国家自然科学基金(30672195)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 相关作者：冯杰雄魏明发黄磊郑帅玉柴成伟更多>>
- 相关机构：华中科技大学浙江大学医学院附属儿童医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠肝外胆管上皮细胞的分离、原代培养及鉴定方法被引量：2
- 2009年
- 目的建立一种重复性好、可靠的小鼠肝外胆管上皮细胞(MEBECs)体外分离、原代培养的方法。方法Ⅰ型鼠尾胶原包被塑料培养瓶。将10只腹腔注射了7次新生牛血清(NBS)的BALB/c小鼠处死,分离并取出肝外胆管组织,将其剪至1mm3大小后,先采用2.5g/L胰酶和2×104U/LDNaseⅠ,再用2×105U/LⅣ型胶原酶消化、分离小鼠肝外胆管组织为细小、均匀的细胞团进行接种,接种的细胞团采用含100mL/L的胎牛血清(FBS)、10μg/L表皮生长因子(EGF)DMEM/HamsF12(1:1)培养基进行原代培养。倒置显微镜下观察其细胞形态,噻唑蓝(MTT)法测细胞生长曲线,分别用细胞角蛋白19抗体(anti-CK19)免疫细胞化学染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果细胞在接种24～48h贴壁增殖,形成大小不等的细胞岛。在接种1周内生长旺盛,第3、4天达到峰值,呈典型的鹅卵石样表观。anti-CK19免疫细胞化学染色,细胞质呈棕黄色着色,细胞核蓝色,呈阳性表达;透射电镜观察,MEBECs表面可见短而多的微绒毛,胞内线粒体、粗面内质网丰富,可见少量脂滴。结论此培养方法是一种可靠的MEBECs的分离纯化培养技术,为体外研究肝外胆管上皮病变提供了实验平台。
- 柴成伟郑帅玉冯杰雄魏明发吴晓娟杨继鑫
- 关键词：胆管上皮细胞原代培养小鼠
- 胆道闭锁肝内iNOS及其调控因子异常表达与进行性肝损伤的相关性
- 2008年
- 目的研究胆道闭锁（BA）患儿肝内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及其上下游调控因子表达情况，并探讨其与BA进行性肝损伤发生的关系。方法应用免疫组织化学染色法对2002年10月至2007年3月在本院行Kasai手术的38例BA患儿与16例对照儿童肝组织iNOS表达情况进行研究；应用ELASA法对BA患儿和对照组外周血总一氧化氮（NO）代谢产物浓度进行测定；应用TUNEL法对BA患儿和对照组肝内胆管上皮凋亡指数进行测定；应用免疫印记法对BA患儿和对照组肝组织NF-gB表达进行半定量分析。结果iNOS在BA患儿肝组织异常高表达，强度为0．30±0．08，而在对照组肝组织不表达。BA患儿外周血总NO代谢产物浓度为（90．40±12．46）mol／L，明显高于对照组的（63．67±5．78）btmol／L，且BA组总NO代谢产物浓度与血清ALT水平[（152．76±29．59）U／L]呈强正相关（r=0．97）。BA组肝内胆管上皮凋亡指数（54．00±11．67）％远高于正常对照组（20．72±5．63）％，且与肝组织iNOS表达强度呈强正相关（r=0．99）。NF-xB在BA患儿肝组织中的表达（0．74±0．06）明显高于正常对照组（0．22±0．03），且与iNOS表达强度呈强正相关（r=0．97）。结论iNOS异常高表达在BA患儿进行性肝损伤中发挥重要作用，该作用是由iNOS及其上下游调控因子NF-KB、NO共同作用所实现。
- 黄磊魏明发冯杰雄袁继炎
- 关键词：胆道闭锁核因子-KB一氧化氮合酶
