国家自然科学基金(81070369)
- 作品数：13 被引量：47H指数：4
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- 同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗重症急性胰腺炎相关肺损伤被引量：4
- 2012年
- 背景:目前骨髓间充质干细胞移植治疗各种炎症性疾病研究甚多,但在重症急性胰腺炎相关器官损伤干预方面研究甚少。目的:观察同种异体骨髓间充质干细胞移植对重症急性胰腺炎相关肺损伤大鼠的干预作用。方法:采用全骨髓差异贴壁法培养获得骨髓间充质干细胞。100只SD大鼠随机取32只为假手术组,仅翻动轻柔胰腺;另68只制作重症急性胰腺炎肺损伤动物模型,并分为干预组和对照组,每组再分为4个时间点。分别经尾静脉注入1×109L-1浓度骨髓间充质干细胞悬液和同体积生理盐水。干预组每个时间点随机取1只注射CM-DiI标记的骨髓间充质干细胞悬液用于细胞示踪研究。结果与结论:逆行胆胰管注射建模能早期诱发重症急性胰腺炎及相关肺损伤,炎症因子及E-选择素表达明显增高,并且胰腺和肺的损伤程度随时间延长而加重;移植荧光标记的干细胞后肺组织可见红色荧光出现,并随时间增长而增多;干预组肺组织损伤情况均较对照组各时间点减轻,血清淀粉酶及炎症递质肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β较对照组各时间点下降。干预组肺组织中E-选择素表达较对照组下降。提示同种异体骨髓间充质干细胞移植能有效保护肺血管内皮细胞,减轻重症急性胰腺炎相关肺损伤。
- 盛闽陈志耀黄鹤光王锋金善丰
- 关键词：重症急性胰腺炎肺损伤骨髓间充质干细胞
- 胆胰管结扎法制作大鼠胰源性肺损伤模型被引量：9
- 2012年
- 目的探讨建立稳定、可靠的大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤模型的方法,以利于胰源性急性肺损伤(ALI)及急性呼吸窘迫综合征(ARDS)疾病的研究。方法健康Sprague-Dawley(SD)大鼠分成结扎组(n=20)、传统组(n=20)和假手术组(n=20),经胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠,结扎法组给予结扎胆胰管远端,传统法组不结扎,假手术组不注射5%牛磺胆酸钠;术后补液支持,观察24 h后SAP肺组织损伤和水肿程度以及自然病程。结果结扎组模型能诱导明显的ALI,48 h内全部大鼠(100%)因急性呼吸衰竭而死亡,其死亡率明显高于传统组(20%),P<0.05。结扎组有4只大鼠出现胸腔积液,而传统组和假手术组大鼠均未见明显胸腔积液。结扎组大鼠腹水量为(21.15±5.33)ml,明显多于传统组大鼠的(7.75±2.66)ml,P<0.05,而假手术组未见明显腹水产生。结扎组大鼠血清淀粉酶为(2 470.70±399.73)U/L,明显高于传统组的(1 528.40±289.54)U/L和假手术组的(831.10±93.26)U/L,P<0.001。结扎组大鼠血清白蛋白水平为(6.90±1.66)g/L,明显低于传统组的(13.10±0.99)g/L和假手术组的(16.20±0.92)g/L,P<0.001。结扎组大鼠肺W/D为6.50±0.23,明显大于传统组的4.92±0.18和假手术组的4.61±0.16,P<0.001。结扎组大鼠肺组织病理评分为(29.25±1.07)分,明显高于传统组的(12.65±1.98)分和假手术组的0分,P<0.001。结扎组大鼠胰腺组织病理评分为(15.95±0.15)分,明显高于传统组的(13.75±0.66)分和假手术组的(0.13±0.29)分,P<0.001。电镜下见,结扎组大鼠肺毛细血管基膜水肿溶解,连续性中断;细胞核变形、溶解;内皮吞饮小泡增多,功能活跃;细胞间紧密连接水肿模糊,甚至破裂;肺泡上皮细胞间紧密连接破坏、间隙明显变宽,其超微结构病理变化明显较传统组严重,而假手术组肺组织在电镜下未见明显病理学改变。结论本实验动物模型可重现临床上胆源性SAP并发ALI或ARDS的发病过程,适用于研究SAP早期�
- 王锋黄鹤光陆逢春陈燕昌
- 关键词：重症急性胰腺炎肺损伤
- 乌司他丁对重症急性胰腺炎大鼠脑毛细血管渗漏的影响被引量：3
- 2011年
