国家自然科学基金(39070822)
- 作品数：11 被引量：209H指数：5
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- 活化的人淋巴细胞与不同猪真皮共同培养的免疫反应特征被引量：4
- 2002年
- 目的探讨临床应用异种无细胞真皮基质(Xeno-ADM)的免疫反应。方法用网状Xeno-ADM与超薄自体皮片复合移植于3例大面积Ⅲ度烧伤患者,成活后4～8周分离外周血单个核细胞(PBMC),以同期单纯自体皮移植的大面积烧伤患者PBMC为对照,用新鲜小猪整张真皮片(wholexenodermis)、微粒真皮(mincedxenodermis)和MincedXeno-ADM作抗原刺激物,通过不同的猪真皮→人淋巴细胞共同培养(DLCC)、3H-TdR掺入、免疫组织化学技术,检测反应细胞增殖水平和细胞类型。结果DLCC后,新鲜小猪微粒真皮组对活化和未被活化人淋巴细胞增殖刺激作用均明显强于猪整张真皮组和Xeno-ADM组(P<0.05～0.01),增殖和浸润到真皮内的细胞以CD3+CD4+/CD45RO+T淋巴细胞为主、单核细胞和B细胞次之。结论以CD3+-CD4+/CD45RO+为主的T淋巴细胞参与可能是异种真皮移植后的免疫反应特征;真皮微血管内皮细胞ICAM-1的表达可能与诱导淋巴细胞浸润和增殖有关,与未活化的淋巴细胞相比,采用活化的淋巴细胞进行DLCC,可更真实地反映宿主对Xeno-ADM的免疫反应状况。
- 姜笃银陈璧胡大海汤朝武
- 关键词：人淋巴细胞猪真皮免疫反应异种移植无细胞真皮基质
- 异种脱细胞真皮基质抗原性的实验研究被引量：51
- 2003年
- 目的 观察不同方法制备的异种脱细胞真皮基质 (Xeno -ADM )埋植物的抗原性差异。 方法 将猪断层中厚皮片采用胰蛋白酶 +tritonX 10 0等处理 ,制成Xeno -ADM ,分为戊二醛交联的Xeno ADM1组、网状交联的Xeno ADM2 组、未交联的Xeno ADM3 组、动物先用Xeno ADM蛋白致敏后再移植交联的Xeno ADM4组和未交联的异体兔Allo ADM对照组。分别将移植物埋植于 5组共计 2 5只日本白兔的耳部和背部皮下 ,术后 2～ 32周检测兔血清抗ADMs抗体效价 ,并观察移植物大体和组织学变化。 结果 Xeno ADM4埋植物组血清抗Xeno ADM蛋白抗体效价最高 ;排除致敏因素的影响 ,Xeno ADM各组血清抗体滴度依次为 :Xeno ADM3 组 >Xeno ADM2 组 >Xeno ADM1组 (P<0 .0 5～ 0 .0 0 1) ;在Allo ADM组中 ,有 4 0 %的血清样本呈现出抗Allo ADM蛋白抗体阳性。组织学上 ,Xeno ADM移植部位有激烈而持久的炎症反应 ,明显强于Allo ADM异体埋植对照组 ;ADM被降解吸收的程度依次为 :Xeno ADM3 >Xeno ADM2 >Xeno ADM4>Xeno ADM1>Allo ADM (P <0 .0 5～ 0 .0 0 1) ,在交联型ADM组易产生异物巨细胞反应。 结论 Xeno ADM的免疫原性强于Allo ADM ,诱导宿主产生IgG限制的免疫反应 ;大张变性的ADM埋植物能降低抗原 抗体反应 。
- 姜笃银陈璧贾赤宇陶克
- 关键词：异种脱细胞真皮基质抗原性组织学动物实验
- 异种或同种异体脱细胞真皮基质移植后免疫细胞分型的研究被引量：26
- 2003年
