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“十五”国家科技攻关计划(2004BA519A54)

作品数：6 被引量：20H指数：3
相关作者：邓国华陈化兰葛叶熊蕊冉多良更多>>
相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所新疆农业大学中国兽医药品监察所更多>>
发文基金：国家科技重大专项更多>>
相关领域：农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 5篇农业科学
  • 2篇生物学

主题

  • 6篇流感
  • 6篇病毒
  • 5篇禽流感
  • 4篇禽流感病
  • 4篇禽流感病毒
  • 2篇亚单位
  • 2篇原核表达
  • 2篇神经氨酸酶
  • 2篇酸酶
  • 2篇抗血清
  • 2篇克隆
  • 2篇ELISA
  • 2篇H5亚型
  • 1篇单克隆
  • 1篇单克隆抗体
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇神经氨酸酶基...
  • 1篇聚合酶
  • 1篇抗体

机构

  • 6篇中国农业科学...
  • 2篇新疆农业大学
  • 1篇中国兽医药品...

作者

  • 6篇邓国华
  • 5篇陈化兰
  • 3篇葛叶
  • 2篇黎玉梅
  • 2篇冉多良
  • 2篇熊蕊
  • 2篇李雪平
  • 1篇姚秋成
  • 1篇张立春
  • 1篇王桂芹
  • 1篇高玉伟
  • 1篇曲站红
  • 1篇田国彬
  • 1篇于康震
  • 1篇唐艳玲

传媒

  • 3篇中国预防兽医...
  • 1篇中国兽医学报
  • 1篇新疆农业大学...
  • 1篇中国兽医科学

年份

  • 1篇2010
  • 2篇2009
  • 1篇2008
  • 2篇2007
共 6 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
流感病毒聚合酶PA亚单位抗血清的制备被引量：1
2009年
本研究采用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Zhejiang/11/00中分段及全长扩增PA基因片段,将目的基因定向克隆至原核表达载体pET-32a,经测序验证正确后,获得重组阳性质粒,将重组质粒转化BL21细菌后诱导,实现质粒在大肠杆菌中的表达,重组表达蛋白经Ni+柱纯化后分别与弗氏免疫佐剂乳化成油乳剂苗免疫新西兰大耳白兔,获得抗PA的免疫抗血清。Western blot检测结果表明抗血清与目的蛋白发生特异性反应。同时,将PA全长基因插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞,通过激光共聚焦显微镜发现,抗血清与PA基因的真核表达产物发生反应,出现特异性荧光,在细胞核与细胞浆中均出现荧光,进一步表明PA亚单位在细胞核与细胞浆均有分布。
葛叶邓国华李雪平高玉伟姚秋成唐艳玲陈化兰
关键词：禽流感病毒抗血清
H5亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备和鉴定
2007年
采用高致病性禽流感病毒(HPAIV)H5N1亚型A/Duck/Zhenjiang/11/00(DZJ/1100)毒株作为免疫原,免疫8周龄BALB/C雌性小鼠,三次加强免疫后取脾细胞与SP2/0细胞融合,用表达的重组核蛋白(NP)包被ELISA的方法检测筛选,阳性细胞克隆经有限稀释法克隆培养,最后获得H5亚型特异性的单克隆抗体,抗体亚类检测结果表明该抗体亚类为IgG1型k链抗体。ELISA以及免疫荧光检测表明该抗体有良好的特异性。
黎玉梅邓国华冉多良熊蕊陈化兰
关键词：H5亚型禽流感单克隆抗体ELISAIFA
H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的表达及纯化被引量：3
2007年
用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Zhejiang/12/00中获得NA基因,将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-32a中,将序列测定和双酶切验证准确的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导,经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,重组蛋白得到了可溶性表达,表达的蛋白质分子质量为33 ku;该蛋白可以与禽流感H5N1亚型阳性血清反应,具有良好的免疫原性;ELISA检测结果表明,用此纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV神经氨酸酶抗体具有良好的灵敏性。
黎玉梅邓国华熊蕊冉多良陈化兰
关键词：禽流感病毒NA基因克隆原核表达
A型流感病毒聚合酶研究进展被引量：6
2009年
A型流感病毒（Influenza A virus，IV）基因组为单负链线状分节段RNA，总长约13600个核苷酸（nt）。根据襄膜上血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性的不同，可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。A型流感病毒可突破种问障碍适应新的宿主，从而导致新的血清型毒株流行。1918年、1957年和1968年3次大规模流感疫病的暴发，给人们敲响了警钟。在此背景下，疫苗不断更新、预防流感病毒的药物相继问世，
葛叶邓国华
关键词：A型流感病毒聚合酶VIRUS神经氨酸酶核苷酸抗原性
H5亚型高致病性禽流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立被引量：10
2008年
本研究在已有H5亚型禽流感病毒特异性单抗基础上,建立了以多抗作为包被抗体、单抗作为检测抗体的抗原捕捉ELISA方法。通过对各个反应条件进行优化,获得的最佳工作条件为:羊血清1∶1600倍稀释;单抗1∶10000稀释;酶标抗体最适工作浓度为1∶5000倍稀释;单抗反应时间1.5h;酶标抗体作用时间1.5h。特异性试验和敏感性试验结果表明:该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于H5亚型高致病性禽流感病毒的检测。
曲站红邓国华王桂芹张立春田国彬于康震陈化兰
关键词：禽流感病毒H5亚型ELISA
禽流感病毒PB2亚单位抗血清的制备
2010年
采用RT-PCR方法分段扩增PB2基因,将目的基因定向克隆至含HisTAG的原核表达载体pET-32a,经序列验证正确后,转化BL21大肠杆菌,诱导表达重组蛋白。靶蛋白经Ni+柱纯化后与弗氏免疫佐剂混合免疫新西兰大耳白兔,获得高效价的抗PB2的抗血清。Western-blot检测结果证实制备的抗血清可与PB2蛋白发生特异性反应。进一步将PB2全长基因准确插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞表达PB2蛋白,通过IFA检测发现,抗血清与细胞表达的PB2蛋白发生反应,出现特异性荧光,经激光共聚焦检测PB2亚单位只在细胞核中出现荧光,说明PB2亚单位单独表达仅限于细胞核内。上述研究为进一步探索PB2亚单位的生物学特性及其结构与功能研究打下基础。
葛叶邓国华李雪平陈化兰
关键词：抗血清原核表达真核表达
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