国家自然科学基金(21106068)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 相关领域：轻工技术与工程生物学更多>>
- 生物法合成尿苷二磷酸葡萄糖的研究进展被引量：2
- 2012年
- 尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)是一种重要的糖类物质合成前体。生物法合成具有低成本、无污染和高立体选择性等传统化学法不具备的优势。利用纯酶催化的生物法以基于Leloir途径改进的一锅法、蔗糖合酶催化的两步法以及糖合成反应可逆催化等产UDPG,实现了UDPG的高产。全细胞催化法利用稳定的胞内酶系产UDPG,胞内生成的UDPG作为底物直接参与产物的催化合成,可行性高且成本更低。综述了酶法和全细胞催化法合成UDPG这两种最主要生物法的研究进展。
- 陈圣李艳刘欢严明许琳
- 关键词：生物法酶法全细胞催化
- 酿酒酵母组成型表达甜叶菊糖基转移酶UGT76G1及相关性质研究
- 2015年
- 本研究将酿酒酵母穿梭质粒p ESC-Leu的诱导型启动子GAL1和GAL10分别替换为PGK1和TEF1启动子,构建了组成型双启动子表达载体p ESCD,再将甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的编码基因亚克隆到p ESCD的Sal I和Xho I酶切位点之间,构建了组成型表达UGT76G1的重组质粒p ESCD-UGT。将p ESCD-UGT转化到酿酒酵母YPH499中进行表达,结果确定该重组酵母在SD-L液体培养基培养24h达到稳定期,菌体培养8h蛋白表达量高,选用1%的甲苯作为重组菌全细胞催化的通透剂时,催化15h产生288mg/L的莱鲍迪甙A,其产量是对照组的5倍。
- 王钰陈量量杜婷李艳严明郝宁许琳
- 关键词：酿酒酵母组成型启动子全细胞催化莱鲍迪甙A
- 甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的克隆表达及其性质研究被引量：5
- 2012年
- 目的:利用甜叶菊糖基转移酶UGT76G1特异性催化甜菊糖中含量高并且具有较强后苦味的甜菊甙生成高甜度的莱鲍迪甙A。方法:将合成的UGT76G1编码基因插入pYES2载体的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,成功构建了pYES2-UGT重组质粒。重组质粒导入表达宿主酿酒酵母YPH499中,利用2%半乳糖对重组菌进行诱导表达。结果:确定了最佳诱导时机为菌体培养后48h,诱导表达时间为12h。并对重组酶粗酶液性质进行了初步研究,确定其最适反应pH为8.0,最适反应温度为40℃,最佳反应时间为36h。结论:为建立经济高效的生物催化法对甜菊糖口味改质奠定了基础。
- 刘欢李艳严明陈圣郝宁许琳
- 关键词：甜叶菊莱鲍迪甙A
- 重组酿酒酵母全细胞催化合成莱鲍迪苷A被引量：5
- 2012年
- 用经密码子优化后合成的甜叶菊UDP糖基转移酶UGT76G1编码基因构建了表达该酶的重组酿酒酵母YPH499(pYES2-UGT)。建立了通过柠檬酸钠调节酿酒酵母细胞内由葡萄糖到尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)的代谢通量,用于催化甜菊苷合成莱鲍迪苷A的全细胞催化方法。优化后的催化体系为:甜菊苷1 g/L,葡萄糖20g/L,普郎尼克F68 10 g/L,MgCl2 6 g/L,柠檬酸钠15 g/L,pH 7.2,细胞密度200 g湿细胞/L反应液,在37℃下经72 h后转化生成莱鲍迪苷A 267.89 mg/L。
- 刘欢李艳严明陈圣郝宁许琳
- 拟南芥蔗糖合酶基因合成、重组表达及其在酶催化合成莱鲍迪甙A中的初步应用
- 2015年
- 本研究采用两步PCR的方法,合成拟南芥蔗糖合酶At SUS1的编码基因,并将其亚克隆到携带糖基转移酶UGT76G1基因的表达质粒p ET28a-UGT上,构建了双酶共表达质粒p EUGT-SUS。将质粒p EUGT-SUS转化到大肠杆菌Rossetta(DE3)中,在自诱导培养基中培养12 h,收集细胞超声破碎取其上清液为粗酶液用于催化甜菊甙合成莱鲍迪甙A的反应,结果确定重组酶At SUS1获得了活性表达,在双酶反应体系中,蔗糖和UDP在At SUS1作用下生成UDP-葡萄糖,供给UGT76G1所催化的糖基转移反应。考察了UDP初始浓度、反应pH、温度及反应时间对酶催化RA甙合成的影响。当UDP初始浓度为0.01 mmol/L,pH7.2和35℃反应条件下,反应12 h,10 g/L甜菊甙转化为莱鲍迪甙A的收率最高可达56.2%。为建立高效、经济的合成莱鲍迪甙A的酶催化工艺奠定了基础。
- 杜婷王钰陈量量成采虹李艳陈可泉
- 关键词：基因合成酶催化
