国家自然科学基金(30940008)
- 作品数：24 被引量：67H指数：6
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- 相关机构：河南师范大学新乡医学院南阳医学高等专科学校更多>>
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- 保幼激素拮抗物KK-42对南美白对虾Y-器官发育的影响
- 2012年
- 采用1.95×10-4mol.L-1的KK-42溶液浸润处理南美白对虾（Penaeus vannamei）幼虾（体长为4.2~5.0cm）,从组织细胞学水平对分泌蜕皮激素的Y-器官结构进行初步研究,观察KK-42处理后幼虾Y-器官的形态结构变化。结果表明,伴随动物的生长,Y-器官腺细胞条索变粗,腺细胞核增大。KK-42处理后腺细胞核的结构、大小未见显著变化,腺细胞索的宽度明显高于同一时期对照组。
- 魏振宁黔冀
- 关键词：南美白对虾
- 日本沼虾含硒谷胱甘肽过氧化物酶全长克隆及表达分析被引量：6
- 2012年
- 为探讨日本沼虾(Macrobrachium nipponense)的免疫机制及含硒谷胱甘肽过氧化物酶(Se-GPx)在甲壳动物解毒和免疫应激反应中的作用,本文采用RACE法克隆了日本沼虾Se-GPx cDNA全长,其cDNA全长为908 bp,5′-UTR的长度为91 bp,3′-UTR长为256 bp,包括1个保守的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS)和1个polyA尾,开放阅读框长度为561 bp,编码由186个氨基酸组成的多肽,其中,第39个氨基酸为TGA编码的硒代半胱氨酸。同源性和相似性分析显示日本沼虾的Se-GPx在甲壳动物中与罗氏沼虾相似度最高,在脊椎动物中与GPx1和GPx2家族的相似度比较高。日本沼虾Se-GPx基因在血细胞、肝胰腺、肌肉、卵巢、表皮以及大颚器官中都有表达,尤其在血细胞中表达量相对较高。用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激后3h和6h,血细胞Se-GPx基因表达量显著升高。结果表明,日本沼虾Se-GPx作为一种重要的抗氧化酶,在维护组织正常功能方面及免疫应激反应中发挥重要作用。
- 王雪参王文锋刘方宁黔冀
- 关键词：日本沼虾全长克隆
- 日本沼虾血蓝蛋白基因cDNA全长克隆及表达分析被引量：8
- 2012年
- 目的克隆日本沼虾血蓝蛋白基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)从肝胰腺中克隆血蓝蛋白基因cDNA全长序列,用生物学软件对其序列进行生物信息学分析,时空表达分析采用实时荧光定量PCR方法。结果日本沼虾血蓝蛋白基因cDNA全长2 151 bp,包含14 bp的5'UTR、148 bp的3'UTR和189 bp的开放阅读框(ORF)。ORF编码663个氨基酸,预测分子量为76.65kD,理论等电点为5.42,含有典型的3个血蓝蛋白结构域和2个保守的铜离子结合位点。与淡水螯虾、凡纳滨对虾血蓝蛋白相似性分别为70%和63%。该基因在肝胰腺中的相对表达量最高,肌肉和血细胞表达较弱,大颚器官、表皮和卵巢几乎不表达;肝胰腺血蓝蛋白基因的表达量在蜕皮间期最高,蜕皮后期和蜕皮前期较低;嗜水气单胞菌刺激后肝胰腺中的表达量显著增加。结论与其他甲壳动物相似,日本沼虾血蓝蛋白基因具有典型的结构域和保守的铜离子结合位点,在蜕皮间期的肝胰腺中呈高表达,是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。
- 王文锋夏西超王雪参吕黎杨洪宁黔冀
- 关键词：血蓝蛋白CDNA末端快速扩增实时荧光定量PCR日本沼虾
- 咪唑类物质KK-42对日本沼虾α2-巨球蛋白基因表达的影响
- 2014年
