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以响应面法优化短小芽孢杆菌木聚糖酶产酶条件被引量：3: 2012年; 应用响应面分析对短小芽孢杆菌木聚糖酶的产酶条件进行优化,得到碳源、氮源及培养时间3种因素交互影响的回归方程.从该方程得到理论最佳产酶条件:培养时间为24h,麸皮、玉米粉、蛋白胨和NH4Cl的质量浓度分别为10,5,5,10g.L-1.在优化条件下,实际最高产酶量为12.1mkat.L-1,与理论最高产酶量12.0mkat.L-1接近,比初始酶活提高12.2倍.; 葛慧华林锦霞张光亚; 关键词：木聚糖酶短小芽孢杆菌交互影响

应用响应面法优化木聚糖酶的双水相萃取条件被引量：1: 2010年; 采用响应面分析法优化短小芽孢杆菌木聚糖酶在PEG2000/K2HPO4双水相体系中的萃取条件。确定最佳萃取条件为NaCl 6%、PEG 2000 18%、K2HPO4 10%。在最佳萃取条件下得木聚糖酶分配系数为3.38,蛋白分配系数为0.13,纯化倍数为7.93,回收率为84.24%。考察了萃取酶液的部分酶学性质,其最适温度为50℃,最适pH为7.0。; 葛慧华林锦霞张光亚; 关键词：双水相萃取响应面法木聚糖酶

ELPs-PDOR融合基因表达条件的优化: 2012年; 利用均匀设计法和二次多项式逐步回归,对重组大肠杆菌生产类弹性蛋白多肽-1,3-丙二醇氧化还原酶(ELPs-PDOR)重组蛋白的培养条件进行优化.结果表明:在装液量为30%,诱导剂浓度为6.3mmol·L-1,诱导温度为30℃,诱导时间为2h的优化条件下进行培养,重组菌融合蛋白表达量是原始表达量的3.3倍,酶活力提高到10.84mkat·L-1,提高2.1倍.; 王文研张光亚; 关键词：1,3-丙二醇氧化还原酶重组蛋白均匀设计

类弹性蛋白多肽的从头设计、非色谱纯化及盐效应被引量：19: 2011年; 旨在克隆、表达与纯化类弹性蛋白多肽,并测定类弹性蛋白的相变温度对不同的盐敏感程度。从头设计了类弹性蛋白多肽的序列并人工合成其编码基因片段,克隆至改造后的表达载体pET-22b(+)中,构建重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达,采用可逆相变循环经高速离心对其进行纯化,并考察了盐类型及浓度对类弹性蛋白相变温度的影响。结果表明:0.4 mmol/L的Na2CO3能使25μmol/L类弹性蛋白多肽[KV8F-20]相变温度降低至19℃,此类弹性蛋白多肽序列有望开发成一新型纯化标签,为今后重组蛋白的非色谱分离纯化奠定基础。; 黄凯宗李晶晶李巍葛慧华王文研张光亚; 关键词：相变温度

类弹性蛋白多肽及其在生物医学材料的应用被引量：7: 2010年; 类弹性蛋白多肽是一种人造基因工程蛋白质聚合物,其结构主要由五肽重复串连序列单元(GVGXP)的这一肽段单元重复组成。由于具有可逆相变特征,并可进行高通量生产,加之良好的生物相容性及生物可降解性,使其在新型生物医学材料方面展示了广阔的应用前景。概括了类弹性蛋白多肽的相变机理、合成方法及在生物医学材料上的应用,重点阐述了类弹性蛋白多肽在组织工程、靶向肿瘤、构造药物载体微粒的应用。; 黄凯宗王文研张光亚; 关键词：相变温度药物载体生物医学材料

使用伪氨基酸组成和BP神经网络预测类弹性蛋白多肽的相变温度: 2011年; 根据获得的16条ELP序列及相变温度的数据,利用伪氨基酸组成方法提取其序列特征值.将伪氨基酸组成中的相关系数部分作为类弹性蛋白的特征向量,从类弹性蛋白序列出发,利用最小中位方差回归,找出与其序列相关系数的最佳阶数.运用均匀设计法,分别对支持向量机与BP神经网络参数进行优化.结果表明:BP神经网络获得的预测模型最佳,相变温度绝对误差为0.39℃,均方根误差为0.89℃.; 黄凯宗张光亚; 关键词：相变温度支持向量机 BP神经网络

