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水泡性口炎病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的表达和鉴定: 2005年; 根据已经发表的IN型水泡性口炎病毒(VSV)核蛋白(N)基因的序列设计1对特异引物,应用RT-PCR技术扩增编码IN VSV的N基因,将PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达载体pET-32a。并将重组质粒转化入大肠杆菌 BL21株,以1．0 mmol·L-1 IPTG在37℃的条件下诱导,N基因得到了高效表达。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳以及用 VSV阳性血清进行Western blotting试验,结果表明所表达的融合蛋白产物分子质量与预期的65．3 ku相符。; 盛祖勋赵永刚陈义平萨仁高娃王宝安王志亮; 关键词：水泡性口炎病毒核蛋白基因

伪狂犬病病毒gE囊膜糖蛋白主要抗原表位区基因的原核表达被引量：1: 2007年; 参照GenBank上公布的伪狂犬病病毒gE基因序列设计1对引物,通过PCR方法扩增一段包含gE主要抗原表位编码区的564 bp的片段,扩增产物克隆于pMD18-T vector中,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游,构建的原核表达质粒pET-gE在大肠杆菌BL21中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示:表达产物分子质量为38 ku,以包涵体的形式存在,表达产物用His亲和层析柱进行纯化。Western blotting分析表明:该蛋白能与标准阳性血清发生特异性反应。结果证明该表达产物具有生物学活性,可作为鉴别诊断的抗原。; 柴虹范忠军陈义平王志亮; 关键词：伪狂犬病病毒主要抗原表位

PRRSV血清抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：5: 2006年; 用亲和层析纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白GST-N作为诊断抗原,建立检测PRRS血清抗体的间接ELISA方法。抗原最佳包被量为每孔400 ng,待检血清最佳稀释度为1∶100,待检血清样品的D_(490 nm)≥0．43D_(po■)+0．57D_(neg)判为阳性,反之判为阴性。对采自14个猪场的364份猪血清样品进行检测,PRRS阳性率为51．4%,略高于HerdChek ELISA的阳性检出率49．7%。与HerdChek ELISA相比,间接ELISA的敏感性为94．5%,特异性为91．3%,总符合率为92．9%,Youden指数为0．86。同时还证明该方法具有良好的批间和批内重复性,并且不与猪瘟、猪伪狂犬病等阳性血清发生反应。该方法的成功建立将为我国PRRS的防制工作作出贡献。; 陈义平邓珣彭长凌刘文博吴晓东李林王志亮刘秀梵; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒间接ELISA

猪伪狂犬病血清抗体gE-ELISA检测方法的建立被引量：7: 2007年; 以纯化的猪伪狂犬病病毒gE蛋白为抗原建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接gE-ELISA方法。最佳反应条件为,抗原包被浓度为1.7μg/mL,待检测血清1∶40稀释。与伪狂犬病阳性血清反应为阳性,与猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征(猪蓝耳病)、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和猪伪狂犬病gE缺失疫苗接种的猪免疫血清及SPF猪阴性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数分别不超过5%和9%。用该方法与Ingezim ELISA试剂盒和HerdChek ELISA试剂盒同时对172份血清进行了平行检测,总符合率分别达93.6%和83.7%。试验结果表明:猪伪狂犬病血清抗体间接gE-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪伪狂犬病野毒感染猪的血清抗体检测。; 柴虹范忠军陈义平王志亮徐天刚; 关键词：猪伪狂犬病抗体试剂盒

三种检测禽流感抗体方法的比较被引量：3: 2006年; 应用胶体金免疫层析法(GICA)、血凝抑制试验(HI)和琼脂扩散试验(AGID)三种方法同时检测所采集的342份鸡血清样品,并对三者的检测结果进行比较。结果发现,HI试验的阳性检出率最高(78.65%),其次为GICA(69.88%)和AGID试验(59.36%);GICA与HI的符合率为89.47%,与AGID的符合率为84.21%,HI与AGID的符合率为80.70%。结果表明,GICA比AGID试验更为敏感,且与HI试验有较好的符合率,可用于禽流感的血清学监测。; 冯娟陈义平王志亮刘春菊张喜悦; 关键词：禽流感抗体胶体金免疫层析法血凝抑制试验琼脂扩散试验

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“十五”国家科技攻关计划(2004BA519A53)