国家高技术研究发展计划(2006AA068411)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：方敦煌刘媛刘贤进胡秋辉刘蓉蓉更多>>
- 相关机构：云南省烟草科学研究所江苏省农业科学院南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划云南省烟草公司项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程更多>>
- 采用噬菌体展示技术筛选玉米赤霉醇的单链抗体被引量：2
- 2009年
- 目的从噬菌体单链抗体库中筛选玉米赤霉醇(ZER)的阳性克隆。方法人工抗原ZER-BSA作为包被原,采用负筛选,经过连续3轮固相"亲和-洗脱-富集"筛选,富集了噬菌体抗体库中阳性克隆的比例,同时采用Trypsin和ZER竞争洗脱2种洗脱方法。ELISA鉴定阳性克隆,运用SDS-PAGE方法对大肠杆菌分泌蛋白进行了时间条件的摸索。结果随着淘洗轮数的增加,特异性噬菌体抗体得到了高度富集,从6个96孔板的克隆中筛选到10株阳性克隆(阳性大于阴性3倍视为阳性克隆),将菌株转换成功的5株测序发现有4株不同的阳性克隆,对一株进行了原核系统的表达,SDS-PAGE确定了目的条带的存在,相对分子质量为Mr28000。结论为在天然噬菌体抗体库中制备玉米赤霉醇的抗体奠定了基础。
- 张晴晴张晓程罗根刘媛唐敏刘贤进
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体玉米赤霉醇
- 菌核净残留免疫分析半抗原的制备和鉴定被引量：5
- 2007年
- 菌核净属于半抗原生物小分子,具有免疫反应性,但不具有免疫原性。为了建立菌核净农药残留的免疫分析方法,以苹果酸氯醛交酯和3,5-二氯苯胺为原料,合成N-(3,5-二氯苯基)-2-羟基琥珀酰亚胺,然后与琥珀酸酐反应,合成了菌核净半抗原N-(3,5-二氯苯基)琥珀酰亚胺-2-琥珀酸半酯,产物经红外、核磁和液质连用等方法确认,为研究菌核净的免疫分析奠定基础。
- 刘蓉蓉刘贤进刘媛方敦煌胡秋辉
- 关键词：菌核净半抗原
- 烟叶中高效氯氟氰菊酯残留半定量ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 以高效氯氟氰菊酯为供试药剂,分别建立了烟叶基质和PBS缓冲液中高效氯氟氰菊酯的ELISA检测标准曲线。并在线性检测范围内,连续3 d添加3个浓度的高效氯氟氰菊酯,研究烟叶基质对ELISA检测的影响。结果表明,烟叶基质和缓冲液中高效氯氟氰菊酯的回收率分别在94%～157%和87%～118%,变异系数分别是6.8%～22.1%和3.5%～6.6%。这表明烟叶基质对ELISA检测干扰较大,在净化的条件下,定位为高效氯氟氰菊酯的半定量筛选检测较为合理。以空白烟叶添加适当浓度的高效氯氟氰菊酯(如设定的超标限量)为对照,间接竞争ELISA法检测待测样品,建立了烟叶中高效氯氟氰菊酯的半定量ELISA筛选方法,制定了结果判断标准。对50个高效氯氟氰菊酯施药后的烤烟烟叶同时采用ELISA法和气相色谱法(GC)分析,结果表明,ELISA法检测样本超标检出率为34%,GC法检出率为22%。以GC法为参照,ELISA法假阳性率为12%,假阴性率为0,表明该方法可以用于大量烟叶样本中的高效氯氟氰菊酯快速筛查。
- 刘媛孙立荣方敦煌宋春满余向阳王冬兰张存政刘贤进
- 关键词：烟叶氯氟氰菊酯半定量ELISA
