国家自然科学基金(30940095) 作品数:6 被引量:26 H指数:4 相关作者: 侯伟健 柏树令 田晓红 佟浩 王佐周 更多>> 相关机构: 中国医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 辽宁省教育厅高等学校科学研究项目 辽宁省教育厅基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
动物低氧实验箱自动控制系统的组建及其在缺氧缺血脑损伤动物模型制作中的应用 被引量:4 2013年 目的组配低氧实验箱测氧装置的自动反馈调节系统,构建完整恒稳的氧浓度自动调节机制,并利用其进行缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠模型的制作。方法购买电子控氧仪,自制气体密闭箱,自主选配组合气体控制阀门和自动感应开关。连接高压氮气,使氮气经电磁控制阀门进入密闭箱;控氧仪测得的密闭箱内的氧浓度信号被输出传至电磁感应开关,后者根据设定的氧浓度阈值控制电磁阀门的通断,进而控制氮气的通入或停止,达到维持密闭箱内的氧浓度恒稳状态。利用该自动控制系统,处理7 d龄颈总动脉结扎术后新生大鼠,设定并调节密闭箱氧浓度为(8.4±0.4)%,持续2.5 h。动物处理后于不同时间点取脑组织,记录表观损伤程度后取材保存,然后利用Western blot及免疫组化方法检测处理后脑组织内分子表达。结果该系统可以稳定调控密闭箱内的氧浓度于设定范围内。颈总动脉结扎术后7 d龄大鼠,于缺氧箱中处理2.5 h后,存活率达80%~90%。动物脑组织及细胞内分子表达发生明显改变,效果明显。结论该低氧试验箱的氧浓度自动控制系统达到了较好程度的稳定性,适于进行缺氧缺血脑损伤动物模型的制作实验。 侯伟健 佟浩 柏树令 陈庆和 田晓红 张保功关键词:缺氧缺血脑损伤 WESTERN BLOT 缺氧缺血脑损伤大鼠脑组织Cofilin 1与ERK1/2蛋白表达与磷酸化的分析 被引量:9 2012年 目的探索新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型脑组织Cofilin1与ERK1/2蛋白表达与磷酸化及其在脑组织中分布的规律。方法新生7日龄SD大鼠,手术结扎左侧颈总动脉并经低氧处理造成缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型,以假手术组为对照,应用western Blot和免疫组化方法检测损伤后一定时间段(0h~48h)损伤侧脑组织Cofilin1与磷酸化cofilin1(p-Cofilin1)及Erk1/2和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达变化,同时检测其在损伤大鼠脑组织和细胞中的表达和分布。结果 Western blot检测显示,HIBD新生SD大鼠脑组织中Cofilin1在HI后的表达与对照组相比也未见明显改变,但磷酸化Cofilin1在HI后1h~12h之间降低,24h后恢复正常;ERK1/2蛋白在不同时点的表达与对照组相比未见明显差异,但可见磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)在缺氧缺血处理(HI)后0h略低于正常,而在1-2h内迅速升高并高于正常对照和假手术,在2h后又逐渐降低。免疫组化结果显示Cofilin1与p-cofilin1在损伤大鼠脑中主要分布于海马和大脑皮质,尤其p-Cofilin表达分布以海马的颗粒细胞为主,并且在HI后7d-14d表达明显增强,在21d则明显降低。结论 Cofilin和ERK的磷酸化修饰与缺氧缺血脑损伤的发生和发展过程有较密切的关系,且cofilin1和p-cofilin1在大脑海马区的定位分布,提示其可能与大脑的学习记忆功能的损伤与修复有一定的关系。 侯伟健 田晓红 柏树令 赵永康 潘峰 李鸿鹏 佟浩 张晓慧 王绍成 王彪 游园园关键词:缺氧缺血脑损伤 ERK1/2 磷酸化 海马 黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用 被引量:5 2015年 目的:探讨黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用及其机制。