- 为探讨KK-42提高感染嗜水气单孢菌的日本沼虾幼虾成活率的机制，实验首次克隆了012M部分序列，研究了α2M基因的时空表达以及KK-42对其表达和活力的影响。将体长3．5-5．0cm的日本沼虾幼虾随机分为2组，分别用1．95×10^-4mol／L的KK-42溶液和不含KK_42的溶液浸泡处理1min，12h后，每组再分为2个亚组，分别向虾腹部注射嗜水气单胞菌菌悬液（菌攻毒实验组和菌攻毒对照组）或生理盐水（实验组-1和对照组-1），于不同时间点测定幼虾的成活率、α2M基因表达水平和活力的变化。结果显示，KK42预处理可显著提高感染嗜水气单胞菌的日本沼虾幼虾成活率。经BLAST比对，克隆的α2M部分mRNA序列与罗氏沼虾α2M具有90％以上同源性。实时荧光定量PCR实验显示，α2M基因表达水平在血细胞中最高，且以蜕皮前期最为显著。KK-42处理的幼虾血细胞012M基因的表达无显著性差异；嗜水气单胞菌刺激使血细胞α2MmRNA水平在3h比0h提高了580％，其活力在24h增幅为47．5％；而菌攻毒实验组mRNA水平在6-48h明显高于菌攻毒对照组，尤其在12h，增幅为511％，其活力水平也呈同样的变化趋势。研究表明，KK-42预处理能上调感染嗜水气单胞菌的幼虾血细胞α2M基因的转录水平，诱导α2M活力增强，这可能增强了幼虾的免疫水平，从而提高成活率。
- 王佩吕黎张哲亮吕艳杰杨洪宁黔冀
- 关键词：日本沼虾嗜水气单胞菌基因表达
- 氧化石墨烯/磷酸钙生物水泥体外生物相容性研究被引量：1
- 2018年
- 等摩尔的Ca_3(PO_4)2-CaHPO_4-CaCO_4(CPCs)水泥系为固相,不同质量浓度的氧化石墨烯(GO)水分散液(0~24mg/mL)为液相,按一定的固液比固化,得到复合材料GO/CPCs.以成骨细胞MC3T3-E1为对象,初步探究该复合材料试样的体外生物相容性.扫描电镜观察细胞贴壁形态,MTT法评价细胞活力,碱性磷酸酶(ALP)活性检测探讨材料的骨诱导性.结果显示:MC_3T3-E1细胞在材料表面状态良好,产生胞质突;GO的添加能够增强MC3T3-E1细胞活力;GO/CPCs在短期内(1d)促进MC3T3-E1细胞早期分化.GO/CPCs有望成为一种新型骨组织替代材料.
- 宁黔冀刘梦璐杨洪
- 关键词：氧化石墨烯生物相容性
- 咪唑类物质KK-42提高日本沼虾成活率机制的研究被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨KK-42提高感染嗜水气单孢菌后的日本沼虾成活率的机制.方法：首先将虾分为两组,分别用1.95×10^-4mol/L的KK-42溶液（处理组）或不含KK-42的溶液（对照组）浸泡1 min后取出,放置养殖水槽中饲养12h后,进行嗜水气单胞菌感染实验,每组又分别分为两个亚组（Challenged和Unchallenged）;于感染后的不同时刻,分别测定日本沼虾的成活率、细菌清除率及proPO基因（甲壳动物重要的免疫因子）表达水平和酶活力的变化.结果：KK-42预处理可以提高感染嗜水气单孢菌后的日本沼虾的成活率及细菌清除率;KK-42处理后3、12和24 h,proPO基因表达明显提高,PO活力也于6～48 h持续升高,在24 h达到最高值,是对照组的2.3倍.嗜水气单胞菌刺激也可诱导血细胞proPO mRNA水平及血清中PO活力的增加,但对照组分别在菌注射后3h和6 h,mRNA表达突然升高,而KK-42实验组则在整个时期处于缓慢升高趋势;PO活力变化趋势和基因表达相一致.结论：KK-42可以诱导proPO mRNA表达水平及PO活力的升高,并能提高沼虾细菌清除能力,可能是KK-42提高日本沼虾成活率的分子机制之一.
- 王文锋关建义郭爱莲杨洪宁黔冀
- 关键词：嗜水气单胞菌
- KK-42对南美白对虾甲基转移酶基因转录的影响被引量：2
- 2010年
- 采用浸润法,用1.95×10-4mol/L的保幼激素拮抗物KK-42处理平均体长3～5cm南美白对虾,而后常规养殖,不同时间取样,解剖大颚器官.RNA的提取采用适当改进的TRIzol一步法,Real-timePCR测定法呢酸O-甲基转移酶mRNA水平.结果:采用改进的TRIzol一步法提高了大颚器官组织RNA的产率和质量;KK-42处理后5d、10d,南美白对虾大颚器官法呢酸O-甲基转移酶mRNA水平均比同期对照组低86%和82%,表明KK-42处理的早期即可显著抑制幼虾法呢酸O-甲基转移酶的基因转录.