- 胰性脑病是重症急性胰腺炎（SAP）的严重并发症，与大脑的毛细血管渗漏紧密相关。occludin蛋白是脑组织重要的紧密连接蛋白，与大脑毛细血管通透性密切相关。乌司他丁（UTI）是一种广谱的蛋白酶抑制剂，已经广泛用于临床，但其对胰性脑病的治疗及机制研究甚少。本研究旨在探讨occludin在SAP大脑毛细血管渗漏中的作用及UTI治疗胰性脑病的作用机制。
- 李洪森黄鹤光曹洪庆
- 关键词：重症急性胰腺炎毛细血管渗漏乌司他丁大鼠脑OCCLUDIN胰性脑病
- 肿瘤坏死因子-α对人脐静脉血管内皮细胞结构和功能的影响
- 2015年
- 目的 观察人肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人脐静脉血管内皮细胞EA.hy926结构和功能的影响,并探讨其作用机制.方法 培养人脐静脉血管内皮细胞EA.hy926,分组加入1、10、100 μg/L TNF-α培养24 h,或加入100 μg/L TNF-α培养3、8、12、24 h,Western blot检测细胞中血管扩张刺激磷蛋白（VASP）的表达水平;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测细胞中VASPmRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化.结果 TNF-α干预24h不同浓度组VASP mRNA水平分别为0.993±0.045（对照组）、0.801±0.022（1 μg/L）、0.626 ±0.018（10 μg/L）、0.529±0.017（100 μg/L）;蛋白水平分别为0.849±0.021（对照组）、0.788±0.028（1μg/L）、0.364 ±0.018（10 μg/L）、0.317±0.023（100 μg/L）;细胞凋亡率分别为（2.5±1.0）％（对照组）、（14.0±1.1）％（1 μg/L）、（24.4±3.8）％（10 μg/L）、（36.0±2.5）％（100 μg/L）.100 μg/L TNF-α干预不同时间组VASP mRNA表达分别为0.829 ±0.051（3 h）、0.741±0.029（8 h）、0.669 ±0.026（12 h）、0.528 ±0.017（24 h）,蛋白水平分别为0.528±0.201（3 h）、0.470±0.016（8 h）、0.299±0.015（12 h）、0.298±0.016（24 h）;细胞凋亡率分别为（5.4±0.9）％（3 h）、（11.4±1.2）％（8 h）、（21.2±1.4）％（12 h）、（36.3±2.1）％（24 h）.VASPmRNA及蛋白水平均呈时间及剂量依赖表达降低（P＜0.05）,细胞凋亡率呈时间及剂量依赖升高（P＜0.05）.结论 TNF-α通过破坏血管内皮细胞结构和功能导致血管内皮细胞通透性增高,呈时间与剂量依赖性.
- 周武汉黄鹤光刘多谋陈志耀陆逢春
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α血管内皮细胞血管扩张刺激磷蛋白脱噬作用
- 绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎大鼠后在多脏器的分布被引量：6
- 2012年
- 背景:利用绿色荧光蛋白转基因小鼠间充质干细胞自身携带荧光性的特点,干预重症急性胰腺炎大鼠后,便于动物体内跟踪观察。目的:观察绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞在重症胰腺炎大鼠体内各脏器的分布情况。方法:直接贴壁法分离培养绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞,90%融合后消化传代扩增。传至第3代后行CD29+、CD90+、CD34-、CD45-细胞免疫表型鉴定。显微镜下逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠制造SD大鼠重症急性胰腺炎模型。1h后,按2×106/只尾静脉注入重症急性胰腺炎SD大鼠体内。分别于6,12,24h取肝、肾、脑、肺、胰、肠脏器送普通病理检查,观察胰腺病理变化及骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎SD大鼠后在各脏器干细胞分布情况及灰度值测定。结果与结论:胰腺破坏随时间延长而加强,24h破坏最严重;GFP小鼠CD29阳性细胞91.1%,CD90阳性细胞93.5%,CD34阳性细胞0.82%,CD45阳性细胞2.22%;注射干细胞SD大鼠各脏器均有绿色荧光出现,并随时间增长而增强;在肾脏组织中灰度值最高,脑组织最少。提示骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎大鼠后能在各脏器稳定分布。
