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青岛市科技攻关项目(02-1-kj-nn-41)

作品数:6 被引量:43H指数:3
相关作者:牛钟相张伟陈凤梅张秀美高晨更多>>
相关机构:山东农业大学山东省农业科学院德州学院更多>>
发文基金:青岛市科技攻关项目更多>>
相关领域:农业科学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇农业科学

主题

  • 6篇基因
  • 6篇基因芯片
  • 3篇染病
  • 3篇传染
  • 3篇传染病
  • 2篇犬病
  • 2篇狂犬
  • 2篇狂犬病病毒
  • 2篇呼吸道
  • 2篇呼吸道传染
  • 2篇呼吸道传染病
  • 2篇间接ELIS...
  • 2篇PCR
  • 2篇病毒
  • 1篇原体
  • 1篇支原体
  • 1篇致病
  • 1篇致病菌
  • 1篇乳房炎
  • 1篇生物素

机构

  • 5篇山东农业大学
  • 3篇山东省农业科...
  • 1篇德州学院

作者

  • 4篇牛钟相
  • 3篇张伟
  • 2篇陈凤梅
  • 2篇张秀美
  • 1篇尹逊河
  • 1篇李秀萍
  • 1篇高晨

传媒

  • 1篇中国兽医学报
  • 1篇江苏农业科学
  • 1篇动物医学进展
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇中国预防兽医...
  • 1篇家畜生态学报

年份

  • 2篇2008
  • 2篇2007
  • 1篇2006
  • 1篇2005
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
狂犬病病毒低密度基因芯片的建立及其与常规检测方法的比较研究被引量:3
2007年
根据已发表狂犬病病毒(RV)的序列,设计合成扩增高度保守核(N)蛋白片断的引物。通过生物素标记的RT-PCR技术和微量点样技术,将高度保守N蛋白基因片段作为探针点,在硝酸纤维素膜上制成16点阵的低密度诊断基因芯片。提取160份可疑犬的血液,以核酸作模板进行RT-PCR扩增,将其产物分别用琼脂糖凝胶电泳和低密度芯片检测;同时采用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化狂犬病病毒作抗原,建立间接ELISA的检测方法。试验结果表明,RV低密度基因芯片的检测率比ELISA方法和RT-PCR方法灵敏度高、特异性强,完全可以作为临床诊断的一种方法。
张伟吴时友尹燕博张秀美
关键词:狂犬病病毒基因芯片间接ELISAPCR
通用基因芯片对奶牛乳房炎主要致病菌的检测被引量:11
2008年
应用生物信息学手段和查阅文献资料设计了金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、绿脓杆菌、停乳链球菌、乳房链球菌6种奶牛乳房炎主要致病菌的通用引物和金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌的寡核苷酸探针及无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌的特异引物,并用这3种特异引物扩增片段的纯化产物作为这3种链球菌的检测探针。在引物对样品中细菌的相应基因片段扩增的同时进行靶基因的生物素标记,扩增的产物与硝酸纤维素膜上的探针进行杂交,酶联、显色后根据芯片扫描仪的判读结果来确定奶牛乳房炎致病菌感染的种类。结果表明,建立的以16S rDNA为对象的基因芯片技术可以快速的检测出以上6种细菌,整个检测过程需要6h^7h,灵敏度高,特异性好,能快速的对奶牛乳房炎的主要致病菌做出诊断。
李秀萍尹逊河高晨尹燕博吴时友
关键词:基因芯片通用引物奶牛乳房炎致病菌
五种鸡呼吸道传染病基因芯片诊断技术的研究被引量:1
2006年
用分子克隆方法获得新城疫病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒,鸡毒支原体各一段高度保守基因片段作为探针,用芯片点样仪点样到硝酸纤维膜上,制成检测基因芯片;提取样品中的RNA进行反转录,然后在PCR过程中用生物素标记,将PCR产物滴加到芯片上进行特异性杂交,对杂交结果进行扫描分析,可同时对上述5种常见禽呼吸道疾病作出诊断。此方法与PCR检测方法结果符合率在95%以上,其检出率比临床分离法要高30%以上。
陈凤梅吴时友尹燕博牛钟相
关键词:基因芯片
狂犬病诊断基因芯片的建立和检测应用的初步研究被引量:11
2008年
根据已发表的狂犬病病毒(RV)的序列,设计合成能扩增高度保守核(N)蛋白片断的一对引物。通过生物素标记PCR技术,将核(N)蛋白基因片断作为探针点在硝酸素纤维膜上,制作成疾病诊断基因芯片。取160份可疑动物的血液,提取核酸作模板进行PCR扩增,将其产物与诊断基因芯片进行特异性逆向点杂交检测;并用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化狂犬病病毒作抗原,建立检测RV抗体的间接ELISA。把以上两种方法应用于临床,结果基因芯片的检测率比ELISA方法和(RT)PCR要高15%左右,表明建立的狂犬病诊断基因芯片具有更高的灵敏度和特异性。
张伟吴时友尹燕博牛钟相张秀美
关键词:狂犬病病毒基因芯片间接ELISA
鸡呼吸道传染病基因芯片诊断方法的建立被引量:14
2005年
A microarray technique was developed by preparing highly conserved DNA fragments for five poultry respiratory tract diseases(Newcastle disease virus,avian influenza,infectious bronchitis virus,infectious laryngotracheitis virus,Mycoplasma gallisepticum)using molecular cloning methods and the DNA fragments were spotted onto NC filter to form microarrays.RNA extracted from samples was reverse-transcripted,then followed by PCR amplification and labling with biotin-11-dUTP.The labeled DNA and prepared DNA microarray were subjected to specific hybridization,the hybridization results were scanned and analyzed with a scanner. The results showed that the microarray technique could identify and distinguish the five poultry respiratory tract diseases.The method is rapid,sensitive and specific,and can screen or quarantine a large number ample samples within a very short time.
陈凤梅吴时友尹燕博牛钟相
关键词:基因芯片生物素传染性支气管炎传染性喉气管炎鸡毒支原体
犬常见传染病诊断基因芯片的研究与应用被引量:3
2007年
根据PCR技术扩增出犬腺病毒(CAV)ORF1(p-Ⅷ)基因、犬细小病毒(CPV)VP2基因、鸡血红蛋白的珠蛋白基因(GLOBc)各保守基因片段;采用RT-PCR扩增出犬冠状病毒(CCV)纤突蛋白(S)基因、犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)基因、犬副流感病毒(CPIV)核衣壳结构蛋白(NP)基因、狂犬病病毒(RV)核蛋白(N)基因的各一段保守序列,克隆获取质粒。通过微量点样技术将这些质粒作为探针点在硝酸纤维素膜上,产生二维DNA探针阵列,制作成诊断基因芯片。对360份待检样品匀浆后提取核酸作为模板,扩增相应保守基因片段。通过生物素标记PCR(RT-PCR)技术,将所获得的扩增产物与诊断基因芯片进行特异性的逆向点杂交,然后用扫描仪对芯片进行扫描分析、判断。结果表明,此方法比病毒分离、HI、PCR或RT-PCR方法灵敏度高、特异性强,平均检出率要高20%以上,并可同时对犬多种疫病进行快速诊断。
张伟吴时友尹燕博牛钟相
关键词:基因芯片
共1页<1>
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