国家自然科学基金(81171913)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：南京师范大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- MicroRNA-140在乳腺癌细胞中对Mrf2及其下游抗氧化基因的表达调控被引量：3
- 2013年
- 目的本研究旨在揭示microRNA在乳腺癌细胞中对哪表达的影响。方法利用生物信意学方法预测miR-140与Ⅳ啦的结合位点，然后采用双荧光报告系统检测miR-140对Nrf23’UTR及启动子上的8×ARE区域活性的影响；同时以实时荧光定量PCR法和Westernbloting法检测过表达miR．140和加药刺激前后细胞中Nrf2及其下游基因的mRNA和蛋白的表达变化；最后，四甲基偶氮唑蓝（MTY）法检测转染miR-140后，对于不同浓度H2O2处理的细胞，观察其生长能力及对氧化应激敏感性的变化。结果过表达miR．140能够显著抑制Nrf啦5’UTR区域的表达（P=0．007）和启动子上ARE区域的活性（P=0．01）；在过表达miR-140的对照组和加药组细胞中，Ⅳ以及其下游基因mRNA和蛋白水平均被明显抑制（均P〈0．05）；MTT实验结果显示转染miR-140细胞活力受到抑制，同时再使用不同浓度的H2O2刺激细胞后，细胞对氧化应激的敏感性增加（P〈0．01）。结论Ⅳ啦可能作为miR-140的一个新型靶基因，miR-140能够通过抑制Ⅳ犯，进而影响其下游一系列抗氧化基因的表达。
- 于影李豪杰温传俊
- 关键词：NRF2ARE细胞生长
- 茎-环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计被引量：6
- 2012年
- 本研究旨在通过茎-环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-421,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎-环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎-环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.
- 赵丽杨洋温传俊
- 关键词：引物设计