- 李文娟夏西超宁黔冀
- 关键词：南美白对虾
- 豫北地区主要淡水鱼类感染嗜水气单胞菌的流行病学调查被引量：13
- 2016年
- 对豫北地区嗜水气单胞菌引起的细菌性败血病进行流行病学调查,分离鉴定致病性嗜水气单胞菌菌株,并对致病性嗜水气单胞菌菌株进行毒力验证和药敏试验。采集4个养殖场病鱼标本及水样,每月进行流行病学调查,利用生理生化及分子生物学方法检测嗜水气单胞菌的分布状况。结果显示,筛选出52株为嗜水气单胞菌,其中32株为致病性嗜水气单胞菌,20株为非致病性嗜水气单胞菌,且致病性嗜水气单胞菌主要分布在7—9月份,毒力验证试验表明,32株致病性菌株的毒力大小差异明显,筛选出强毒株XDMG(4),为后期试验的疫苗株做准备;药敏试验表明,不同菌株对同一种药物的药敏结果不同,但大部分药物的药敏结果基本一致,70%以上的致病性菌株对头孢哌酮、氟本尼考、菌必治、阿米卡星等抗菌药物表现为高度敏感,对青霉素类药物表现为高度耐药性,耐药率达100%,对氨基糖苷类(不包括阿米卡星)、磺胺类、四环素等药物呈现不同程度的耐药性,具有多重耐药性。本试验旨在丰富本地区的鱼类细菌性败血病的病原资料,并为该菌引起的人类疾病的防控提供科学依据。
- 贺文旭毛会丽杨利敏符运栋曾辉关建义
- 关键词：嗜水气单胞菌药敏试验细菌性败血病
- 日本沼虾酚氧化酶原基因cDNA的全长克隆及表达分析被引量：4
- 2012年
- 目的克隆日本沼虾酚氧化酶原(proPO)基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法利用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(RACE)技术从血细胞中克隆proPO基因cDNA全长序列,用生物软件对其序列进行生物信息学分析;proPO基因时空表达分析采用RT-PCR和Real-time PCR方法;腹部肌肉注射嗜水气单胞菌(5.0×109/L)诱导酚氧化酶(PO),20μl/只,注射后3、6、12、24h取其血淋巴,分别测定血细胞proPO mRNA水平及血清酚氧化酶(PO)活力。结果日本沼虾proPO基因cDNA全长2428bp,包含71 bp的5’UTR、344 bp的3’UTR和2013bp的开放阅读框(ORF)。ORF编码671个氨基酸,预测蛋白分子量为76.5kD,理论等电点(pI)约为7.31;含有2个保守的铜离子结合位点和6个组氨酸残基、1个蛋白酶水解位点和硫酯样的基序(GCGWPRHM);含有3个血蓝蛋白结构域;与罗氏沼虾proPO的相似性最高,为93%,与其他甲壳动物proPO相似性为50%～53%。该基因表达具有组织特异性,血细胞最高,肝胰腺有较弱表达,肌肉、鳃、肠、大颚器官和卵巢不表达;血细胞proPO基因的表达量在蜕皮前期(D0/1)最高;嗜水气单胞菌刺激后6 h血细胞proPO mRNA水平及血清中PO活力均显著增加。结论与其他甲壳动物相似,日本沼虾proPO基因具有2个保守的铜离子结合位点;其表达呈组织特异性,最高出现在血细胞;在蜕皮周期的前期(D0/1)血细胞表达量最高;嗜水气单胞菌可诱导proPO基因的表达以及PO活力,提示该基因是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。
- 王文锋马建敏杨洪刘方陈香丽宁黔冀
- 关键词：酚氧化酶原实时荧光定量聚合酶链反应日本沼虾
- 凡纳滨对虾细胞色素P450家族新基因CYP4V18的克隆及KK-42对其转录的抑制被引量：2
- 2012年
- 为探讨咪唑类物质KK-42促进凡纳滨对虾(Litopenaeaus vannamei)生长的分子机制,本研究克隆出与蜕皮和生长相关的CYP4V18基因的全序列,研究了该基因的时空表达,并结合测定血淋巴20-羟基蜕皮甾酮(20E)滴度。将体长3.5～5.0 cm凡纳滨对虾幼虾随机分为2组,分别用1.95×10-4mol/L的KK-42溶液或不含KK-42的溶液浸泡处理1 min,之后在相同条件下常规饲养。CYP4V18 mRNA水平定量分析采用real-time PCR,血淋巴中20E滴度测定采用反相高效液相色谱法。结果显示,CYP4V18开放阅读框为1 545 bp,编码515个氨基酸,包含CYP450保守序列;系统进化显示,CYP4V18与CYP4家族基因的亲缘关系最近。CYP4V18 mRNA水平在肝胰腺最高,分别是脑、Y-器官和肌肉的4、26和32倍。KK-42处理可显著抑制CYP4V18表达,在第2、4和6天分别降低了72.3%(P<0.05)、82.6%(P<0.05)和187.7%(P<0.01)。与同期对照组相比,KK-42处理之后血淋巴20E滴度在第2、4和6天分别升高1.7%、6.5%和13.5%。结果表明,KK-42可显著抑制凡纳滨对虾肝胰腺CYP4V18转录,升高血淋巴20E滴度,这可能是KK-42促生长机制之一。
- 夏西超王文锋杨洪宁黔冀
- 关键词：凡纳滨对虾表达下调
