上海市自然科学基金(11ZR1435200)
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
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- 相关机构：上海医药工业研究院上海欣生源药业有限公司更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家科技重大专项上海市科委科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 顶头孢霉蛋白质组的制备被引量：4
- 2011年
- 分别采用液氮研磨-裂解酶破壁和尿素-硫脲结合三氯乙酸(TCA)-丙酮提取法,提取丝状真菌顶头孢霉Acremonium chrysogenum 84-3-87总蛋白,以SDS-PAGE和双向电泳检测比较两法的蛋白提取效果。结果显示,后法所获蛋白浓度高、条带多,双向电泳图像清晰,横条纹较少,拖带现象轻,可作为后续比较蛋白质组学研究的蛋白样本制备方法。
- 刘红刘艳谢丽萍朱宝泉胡又佳
- 关键词：顶头孢霉丝状真菌双向电泳
- 顶头孢霉中过表达AcveA提高头孢菌素C产量被引量：2
- 2014年
- 与构巢曲霉veA基因同源的AcveA是近年来在顶头孢霉Acremonium chrysogenum中发现的一个全局性调控子,主要调控头孢菌素C(CPC)生物合成基因的转录水平。本研究通过从顶头孢霉高产菌基因组DNA中扩增AcveA序列构建了一个AcveA表达载体pYG280,将其导入顶头孢霉高产菌株中,荧光实时定量PCR检测阳性转化子中AcveA的相对转录水平,结果比出发菌株提高了165%。同时检测到AcveA基因导入后的转化子中CPC合成限速步骤中的早期基因pcbC、晚期基因cefEF以及cefG基因的mRNA转录水平分别较出发菌株提高了825%、353%和25%。HPLC分析结果显示,转化子CPC的发酵水平较出发菌株提高了22.7%。证明AcveA是CPC生物合成中的一个正向调控子。
- 龚桂花张伟胡又佳朱宝泉
- 关键词：转录头孢菌素C顶头孢霉
- 1-脱氧-D-木酮糖醇-5-磷酸还原异构酶(DXR)作为新的药物靶点的研究进展被引量：1
- 2014年
- 植物、藻类和细菌等可利用2C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径生物合成类异戊二烯前体异戊酰焦磷酸(IPP)及其异构体二甲烯丙基焦磷酸(DMAPP)等生长所必须的前体,因此MEP途径作为除草剂、抗菌药物和抗疟疾药物的药物靶点可用于新药开发。其中MEP途径中的第二个酶1-脱氧-D-木酮糖醇-5-磷酸还原异构酶(DXR)是研究最为广泛的靶点,膦胺霉素即为该酶的抑制剂。本综述主要介绍MEP途径、DXR及其抑制剂的研究进展。
- 陈习平谢丽萍胡又佳
- 关键词：抑制剂药物靶点
- 利用MEP途径过表达提高β-胡萝卜素产量被引量：3
- 2014年
- 构建上游甲基赤藓糖-4-磷酸(MEP)途径,获得两种重组质粒pET32a(+)-dxs-idi-ispDF和pTrcHis2B-dxs-idiispDF,然后与下游β-胡萝卜素合成途径的质粒pACYC184-M-crt一起转化进入大肠杆菌中,获得相应的重组菌株。结果表明含有MEP途径的重组菌株β-胡萝卜素产量有显著提高。
- 陈习平谢丽萍张琪胡又佳
- 关键词：Β-胡萝卜素过表达
- 基于易错PCR的头孢菌素C酰化酶的定向进化被引量：4
- 2013年
- 以前期工作中获得的一个可以直接转化头孢菌素C(CPC)为7-氨基头孢烷酸(7-ACA)的CPC酰化酶为基础,采用易错PCR,引入不同浓度的Mg2+和Mn2+,所得易错PCR产物经克隆、转化后进行初筛,共筛选了400株转化子,其中有35株酶活力得到提高。采用金属螯合亲和色谱法分离得到纯酶后再进行复筛,其中一株酶活力显著提高,转化率提高约35%。测序结果显示,该CPC酰化酶突变蛋白的编码序列中有两个碱基发生突变,使得第122位的丙氨酸被替换为缬氨酸。在最适条件下,该酶催化CPC生成7-ACA的转化率为95%。
- 王颖秋郑林冲谢丽萍朱宝泉胡又佳
- 关键词：易错PCR体外进化头孢菌素C7-氨基头孢烷酸