- 目的 比较异种脱细胞真皮基质 (Xeno ADM)与同种异体脱细胞真皮基质 (Allo ADM)移植物免疫学反应的差异。 方法 选用健康小猪和健康自愿者的中厚皮 ,分别制成Xeno ADM和Aoll ADM后 ,与深度烧伤患者的断层超薄自体皮 (UTS)重叠 ,即时覆盖其切痂创面 ,相应设为Xeno组(2 6例 )和Aoll组 (10例 )。于另 8例深度烧伤患者切痂创面上移植单纯断层自体中厚皮 (TTS) ,设为对照组。采用免疫组化方法 ,于移植术后进行组织学观察 ,并检测外周血和移植物内免疫细胞分型情况。 结果 与对照组比较 :(1)移植术后 ,Xeno组和Allo组外周血免疫细胞分型情况无明显改变(P >0 .0 5 )。 (2 )Xeno组移植物局部长期存在炎症 免疫反应 ,其中 80 %以上为CD3+ CD4 + 和CD4 5RO+ 细胞 ,CD8+ 细胞、Vs8C+ 浆细胞、CD5 7+ 的自然杀伤细胞 (NK)相对较少 ;另可见嗜酸性粒细胞和CD6 8+ CD4 + 异物巨细胞反应 ,在发生排异反应前的Xeno ADM中尤为明显 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。Allo组仅在移植早期 (术后 8周以内 )有中度炎症 免疫反应。 结论 人体对脱细胞真皮基质的特异性免疫反应 ,可能是在单核 巨噬细胞参与下、以CD4 + T淋巴细胞介导的细胞免疫为主要表现 ;
- 姜笃银陈璧贾赤宇张红
- 关键词：脱细胞真皮基质异种移植烧伤
- 无细胞异体真皮基质在关节功能部位整复中的应用被引量：5
- 2004年
- 目的 观察无细胞异体真皮基质 (ADM)在功能部位的移植效果。方法 选择 11例大面积烧伤后产生增生性瘢痕伴有关节功能障碍的患者 ,将 13块经胰蛋白酶等处理制成的网状ADM与超薄断层自体皮片 (USSG)重叠 ,一次性移植于 9例患者四肢关节部位的切瘢创面上 ,并以邻近的断层中厚自体皮片 (TSSG)移植物为对照组 ,2W后首次换药 ,定期作CS随访和组织活检观察。结果 与对照组一样 ,CS移植物全部成活 ,随访 1～ 5年未见排异反应和瘢痕增生 ,外观质地和功能接近正常皮肤 ,真皮层无皮肤附件 ,胶原排列有序 ,仅有少量淋巴细胞散在浸润。结论 充当真皮替代物的ADM可以用于功能部位瘢痕挛缩的整复治疗。
- 张玮姜笃银杨定文陈璧
- 关键词：无细胞异体真皮基质ADM关节功能整复治疗CS
- 细胞因子对异种脱细胞真皮基质免疫调节作用的临床研究被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨烧伤患者接受异种 /异体脱细胞真皮基质 (xeno /allo ADM )移植后全身和局部多种细胞因子与移植物近期转归的关系。 方法 在大面积烧伤患者的四肢切痂创面上 ,移植xeno ADM (12例 ,19块 )或allo ADM(15例 ,18块 ) ,其上覆盖自体超薄断层皮片 ,并以 6例单纯移植自体中厚断层皮片 (auto TTS)的烧伤患者为对照。移植物成活后 4～ 8周 ,收集局部组织标本、血清和xeno ADM排斥后的创面渗出液 ,采用免疫组织化学染色与酶联免疫吸附法 (ELISA) ,检测白细胞介素 (IL) 1β、IL 4、IL 6、肿瘤坏死因子α(TNF α)和γ型干扰素 (IFN γ)的含量。 结果 免疫组织化学染色结果显示 ,移植物内IL 1β、IL 4、IL 6、TNF α和IFN γ的阳性细胞密度或着色强度相比较 ,xeno ADM >allo ADM >auto TTS (P <0 .0 5 )。ELISA检测结果显示 ,xeno ADM被排斥后创面渗出液中IL 4、IL 6、TNF α和IFN γ水平明显高于自体血清 ,但其血清IL 4与IFN γ水平分别低于和高于未排斥时。xeno ADM移植后血清中IL 4、IFN γ水平明显高于allo ADM和auto TTS(P <0 .0 5～ 0 .0 1)。 结论 xeno ADM移植后可在局部检测到高水平的IL 1β、IL 4、IL 6、IFN γ ,可能与细胞杀伤和细胞因子介导的免疫放大作用有关。
