安徽省蚌埠市科技计划项目([2011]33)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：李见王露李玉云管英华魏晓巍更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院巢湖职业技术学院蚌埠市第三人民医院更多>>
- 发文基金：安徽省蚌埠市科技计划项目安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骨髓间充质干细胞与再生障碍性贫血的研究进展被引量：5
- 2012年
- 再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）是一种由造血干细胞缺陷、造血微环境损伤及免疫异常引起的骨髓造血功能衰竭以及外周全血细胞减少的综合征[1]。AA的发病机制尚未完全明确,其发病机制可能和造血干细胞的内在缺陷、造血微环境的异常以及机体免疫功能紊乱有关,
- 管英华谢杨虎魏晓巍李见王露李玉云
- 关键词：间充质干细胞再生障碍性贫血造血微环境
- IDO基因重组慢病毒载体构建及其转染hUCMSCs细胞的实验研究
- 2013年
- 目的构建共同表达人吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体,探讨其在人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)中的表达,为下一步利用高表达IDO的hUCMSCs移植治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法将IDO基因克隆至慢病毒pGC-FU-EGFP表达载体中,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。重组慢病毒表达载体质粒及辅助包装质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;制备携带IDO基因的慢病毒Lentivirus-IDO,并测定重组慢病毒的滴度。用重组慢病毒以最佳MOI值感染hUCM-SCs作为实验组,以空载体转染的hUCMSCs(空载体组)及未转染的hUCMSCs(未转染组)作为对照,应用RT-PCR及Western blot法分别检测细胞中IDO mRNA及IDO蛋白水平的表达情况。结果经PCR及基因测序鉴定pGC-FU-EGFP-IDO重组慢病毒表达载体构建成功,包装慢病毒Lentivirus-IDO滴度为2×108 TU/mL。通过EGFP表达的阳性细胞数筛选其最适MOI为30,此时对细胞的转染效率可达到80%以上。RT-PCR检测显示实验组IDO mRNA表达阳性,空载体组和未转染组均为阴性;Western blot检测示实验组细胞内IDO蛋白表达阳性,空载体组和未转染组均为阴性。结论成功构建了人IDO基因的重组慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-IDO能有效感染hUCMSCs,IDO蛋白可在hUCMSCs中长期、稳定表达。
- 李玉云李见王露翟玮玮吴正中张强
- 关键词：再生障碍性贫血人脐带间充质干细胞绿色荧光蛋白慢病毒载体
- 人脐带间充质干细胞对再生障碍性贫血小鼠造血的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:通过从脐带中分离和培养脐带间充质干细胞(MSCs),探讨其对再生障碍性贫血(再障)小鼠骨髓造血的影响。方法:原代贴壁法培养人脐带MSCs,将小鼠分为模型组、对照组、MSCs输注组进行实验。经静脉输注免疫介导方法建立再障模型小鼠,分别于3、7、14、21、28 d观察其外周血象指标变化和骨髓组织形态;ELISA检测造血负调控因子(IFN-γ)的水平,计数骨髓造血干细胞集落生成单位。结果:原代培养中脐带组织块直接贴壁后8～10 d,边缘爬出长梭形MSCs,随传代培养呈平行、漩涡状生长;再障小鼠经MSCs输注治疗后外周血象明显增高,IFN-γ水平下降(P<0.01);治疗组骨髓红细胞集落形成单位与粒-巨噬细胞集落形成单位均较模型组明显增高(P<0.01),成纤维细胞集落形成单位计数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人脐带来源的MSCs对再障模型小鼠骨髓可发挥造血支持作用。
- 管英华魏晓巍谢扬虎李见王露李玉云张强
- 关键词：再生障碍性贫血间充质干细胞脐带
- 杏苏止咳糖浆的提取工艺研究被引量：2
- 2013年
- 目的:优选杏苏止咳糖浆的最佳提取工艺。方法:采用正交试验法,以苦杏仁苷含量和浸膏得率为指标,对各个影响因素进行考察。结果:确定水提取最佳方案为A2B1C3,即加10倍量水,提取3次,每次提取1h。结论:杏苏止咳糖浆最佳提取工艺的确定为生产提供了科学依据。
- 张士洋崔佳程军叶云张士勇
- 关键词：苦杏仁苷正交试验
- 重组表达人IDO基因慢病毒载体的构建及鉴定
- 2014年
- 目的:构建重组表达人吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)基因的慢病毒载体。方法:设计相应引物,从含有人IDO基因的cDNA文库中,利用聚合酶链反应(PCR)方法钓取人IDO基因的全长编码区片段。将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体pGC-FU进行定向的连接,将产物转化细菌感受态细胞。对长出的克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性的克隆进行测序及比对分析。重组慢病毒及辅助包装质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;采用Wester blot检测IDO-GFP融合蛋白的表达情况;实时荧光定量PCR检测慢病毒浓缩液的滴度。结果:成功获取人IDO基因编码区序列,人IDO基因慢病毒转染质粒连接正确;293T细胞中产生慢病毒颗粒;IDO基因在细胞内稳定表达;人IDO基因重组慢病毒载体的滴度为2×108TU/ml。结论:成功构建并包装出高滴度的人IDO基因重组慢病毒表达载体,为下一步转染目的细胞奠定了实验基础。
- 李见王露李玉云
- 关键词：基因表达慢病毒载体293T细胞