嗜盐蛋白高级结构对其稳定性的影响: 2012年; 选择30对具有晶体结构的嗜盐和非嗜盐同源蛋白,通过计算氨基酸所处的结构状态,找出二者在统计学上具有显著差异的氨基酸.研究结果表明:在总的氨基酸组成上,嗜盐蛋白中天冬氨酸含量更多,而苯丙氨酸和赖氨酸含量显著较少.在不同二级结构区域,β-折叠中两种蛋白氨基酸组成差异最大;而在不同溶剂可及表面,两种蛋白在分别表面氨基酸组成差异最大,嗜盐蛋白表面酸性氨基酸显著较多,而碱性氨基酸则较少;48种高级结构结构参数中有4种存在显著差异,这4种结构参数都与可及性表面积有关.; 张光亚

二氢叶酸还原酶在盐溶液中的分子动力学模拟: 2012年; 为了研究嗜盐酶如何在高盐环境下维持稳定性与活性,本文以沃尔卡尼极嗜盐菌及大肠杆菌的二氢叶酸还原酶(DHFR)为模型,将二者分别置于5种不同盐浓度的水溶液中进行分子动力学模拟。经9ns动力学模拟,得到了二者在不同浓度盐溶液中的运动轨迹,通过对运动轨迹的分析,获取了二者在不同盐浓度下的动力学特性。结果发现嗜盐古生菌的二氢叶酸还原酶自身所形成盐桥及与溶剂所形成的氢键均比大肠杆菌的二氢叶酸还原酶多,而溶剂可及性表面则要小,二者差异均达极显著水平。同时还分析了这两种分子及其氨基酸残基的柔性等。; 王四华付晓平王文研张光亚; 关键词：分子动力学模拟二氢叶酸还原酶氢键

以序列特征值预测酶和非酶蛋白及内含肽: 2010年; 利用生物信息学快速准确鉴别酶、非酶蛋白及内含肽能极大提高实验效率,而测序数量的指数型增长使酶、非酶蛋白及内含肽的自动分类尤显重要。本文获取了同一性小于25%的序列共计3853条,采用Z标度的伪氨基酸组成和氨基酸组成分布提取序列特征值识别酶、非酶蛋白及内含肽。结果表明,该特征值提取方法经参数优化后,即当λ=5,w=0.15时,以支持向量机为分类器,其10倍交叉验证的精度可达81.3%,ROC曲线下面积为0.83;其精度高于其它方法0.5%到12.9%不等;独立样本测试的预测精度可达71.2%,ROC曲线下面积为0.782,其精度高于其它方法0.4%到6.4%不等,效果均优于其它常见的序列特征值方法。本文结果说明从序列出发判断其归属是可行的,3种不同功能的分子在序列特征上存在一定的差异,所建立的Z标度的伪氨基酸组成和氨基酸组成分布法可用于其它类似的生物信息学问题。建立了从序列出发预测酶、非酶蛋白及内含肽的新方法。; 葛慧华罗靖张光亚; 关键词：内含肽

乙醇脱氢酶底物分子对接的优化被引量：2: 2013年; 通过分子对接的方法,探寻乙醇脱氢酶催化底物脱氢时酶与底物分子的特定位点间存在作用力及其与底物亲和力之间的相关性.研究结果表明:影响乙醇脱氢酶催化底物与酶相互作用的主要因素并非是分子量或者分子间氢键的键能,而是分子间总的作用力及分子间形成氢键的个数,其相关系数可达0.63;辅酶及金属离子对酶与底物结合的抑制常数及结合位点具有十分显著的影响.; 黄可君张光亚; 关键词：乙醇脱氢酶分子对接分子间作用力

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福建省自然科学基金(2009J01030)