- 姜笃银陈璧第
- 关键词：细胞因子异种脱细胞真皮基质免疫调节酶联免疫吸附法细胞外基质
- 无细胞异种真皮基质临床应用的免疫反应特征被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨临床应用异种猪 /异体人无细胞真皮基质 (s /h ADM )的免疫反应特征。方法 在临床大面积烧伤患者深度切痂创面上 ,将s ADM或h ADM与超薄断层自体皮重叠移植 ,采用免疫组化和原位杂交方法检测移植物中CD3、CD4、CD8、γ 干扰素 (IFN γ)和白细胞介素 4 (IL 4 )阳性细胞的百分比 (% ) ,以及IFN γ和IL 4mRNA的表达水平。结果 浸润于ADM组织中免疫细胞以CD4和IL 4阳性细胞为主 ,与免疫组化结果一致 ,IL 4mRNA在所有标本中均有较高的表达水平 ,s ADM组表达显著强于h ADM组 (P <0 0 5 ) ,在发生排异反应前的s ADM组织中IL 4mRNA和IFN γmRNA一样阳性细胞均明显增加 ,而排异后两者均显著下降 ;IFN γmRNA仅在h ADM组移植早期有弱阳性表达 ,与s ADM组统计学有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,接近于断层中厚自体皮片移植物。结论 s ADM移植后的免疫应答是由异种组织特异性蛋白引发的Th2淋巴细胞介导的体液免疫过程。
- 姜笃银陈壁贾赤宇张玮陶克
- 关键词：无细胞异种真皮基质免疫反应免疫组化白细胞介素4Γ-干扰素
- 复合皮移植的实验研究与临床应用被引量：50
- 2004年
- 目的 寻求一种较理想的真皮替代物 ,用以修复全厚皮肤缺损创面。 方法 (1 )将异体 /异种脱细胞真皮基质 (allo/xeno ADM) +自体刃厚皮组成复合皮 (CS),以自体刃厚皮作对照 ,采用一步移植法进行实验研究和临床研究。移植术后应用生物化学及免疫学方法观察移植物抗原性的改变、表皮 真皮连接区 (DEJ)基底膜带结构的再形成情况。 (2 )在此基础上 ,应用前述CS移植技术治疗5 3例全厚皮缺损或瘢痕切除患者 ,观察术后皮片成活情况并作随访。 结果 CS一步法移植后的成活情况良好。 (1 )移植后 2 8周可见DEJ基底膜带重新形成 ,基底膜细胞呈极性生长并呈波浪形排列 ,真皮乳头与皮钉再生。allo ADM的抗原性明显低于xeno ADM,仅在术后早期有少数炎性细胞浸润 ,未见明显的免疫排斥反应。 (2 )移植于 5 3例患者的 70块CS中 ,6 5块完全存活占 92 9%,2块因更换敷料不当部分存活 ,3块因创面感染移植失败。患者最长随访时间为 8.5年 ,所移植的CS质地和色泽接近正常皮肤。 结论 allo/xeno ADM的抗原性很低 ,移植后能发挥长期的真皮支架或诱导组织再生的真皮“模板”作用。
- 陈璧姜笃银贾赤宇汤朝武姚庆君韩军涛刘亚玲徐明达
- 关键词：移植后基底膜ADM抗原性复合皮移植存活
- 猪与人致敏的淋巴细胞混合培养及其细胞因子检测被引量：4
- 2002年
- 目的 :探讨临床应用异种无细胞真皮基质 (Xeno ADM)的免疫反应机理。方法 :分离正常猪、正常人和接受Xeno -ADM复合移植的临床大面积烧伤患者的外周血单个核细胞 (PBMC) ,以前两种细胞为刺激细胞、后者为反应细胞 ,通过异种混合淋巴细胞培养 (Xeno -MLC)和同种异体混合淋巴细胞培养 (Allo -MLC)、3 H TdR掺入和酶联免疫吸附分析 (ELISA)方法 ,检测不同抗原对反应细胞增殖的刺激作用及其IL - 2 (IU·ml-1)、IL - 4 (IU·ml-1)和IFN - (ng·L-1)的动态变化。结果 :Xeno MLC组淋巴细胞增殖反应和培养 4d后的IL - 2、IL - 4、IFN - 的分泌水平均明显高于Allo -MLC组和空白对照组 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。结论 :有辅助性T淋巴细胞 - 1(Th1)和Th2参与的细胞免疫和IL - 4诱导的体液免疫可能是异种移植物 (Xeno -ADM)免疫排异反应的特征 ;用预先致敏的淋巴细胞进行MLC 。
