国家自然科学基金(30070542) 作品数:16 被引量:30 H指数:4 相关作者: 钱爱东 赵云蛟 郭利 黄莹 李影 更多>> 相关机构: 吉林农业大学 桦皮场镇畜牧兽医工作站 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 博士科研启动基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 更多>>
几种PCR方法在狂犬病毒基因测序中的应用 被引量:8 2006年 目的本研究在狂犬病毒全基因测序中应用了RT-PCR法、递减PCR法、嵌套PCR方法及3’-Full RACE等方法,有效的解决了狂犬病毒在体外扩增时遇到的困难。成功地获得了狂犬病毒野毒株BRV的全基因的cDNA,为实现基因测序及下一步研究工作奠定了理论技术基础。 郭利 赵云蛟 李泽涛 钱爱东关键词:狂犬病毒 PCR 基因测序 狂犬病病毒野毒株DRV磷蛋白基因的克隆及序列分析 2006年 通过对狂犬病病毒鹿源(DRV)野毒株总RNA的提取,用RT-PCR方法扩增磷蛋白(NS)基因并与T载体连接、克隆,将其转化到大肠杆菌JM109细胞中,测定NS蛋白基因的序列,与其它已经发表的国际标准株、疫苗株等进行比较,分析其氨基酸的同源性,构建系统进化树,为狂犬病病毒野毒株全基因序列的测定奠定基础。 黄莹 赵云蛟 钱爱东关键词:狂犬病病毒 反转录 聚合酶链式反应 测序 吉林鹿源狂犬病病毒野毒株磷蛋白基因的测序及分析比较 被引量:2 2007年 通过对狂犬病病毒鹿源野毒株(DRV)总RNA的提取,用RT-PCR方法扩增磷(N S)蛋白基因并与T载体连接、克隆,将其转化到大肠杆菌JM109细胞中,测定N S蛋白基因的序列,与其他已经发表的国际标准株、疫苗株等进行比较,分析其氨基酸的同源性和N S蛋白的分子生物学功能,为狂犬病病毒野毒株全基因序列的测定奠定基础。 黄莹 赵云蛟 钱爱东关键词:狂犬病病毒 反转录 PCR 测序 3′-RACE技术在狂犬病病毒基因末端体外扩增中的优化 2008年 钱爱东 郭利 赵云蛟关键词:病毒基因组 狂犬病病毒 体外扩增 RACE技术 分子流行病学 狂犬病病毒分子流行病学研究进展 被引量:2 2004年 介绍了狂犬病病毒的流行特点、基因型和检测方法 ,综述了狂犬病病毒核蛋白和糖蛋白基因的研究进展 ,并简要概述了我国学者对狂犬病病毒N基因和G基因的序列分析比较结果 ,表明我国狂犬病病毒的街毒存在着地域差异。 赵云蛟 钱爱东 李公美 姚纪元关键词:狂犬病病毒 分子流行病学 基因 2株狂犬病街毒株全基因组测序及分子进化研究 被引量:2 2008年 利用RT-PCR方法,对梅花鹿源(DRV)和鼠源(MRV)2个狂犬病毒街毒株进行全基因组测序,获得2个毒株全基因组序列(GenBank登录号分别为DQ875051和DQ875050)。DRV和MRV毒株全基因组分别与具有代表性的毒株全基因组进行N、P、M、G、L基因的核苷酸和氨基酸同源性比较。不同毒株的全基因组构建的分子系统进化树表明,DRV和MRV分属2个进化支。DRV与Ni-CE、RC-HL和SRV9的亲缘关系最近;MRV与HEP-Flury的亲缘关系最近,并与HHV-RAB-H街毒株同属一个进化支。 钱爱东 赵云蛟关键词:全基因组 进化 同源性 狂犬病鼠源野毒M株核蛋白基因的克隆及序列分析 被引量:1 2006年 从感染狂犬病的鼠脑中快速提取细胞总RNA,用RT-PCR方法得到编码核蛋白完整结构基因的cDNA,进一步将此基因克隆入pGEM-T中,进行核苷酸序列的测定,并推导出氨基酸序列,将这一序列与国内外已发表的9株狂犬病病毒的NP全基因进行比较分析。结果表明狂犬病鼠源野毒M株与上述9株的同源性在71.0%~99.8%之间,氨基酸同源性在77.6%~99.6%之间,M株与CVS株无论核苷酸序列还是氨基酸序列同源性都最高,分别为99.8%和99.6%,而与CTN珠的核苷酸序列同源性较低,与Mokola株的核苷酸序列以及氨基酸序列同源性都最低,分别为71.0%和77.6%。本研究为进行狂犬病病毒的分子流行病学调查和研制狂犬病基因工程苗提供了理论依据。 李公美 赵云蛟 钱爱东关键词:狂犬病病毒 核蛋白基因 狂犬病病毒糖蛋白、核蛋白融合基因原核质粒的构建与表达 被引量:1 2006年 试验将编码狂犬病病毒糖蛋白、核蛋白融合基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建狂犬病病毒原核表达质粒。将该质粒转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达出约2.09×104D的狂犬病病毒糖/核融合基因编码的蛋白质。Western-blotting检测结果表明,该融合蛋白质具有免疫原性。 姜海龙 钱爱东关键词:狂犬病病毒 核蛋白 原核表达质粒 共表达 狂犬病病毒鼠源野毒株糖蛋白基因序列测定及分析 被引量:2 2004年 对从我国河南某地野鼠体内分离的狂犬病病毒野毒株MRV糖蛋白基因进行反转录-PCR,分别得到了1067 bp和938 bp 2个cDNA片段,对PCR所得片段进行序列测定并推导出相应的氨基酸序列。采用计算机软件分析了该毒株G基因的4个功能区中核苷酸和氨基酸的变异特点,在3个抗原位点上,与同一基因型中其他毒株相比,只有个别位点的变异。比较了该毒株和其他所选比较毒株之间的变异特点,G基因抗原区与CVS株的同源性可以达到98%,与ERA株的同源性达90%。讨论了G基因中与毒性相关的核苷酸和氨基酸的特点。 赵云蛟 钱爱东 李影 姚纪元关键词:狂犬病病毒 糖蛋白基因 狂犬病病毒全基因组进化研究进展 被引量:5 2009年 狂犬病病毒基因进化研究能够揭示病毒流行病学特点和规律,为有效防控狂犬病提供科学依据。狂犬病病毒基因组5个基因中,目前对N基因和G基因研究比较多,N基因序列分析可用于基因分型,G基因序列分析可用于病毒免疫原性、毒力、宿主转换等相关研究。多株狂犬病病毒已完成全基因组测序,但全基因组水平的进化研究还很不足,因为基因组中的各个基因之间的相互作用,各个基因面临的选择压力不同,单个基因的进化不一定能代表病毒的进化,所以需要不断探索合适的方法对狂犬病病毒全基因组进行进化研究。 赵云蛟 钱爱东关键词:狂犬病病毒 全基因组 进化