计学意义;NK1.1+细胞缺失降低AChR特异性抗体的产生;中和体内IFN-γ后,EAMG的发病率和病情严重程度均减轻,并且AChR特异性抗体减少。结论:NK1.1+细胞在EAMG发病初期发挥重要作用。在EAMG发病中,NK1.1+细胞可以使AChR特异性T细胞产生IFN-γ,增加AChR特异性抗体产生,从而加重EAMG的发病。
- 李呼伦王广友李国忠孙博赵吉成孔庆飞金连弘汪丹丹
- 关键词：EAMGACHRIFN-Γ
- 绿色荧光蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞及向神经细胞的分化
- 2008年
- 目的建立能够稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的小鼠胚胎干细胞（ESC），并诱导其向神经细胞分化，为临床移植治疗神经系统疾病提供方便追踪观察的神经细胞。方法分别用脂质体、电穿孔转染法转染小鼠胚胎干细胞系R1，检测48h转染效率；经G418筛选后，得到稳定高效表达GFP的ESC克隆，通过碱性磷酸酶（AKP）染色检测ESC的生物学特性；利用单层分化法诱导转染GFP的胚胎干细胞向神经细胞分化，通过免疫荧光检测神经细胞特异标记Tuj1。结果转染48h的GFP阳性细胞转染率脂质体组为65％，电穿孔组为79％，两组比较差异无统计学意义（Х^2=3.14，P〉0．05）。转染GFP的胚胎干细胞AKP染色阳性，并可诱导分化为Tuj1阳性的神经细胞。结论建立稳定表达GFP基因的胚胎干细胞克隆，获得的转染GFP的胚胎干细胞能够分化为神经细胞。
- 单智焱申景岭雷蕾徐燕宁金连弘
- 关键词：胚胎干细胞电穿孔细胞分化
- 骨髓基质干细胞治疗实验性自身免疫性神经炎的研究被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨骨髓基质干细胞(BMSC)移植治疗实验性自身免疫性神经炎(experimentalautoimmuneneuritis,EAN)的疗效以及相应的作用机制。方法:用P0180-199多肽与弗氏完全佐剂的混合液免疫Lewis大鼠,建立EAN动物模型。治疗组在免疫后第10天,尾静脉回输荧光染料PKH26标记的BMSC(2×106个细胞/只),通过临床评估、免疫组化及ELISA等方法,研究了BMSC对EAN的治疗作用。结果:回输的BMSC能向脱髓鞘神经组织周围迁移,减轻脱髓鞘的病理改变和炎性细胞浸润。与对照组比较,治疗组CD4+和CD8+T细胞的浸润显著减少(P<0.05),血清中IFN-γ和TNF-α的水平明显降低(P<0.05),培养上清中IL-4的水平显著增加(P<0.05)。结论:BMSC静脉移植治疗EAN有一定的疗效。BMSC通过调节细胞因子的表达逆转Th1/Th2型细胞之间的失衡而发挥治疗作用,并能够抑制T细胞活化增殖。
- 徐欣孙博穆莉莉王广友金连弘李呼伦
- 关键词：实验性自身免疫性神经炎骨髓基质干细胞细胞因子
- NK1．1^＋细胞在实验性重症肌无力发病机制中的作用
- 2008年
- 目的:探讨NK1.1+细胞在重症肌无力疾病进展中发挥的作用以及其调节机制。方法:(1)用腹腔注射抗NK1.1抗体和抗TGF-β抗体的方法制造NK1.1+细胞缺陷和TGF-β缺陷的小鼠模型;(2)通过肌无力评分标准来评价试验组和对照组小鼠之间实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的发病情况和病情严重程度的区别;(3)观察淋巴细胞增殖以及应用ELISA方法检测细胞因子TGF-β、抗AchRIgG的各种亚型。结果:(1)NK1.1+细胞缺陷的小鼠同对照组小鼠相比EAMG发病时间延迟且病情严重程度明显降低,但在免疫后7天用抗NK1.1处理却不能改变EAMG的临床病程。(2)NK1.1+细胞缺陷没有明显改变由AchR刺激产生的T细胞增殖反应,但由AchR特异性T细胞所产生的TGF-β有明显的增高。(3)经TGF-β中和抗体处理的NK1.1+细胞缺陷的小鼠其EAMG的进展明显加快。(4)NK1.1+细胞缺陷鼠血清中抗AchRIgG、AchRIgG2b亚型的含量下降。结论:NK1.1+细胞在EAMG的起始时发挥重要的作用,并且NK1.1+细胞的缺失将导致AchR特异性T细胞产生TGF-β的增加,从而抑制了重症肌无力的进展。
- 王菁华孙博李国忠王丹丹刘玉梅王琪穆莉莉金连弘李呼伦
- 关键词：实验性自身免疫性重症肌无力细胞细胞因子