- 金善丰陈志耀黄鹤光
- 关键词：重症急性胰腺炎骨髓间充质干细胞干预
- 重症急性胰腺炎大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶的表达与肺毛细血管内皮屏障损伤被引量：4
- 2013年
- 目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肺组织中的表达情况,并初步探讨p38MAPK与SAP肺毛细血管内皮屏障损伤的关系。方法将40只健康雄性SD大鼠随机(随机数字表法)分为假手术(SO)组和SAP组,SAP组又再分为3、6、12及24 h 4个时间点组,共5组,每组8只。采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠的方法建立SAP大鼠模型。采用HE染色方法观察大鼠肺和胰腺组织的病理学改变;采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用免疫组化染色方法检测肺组织中磷酸化p38(p-p38)蛋白和水通道蛋白1(AQP1)的表达水平;采用实时定量荧光PCR法(real-time PCR)检测肺组织中AQP1 mRNA的表达水平。结果 SAP各时间点组大鼠肺组织充血水肿,炎症细胞浸润;胰腺组织可见大片坏死,部分腺叶结构模糊甚至消失;血清TNF-α和IL-1β水平均较SO组高(P<0.05)。SO组大鼠肺组织中p-p38蛋白仅有微量表达,而在SAP3 h组,p-p38蛋白的表达就明显上调,在6 h时达高峰,24 h时仍高于SO组(P<0.05)。SAP各时间点组大鼠肺组织中AQP1 mRNA及其蛋白的表达水平均较SO组下降(P<0.05),并随着时间的推移而逐渐下降;SAP组大鼠AQP1 mRNA的表达与TNF-α、IL-1β及p-p38蛋白之间均存在负相关关系(r=-0.87,P<0.05;r=-0.88,P<0.05;r=-0.78,P<0.05)。结论肺组织中AQP1蛋白表达的下调是SAP肺毛细血管内皮屏障损伤的重要原因之一,其可能与p38MAPK的激活及炎症因子的过度释放有关。
- 林葆黄鹤光陈志耀方海宗
- 关键词：肺损伤P38丝裂原活化蛋白激酶水通道蛋白1
- E-选择素在大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤组织的动态表达及其意义被引量：1
- 2012年
- 目的探讨E-选择素在实验性急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠肺组织的表达及其意义。方法按随机数字法将大鼠分为对照组及ANP组。采用逆行胆胰管注射5％牛磺胆酸钠制作大鼠ANP模型，术后3、6、12、24h分批处死动物。检测血清淀粉酶、白蛋白及Ca2＋水平，计算肺湿／干重比，常规行胰腺和肺组织病理检查并评分，实时荧光定量PCR及免疫组化法检测大鼠肺组织E-选择素mRNA和蛋白表达。结果ANP6h组大鼠血淀粉酶、胰腺及肺病理评分、肺湿／干重比分别为（3978±476）U／L、（8．22±0．63）分、（12．31±1．58）分、5．21±0．20，均显著高于对照组的（843±90）U／L、（0．22±0．36）分、（0．13±0．34）分、4．46±0．17（P〈0．05或〈0．01）；血清白蛋白水平为（12．9±1．0）g／L，显著低于对照组的（15．6±0．7）g／L（P〈0．01）；12h时的血Ca2＋水平为（2．33±0．15）mmoIVL，显著低于对照组的（2．57±0．23）mmoL／L（P〈0．01）。E-选择素定位于血管内皮细胞胞膜及胞质。ANP6h组大鼠肺组织E-选择素mRNA与蛋白表达显著高于对照组（3．51±0．45比0．95±0．16；0．174±0．019比0．060±0．006，P值均〈0．01）。结论ANP大鼠并发肺损伤时肺组织的血管内皮细胞E-选择素表达呈时间依赖性上调，并参与白细胞的附壁及外渗，促进肺损伤。
- 盛闽王锋黄鹤光陈志耀
- 关键词：肺损伤E-选择素
- 骨髓间充质干细胞对急性胰腺炎与肺损伤作用机制的研究被引量：1
- 2011年