方法:将培养7~9天大鼠海马细胞随机分为对照组、黄芪甲苷组、谷氨酸损伤组、黄芪甲苷预处理组。采用噻唑蓝法测定细胞存活率,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶含量,流式细胞仪测定细胞凋亡率;2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠探针法检测细胞中活性氧的水平,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中8-羟基脱氧鸟苷的含量。结果:0.1 mmol/L谷氨酸作用于海马神经元24小时后,细胞存活率下降、培养液中乳酸脱氢酶含量、细胞凋亡率、细胞中活性氧的水平及上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量均明显升高。于损伤前加入黄芪甲苷(0.08,0.40,2.00mg/L)孵育30 min可以不同程度提高细胞存活能力,减少乳酸脱氢酶的漏出,降低细胞凋亡率和上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量,但以0.40,2.00 mg/L黄芪甲苷预处理组效果更明显。单纯黄芪甲苷组存活率、细胞凋亡率与正常对照组相比无显著差异,但细胞中活性氧的水平以及上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量明显降低。结论:黄芪甲苷预处理能减轻谷氨酸诱导的海马神损伤,其机制可能与其抗氧化有关。 杨岳 王阳 杨景兰 王佐周 侯伟健关键词:黄芪甲苷 谷氨酸 海马 亚低温治疗在脑缺血再灌注损伤修复中的作用及机制 被引量:4 2016年 脑缺血再灌注损伤可通过多种途径导致细胞坏死、凋亡,然而亚低温处理相较于普通治疗能够有效降低甚至逆转海马区神经细胞的凋亡程度,对脑组织保护作用突出。亚低温可以有效降低脑无氧代谢率,减少酸中毒,降低细胞内Ca^(2+)浓度,减轻脑水肿程度,抑制自由基产生及炎症介质的释放。通过多种途径抑制神经元凋亡,如增加Nestin蛋白,抑制Caspase-3的表达,增加Bcl-2、减少Bax,减少MMP-9蛋白,抑制JNK相关信号通路,减弱EMAPII和proE MAPII阳性表达等一系列途径作用于神经元以减少脑缺血再灌注损伤,提高生存率和治愈率。 薛步升 冯鹏辉 卫凝德 李知非 李怡源 吕晓蕾 侯伟健关键词:亚低温治疗 炎症介质 CASPASE 脑缺血再灌注 神经元凋亡 诱导多能干细胞技术的优化及其应用前景 被引量:2 2016年 诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是类似胚胎干细胞的一种细胞类型,可以通过对已分化的体细胞进行诱导重编程获得,具有自我更新能力和多潜能性,在体外疾病模型的建立、移植替代治疗、发育学等方面有广阔的应用前景,但致瘤性、转化率低、疾病模型拟合度差等缺点限制着iPS技术在临床和科研上的推广。对近几年诱导多能干细胞技术优化方面取得的新进展进行综述,重点阐述降低致瘤性和提高转化率的几种方法及iPS在临床和科研上的应用前景。 夏朦 田晓红 柏树令 侯伟健关键词:诱导多能干细胞 重编程 致瘤性 转化率 小鼠海马神经元细胞系HT22微环境诱导BMSCs神经分化 被引量:2 2016年 目的探讨小鼠海马神经元细胞系HT22的微环境对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的定向诱导作用。方法分别培养HT22细胞和GFP转基因荧光小鼠的BMSCs;直接接触法和间接接触法共培养,荧光显微比较GFP标记的干细胞形态变化;收集间接接触共培养的BMSCs行Western blot检测神经相关的蛋白(GFAP,NSE)的表达和变化;利用免疫荧光法检查GFAP和NSE抗原在细胞内的表达。结果培养的骨髓贴壁细胞为CD11b、CD45阴性,CD90阳性。与HT22细胞直接接触共培养及间接接触共培养的BMSCs细胞长轴增长,轴突样突起明显;经HT22细胞培养液诱导的BMSCs内GFAP、NSE表达水平随时间增加而增强;与HT22细胞直接接触共培养诱导的BMSCs表达GFAP和NSE。结论小鼠海马神经元细胞系HT22的微环境可诱导BMSCs向神经元样细胞分化。 侯伟健 王昕 郝世宇 佟浩 敖强 王佐周 柏树令关键词:神经分化 微环境