- 尿CMV快速培养在胆道闭锁患儿诊治中的作用
- 2007年
- 目的调查我科收治的胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿巨细胞病毒(cy-tomegalovirus,CMV)感染率并探讨尿CMV快速培养在BA患儿诊治中的作用。方法对21例BA患儿血清CMV-IgM、CMV-IgG及尿CMV快速培养结果进行总结,同时采用Masson染色法检测患儿肝纤维化程度;根据尿CMV检测结果进行分组,比较两组患儿肝功能、肝纤维化程度及胆汁排出率的差别。结果BA患儿尿CMV快速培养阳性率为57.1%,高于血清CMV-IgM检测结果;尿CMV阳性组患儿肝功能及肝纤维化程度明显高于尿CMV阴性组,而术后胆汁排出率低于尿CMV阴性组。结论BA发生与CMV感染相关;尿CMV快速培养可用于诊断BA患儿CMV活动性感染;伴有CMV活动性感染的BA患儿肝损伤及肝纤维化程度均较严重,应尽早手术。
- 黄磊冯杰雄魏明发
- 关键词：巨细胞病毒胆道闭锁肝纤维化
- 整联蛋白α2β1和α4β1在轮状病毒致肝外胆管上皮细胞损伤中的作用
- 2009年
- 目的检测肝外胆管上皮细胞整联蛋白的表达类型并探讨其在轮状病毒致肝外胆管上皮细胞损伤中的作用。方法取Balb／c小鼠的肝外胆管进行肝外胆管上皮细胞培养至第3天，直接免疫荧光法检测整联蛋白α2、β1亚基，用间接免疫荧光法检测α4亚基。用透射电镜观察轮状病毒与肝外胆管上皮细胞的结合。然后加入相应的整联蛋白抗体，再加入轮状病毒，观察各组引起的细胞病变（cytopathie effect，CPE），并进行统计学分析。结果用直接免疫荧光法检测到整联蛋白α2、β1亚基存在于肝外胆管上皮细胞膜表面，用间接免疫荧光法检测到α4亚基存在于肝外胆管上皮细胞膜表面。同时透射电镜观察到了轮状病毒与肝外胆管上皮细胞的结合。加入相应抗体阻断整联蛋白α2H1和α4B1后细胞病变率和对照组相比（6h：16．58±3．61和31．49±8．15vs．56．87±2．98；24h：88．10±5．78和92．56±2．23vs．95．84±2．75，均为P〈O．01），细胞病变明显减轻，而且细胞病变在阻断α2β1组较阻断“β1组减轻更为明显（6h：16．58±3．61vs．1．49±8．15；24h：88．10±5．78vs．92．56±2．23，均为P〈0．01）。结论肝外胆管上皮细胞表面表达整联蛋白α2、β1和α4亚基并且整联蛋白α2亚基的含量可能大于α4亚基的含量，整联蛋白α2β1α4β1以介导轮状病毒感染肝外胆管上皮细胞从而引起细胞损伤。
- 郑帅玉杨继鑫柴成伟韦佳李宁向磊冯杰雄
- 关键词：轮状病毒感染胆道闭锁胆管肝外
- 表皮生长因子对小鼠肝外胆管上皮细胞原代培养的影响被引量：4
- 2010年
- 目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠肝外胆管上皮细胞(murine extra-hepatic bile duct epithelial cells,MEBECs)体外培养的影响。方法先采用胰酶和DnaseⅠ,再用Ⅳ型胶原酶消化、分离小鼠肝外胆管组织为单细胞悬液进行接种,接种的细胞分别用含或不含10ng/mL EGF的DMEM/HamsF12(1∶1)培养基进行原代培养。倒置显微镜下观察细胞生长的形态变化,MTT法检测EGF对MEBECs增殖的影响。结果添加EGF组较未添加EGF组MEBECs体外存活时间明显延长(21d±1.3d vs(12.1d±2.1d)(P<0.001),细胞活力优于未添加组(P<0.001)。结论培养基中添加EGF可以明显地促进小鼠肝外胆管上皮细胞的增殖,延长细胞体外培养的存活时间。