- 急性胰腺炎（acutepancreatitis，AP）是一种病情险恶、并发症多、病死率较高的急腹症，而重症急性胰腺炎（severea—cutepancreatitis，SAP）约占所有AP的20％，并且胰腺外器官的损伤往往导致病情超出机体自我代偿能力，引发多脏器严重损害。AP发生时机体内多种因素导致补体活化，激活分叶核粒细胞、单核巨噬细胞、肺泡上皮细胞和内皮细胞等，并释放一系列炎性反应介质和酶，包括TXA2、LT、PAF、TNF、氧自由基及溶酶体酶等，继而使肺泡上皮细胞和血管内皮细胞不同程度损伤；
- 盛闽黄鹤光
- 关键词：骨髓间充质干细胞急性胰腺炎急性肺损伤
- 环磷酸腺苷／蛋白激酶A信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用
- 2013年
- 目的探讨环磷酸腺苷／蛋白激酶A（cAMP／PKA）信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤的作用机制。方法健康雄性SD大鼠72只，按完全随机法分为假手术（SO）组、重症急性胰腺炎组（SAP组）、SAP＋H89（cAMP抑制剂）组，后两组按取材时间不同又分为3、6、12及24h四个亚组，共9组，每组8只。采用酶联免疫吸附法检测血清TNF-α、IL-1β，同时观察胰腺和肺组织的病理变化，免疫组织化学蛋白方法检测cAMP依赖PKA催化亚基C（PKAC）和磷酸化的血管扩张刺激磷蛋白（P—VASP），荧光定量聚合酶链反应检测肺组织VSAP mRNA表达水平。结果与SO组比较，SAP组各时间点血清TNF-α、IL-1β明显上升（P〈0．05），胰腺、肺病理学改变明显，肺组织PKAC蛋白、VASP磷酸化水平及VASP mRNA表达水平明显增强（P〈0．05），12h达高峰[TNF-α（266．07±17．14）pg／mL、IL-1β（169．17±25．92）pg／mL、PKAC（210．69±6．32）×103、P—VASP（56．62±0．57）×103、VASP mRNA（2．06±0．21）]，且与TNF-α、IL-1β之间存在明显的正相关性。与SAP组比较，SAP＋H89组各时间点胰腺、肺病理学改变明显减轻，肺组织PKAC蛋白、VASP磷酸化水平及VSAP mRNA表达水平明显下降（P〈0．05）。结论cAMP／PKA信号转导通路的活化参与了重症急性胰腺炎肺损伤的病理过程，可能与TNF-α及IL-1β水平上调及VASP磷酸化而发挥作用有关。
- 方海宗陈志耀黄鹤光林葆
- 关键词：胰腺炎环AMP依赖性蛋白激酶类肺损伤血管扩张刺激磷蛋白
- 骨髓间充质干细胞对重症急性胰腺炎大鼠肾损害干预的研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肾损害的干预效果及机制。方法将鉴定过的骨髓间充质干细胞注射到SAP大鼠体内，观察血清淀粉酶、肌酐、尿素氮及肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1变化；透射电镜下观察肾脏间质毛细血管超微结构变化；免疫组织化学对肾脏AQP1定位；荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测肾脏水通道蛋白1（AQP1）mRNA变化，Westernblot检测肾脏AQP1蛋白变化。结果（1）培养的细胞经流式细胞术检测，CD29阳性细胞率为99．30％，CIDO阳性细胞率为93．50％，CD34阳性细胞率为0．82％，CD45阳性细胞率为2．22％；（2）间充质干细胞干预后，SAP大鼠6、12、24h血清淀粉酶、肌酐、尿素氮及TNF-α、IL-1低于对应时间点未干预的SAP大鼠，两者差异有统计学意义（P〈0．05）；（3）间充质干细胞干预后，SAP大鼠6、12、24h肾脏间质毛细血管变化均轻于对应时间点未注射SAP大鼠；（4）间充质干细胞干预后，SAP大鼠12、24hAQP1mRNA均高于对应时间点未干预的SAP大鼠，两者差异有统计学意义（P〈0．05）；6、12、24hAQP1蛋白均高于对应时间点未干预的SAP大鼠，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论骨髓间充质干细胞能减轻SAP大鼠肾损害，其机制可能同抑制炎性因子表达，减轻间质毛细血管损害，阻滞肾脏AQP1表达下调有关。
- 陈先强陈志耀黄鹤光
- 关键词：间充质干细胞重症急性胰腺炎肾损害炎性因子
