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共表达羊布氏菌P39基因与增强型绿色荧光蛋白基因逆转录病毒质粒的构建: 2011年; 目的构建共表达羊布氏菌胞质结合蛋白P39基因和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的逆转录病毒质粒。方法提取羊布氏菌全基因组DNA,PCR扩增P39基因,连接至pMD19-T载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,经克隆筛选并进行序列测定后,将P39基因连接至逆转录病毒载体pRevIRES-EGFP的多克隆位点上,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取重组逆转录病毒质粒pRevP39-IRES-EGFP,进行酶切鉴定。结果从羊布氏菌基因组中扩增出约1 400 bp的P39基因,与GenBank中登录的羊布氏菌16M菌株P39基因序列同源性达99%;重组逆转录病毒质粒pRevP39-IRES-EGFP经双酶切鉴定构建正确。结论已成功构建了共表达羊布氏菌P39基因和EGFP基因的重组逆转录病毒质粒pRevP39-IRES-EGFP,为后续研究奠定了基础。; 石艳春韩堃毛颖佳郑源强; 关键词：绿色荧光蛋白质类逆转录病毒

补体C5a受体拮抗剂体外筛选平台的建立被引量：2: 2011年; 目的建立稳定的补体C5a受体(C5aR)拮抗剂筛选平台。方法采集人外周静脉抗凝血,与不同浓度C5a、脂多糖及PMX-53孵育10～30 min。通过流式细胞术检测中性粒细胞表面CD11b的表达,溶菌酶检测试剂盒观察中性粒细胞分泌溶菌酶的能力变化,罗丹明-123检测中性粒细胞呼吸爆发的变化,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-8的表达变化,Western Blotting检测胞外信号调节激酶(ERK)、蛋白激酶B(AKB或AKT)含量及其磷酸化水平的变化,考察补体C5a刺激及使用阳性药物PMX-53后对各生化指标的影响。结果 C5a刺激人外周血可增强中性粒细胞CD11b的表达,促进溶菌酶释放和IL-8的分泌,激发呼吸爆发,上调ERK、AKT的含量和磷酸化水平,阳性药物PMX-53则能显著抑制C5a的上述生物学效应。结论成功建立C5aR拮抗剂人全血体外筛选平台,为C5aR拮抗剂筛选及功能研究奠定了基础。; 王会会陈国江杨跃梅魏化伟王立燕彭晖李新颖王一黎燕石艳春; 关键词：C5A

羊布鲁氏菌omp25基因原核表达载体的构建与鉴定被引量：2: 2012年; 目的:利用PCR反应从羊布鲁氏菌基因组DNA中克隆omp25基因,并将其构建到原核表达载体pET-32a中。方法:试剂盒法提取羊布鲁氏菌基因组DNA,设计合适的引物,通过PCR反应从基因组中扩增外膜蛋白OMP25的编码基因(omp25)。将得到的基因片段连接到克隆载体pMD19-T的多克隆位点(MCS)中,将连接体pMD19-T-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析与序列测定。利用酶切与连接反应将目的基因(omp25)插入载体pET-32a的多克隆位点中,将连接体pET-32a-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析。结果:PCR扩增得到的基因片段与GenBank中已公布的羊布鲁氏菌omp25基因同源性为99%。酶切分析结果表明,omp25基因成功地插入载体pET-32a中。结论:成功地扩增得到了羊布鲁氏菌omp25基因并构建了携带该基因的重组原核表达载体pET-32a-omp25,为后续的研究提供了可靠的基础。; 石艳春韩堃郑源强吴岩毕力夫; 关键词：原核表达载体克隆

羊布鲁氏菌M5株P39基因的克隆与分析鉴定: 2012年; 目的:从羊布鲁氏菌M5株全基因组中扩增P39基因,并对扩增产物进行序列测定与分析鉴定。方法:试剂盒法提取羊布鲁氏菌全基因组,设计特异性引物通过PCR方法扩增P39基因,将扩增产物连接到T载体(pMD19-T)的多克隆位点(MCS)中,构建成重组体(pMD19-T-P39)。将该重组体转化感受态大肠杆菌DH5(,经克隆筛选并扩增后,采用试剂盒法提取重组质粒,对该重组质粒进行酶切鉴定、序列测定并与GenBank数据库进行比对分析。结果:经PCR方法成功地从羊布鲁氏菌基因组中扩增得到了目的基因片段;酶切鉴定、序列测定与比对结果表明,该目的基因片段即是羊布鲁氏菌P39基因。结论:成功地从羊布鲁氏菌M5菌株全基因组中通过PCR扩增获得了P39基因,为后续的研究提供了可靠的基础。; 郑源强刘超张明韩新荣; 关键词：克隆

羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒的构建及其免疫效果被引量：2: 2011年; 目的构建羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒,并检测其免疫效果。方法将前期克隆的P39基因片段连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,提取重组质粒,进行双酶切鉴定。以鉴定正确的重组质粒免疫BALB/c小鼠,凝集试验检测小鼠血清特异性抗体水平,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子含量,MTT掺入法检测小鼠脾脏淋巴细胞的增殖效应。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39经双酶切鉴定构建正确;该重组质粒能够刺激小鼠产生特异性抗体(抗体峰值滴度为1∶320),显著增加Th1型细胞因子的产生,并能够增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应。结论成功构建了羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,该重组质粒能够诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答。; 石艳春韩堃郑源强毕力夫; 关键词：真核细胞基因表达免疫效果

布鲁氏菌病检测、防控措施与疫苗研究进展: 布鲁氏菌病是一种人畜共患传染病,生物种型较多,感染宿主范围广泛,传播途径多样。近年来,我国布鲁氏菌病新发病例快速增加,全国近30个省市自治区均有病例发生,给患者家庭和社会造成了极大的负担。本文主要对布鲁氏菌病防控措施和疫...; 郑源强吴岩毕力夫; 关键词：布鲁氏菌病疫苗; 文献传递

布氏菌致病因子的研究进展: 2012年; 布氏菌是引起人和动物布鲁菌病的病原体。这类兼性胞内寄生菌表达一系列的致病因子,包括脂多糖、外膜蛋白和Ⅳ型分泌系统等以保持其毒力。有些致病因子是侵袭宿主所必需的,有些致病因子对逃脱宿主免疫系统的清除是必需的,它们保证了布氏菌在胞内的生存和增殖,逃脱宿主免疫系统的攻击。了解其致病因子和作用机制可为疫苗研制提供依据,也可促使新的抗生素研制。现就布氏菌致病因子的研究进展予以综述。; 王小茜郑源强石艳春; 关键词：布氏菌致病因子脂多糖外膜蛋白

布鲁氏菌病检测、防控措施与疫苗研究进展被引量：28: 2011年; 布鲁氏菌病是一种人畜共患传染病,生物种型较多,感染宿主范围广泛,传播途径多样。近年来,我国布鲁氏菌病新发病例快速增加,全国近30个省市自治区均有病例发生,给病人家庭和社会造成了极大的负担。本文主要对布鲁氏菌病诊断、防控措施和疫苗研究的进展做一综述。; 郑源强吴岩毕力夫; 关键词：布鲁氏菌病疫苗

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内蒙古自治区自然科学基金(2009MS1102)