- 姜笃银陈璧汤朝武贾赤宇
- 关键词：烧伤无细胞真皮基质异种移植混合淋巴细胞培养细胞因子免疫学
- 异种脱细胞真皮基质的制作和临床应用观察被引量：105
- 2002年
- 目的 降低异种 (猪 )真皮组织的抗原性 ,探讨在临床复合移植的可行性。 方法 健康小猪中厚皮 ,半数经戊二醛交联后采用胰蛋白酶和TritonX 10 0等脱细胞处理 ,制成未交联(sADM0 )和交联型 (sADM1)网状脱细胞真皮基质 ,通过动物实验和临床应用 ,观察 2种sADM组织学变化和移植效果。 结果 (1)兔皮下埋植sADM0 宿主细胞侵入迅速 ,炎症反应和组织降解明显 ,而sADM1炎症反应轻 ,皮片降解和收缩不明显 ;(2 ) 10例烧伤患者Ⅲ度创面和 1例胸部瘢痕切除后 ,以自体薄中厚皮 (ATS)和自体刃厚皮或超薄皮 (UTS)为对照 ,进行sADM +UTS复合移植 ,19块复合皮平均成活率为 78.9% ,与ATS组无显著差异。其中sADM0 +UTS组早期炎症反应和创面收缩明显 ,外观效果与UTS组相当 ;在sADM1+UTS组 ,早期炎症反应和创面收缩较轻 ,外观平整 ,触软 ,与ATS组移植效果相当 ,但有 3例患者的 6块创面在术后平均 (12 .8± 6 .9)周时 ,出现表皮破溃、sADM1外露和组织学严重的异物巨噬细胞反应。 结论 临床用交联型sADM作复合皮的真皮替代物 ,能减缓早期免疫反应 ,提高UTS移植效果 ,但仍不可避免迟发性异种排异反应。
- 姜笃银陈璧徐明达胡大海汤朝武朱雄翔
- 关键词：脱细胞真皮基质皮肤移植烧伤
- 免疫组化方法检测猪与人皮肤通用抗原标志
- 2003年
- 目的 :探讨猪与人皮肤组织蛋白抗原性的差异。方法 :人和小猪全厚正常皮肤做冰冻切片 ,用抗人皮肤组织相关抗原 (HLA -ABC ,HLA -DR ,Vimentin ,Desmin ,Actin ,FⅧRA ,Cytokeratin)、细胞因子及其受体和胞外基质 (Hyaluronicacid ,Fibronectin ,Laminin ,TypeⅣcollagen ,Estradiol- 1 7β和Tstosterone)及I、Ⅲ、Ⅶ型胶原等抗原成分的单克隆或多克隆抗体进行免疫组化染色 ,比较猪与人皮肤组织抗原性异同。 结果 :在猪皮肤组织可检测到Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ型胶原和Hyaluronicacid ,Fibronectin ,Laminin ,FⅧRA ,Cytokeratin ,IL - 6 ,IL - 8,Estradiol- 1 7β,Tstosterone和ICAM - 1 ;多克隆抗体阳检率明显高于单克隆抗体 ;其中细胞外基质成分和分子量较小的细胞因子 ,以及结构或功能原始的蛋白分子在猪与人皮肤有较好的同源性 ,而进化较大的蛋白分子 (如细胞因子或激素的受体和淋巴细胞CD分子等 )则多为阴性 ,显示抗体 -抗原结合反应的特异性及其种族差异。结论 :猪与人皮肤组织抗原之间存在很大的差异 ,猪血管内皮细胞表达人ICAM - 1 ,提示二者粘附分子可能存在物种间的交叉 ,可能与异种皮肤移植难以存活有关。本研究为异种脱细胞真皮基质的临床应用提供了有用的资料。
- 姜笃银张红周爱珍陈璧
- 关键词：免疫组织化学抗原人皮肤组织多克隆抗体