- 柴成伟郑帅玉魏明发冯杰雄吴晓娟杨继鑫
- 关键词：胆管上皮细胞表皮生长因子小鼠
- 胆道闭锁肝内OPN炎症通路异常激活与肝纤维化的相关性研究被引量：10
- 2008年
- 目的研究胆道闭锁（biliary atresia，BA）肝内骨桥蛋白（osteopontin，OPN）及其上下游调控因子的表达情况，并探讨其与BA肝内进行性纤维化炎症发生的关系。方法应用免疫组化染色法对18例胆道闭锁患儿与15例先天性胆管扩张症（congenital biliary dilatation，CBD）患儿和8例正常对照儿童肝内OPN表达情况进行观察与分析；Masson染色法对各组标本肝脏纤维化程度进行评定；免疫印迹法对各组标本肝内核转录因子-κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）表达进行半定量分析；逆转录聚合酶链反应法对各组标本肝内转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）mRNA表达进行半定量分析。结果OPN在BA患儿肝内汇管区胆管上皮异常高表达（0．33±0．10），而在CBD组和正常对照组肝内胆管上皮均不表达，且BA组胆管上皮OPN表达强度与肝纤维化水平呈强正相关（r=0．97）。NF-κB在BA患儿肝组织中的表达强度（0．76±0．07）明显高于CBD组（0．25±0．04）和正常对照组（0．22±0．02），且BA组NF-κB表达强度与OPN表达强度呈强正相关（r=0．94）。TGF-β1mRNA在BA组患儿肝组织中的表达（1．46±0．17）明显高于CBD组（0．68±0．11），在正常对照组未检测到TGF-β1mRNA表达，TGF-β1mRNA在BA患儿肝内表达强度与OPN表达强度呈强正相关（r=0．88）。结论OPN炎症通路的激活对BA患儿肝纤维化形成起到了关键作用，这种进行性纤维化炎症的产生是由0PN及其上下游调控因子NF-κB、TGF-β1共同作用所实现。
- 黄磊魏明发冯杰雄袁继炎
- 关键词：胆道闭锁骨桥蛋白核转录因子-ΚB
- 病毒感染致胆道闭锁的机制与研究进展被引量：1
- 2008年
- 胆道闭锁（biliary atresia，BA）是一种波及肝内外胆管的进行性硬化性病变并常伴有肝纤维化，是引起新生儿黄疸的重要原因。该病好发于东方人群，女性多见。由于进行性胆管损伤及继发性胆汁性肝硬变，50％以上的患儿最终需要肝移植来维持生存。如何提高BA患儿的长期生存率是困扰小儿外科医师的难题，而明确BA的病因是提高治疗效果的必要前提。
- 郑帅玉冯杰雄
- 关键词：胆道闭锁病毒感染胆管损伤新生儿黄疸长期生存率外科医师
- 茵栀黄注射液在胆道闭锁患儿手术前后的辅助治疗效果被引量：3
- 2007年
- 目的了解茵栀黄注射液在胆道闭锁(BA)患儿手术前后的辅助治疗效果。方法将32例BA患儿按照手术前后是否辅以茵栀黄注射液治疗分为试验组(18例)和对照组(14例),患儿均经手术及病理切片证实诊断。采用ELISA测定患儿血清总胆红素、直接胆红素、ALT、AST水平,结合胆汁排出率和随访获得的黄疸消退率及胆管炎发生率综合评定茵栀黄辅助治疗效果。结果试验组患儿上述生化指标在入院时均高于对照组(Pa<0.05),术后2周再次测定时则明显低于对照组(Pa<0.05)。随访持续使用茵栀黄达3个月以上黄疸消退率优于对照组,而发生胆管炎的比例明显降低。结论茵栀黄可显著降低BA患儿血清转氨酶及胆红素水平,提高患儿术后黄疸消退率,降低胆管炎发生。
- 黄磊冯杰雄魏明发李民驹
- 关键词：胆道闭锁茵栀黄胆红素
