国家自然科学基金(21302069)
- 作品数：9 被引量：39H指数：3
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- 相关机构：江南大学更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- 基于Staphylococcus carnosus来源的D-果糖-1,6-二磷酸醛缩酶在大肠杆菌合成稀有酮糖的研究
- 2015年
- 将Staphylococcus carnosus来源的Fru AS.car醛缩酶基因fda和大肠杆菌来源的Yqa B磷酸酶基因yqa B分别插入到表达质粒CDFDuet-1得到重组质粒CDF-fda-yqa B,并转化该重组质粒到大肠杆菌BL21Star(DE3)。以同时过量表达Fru AS.car醛缩酶和Yqa B磷酸酶的大肠杆菌BL21Star(DE3)/CDFDuet-1-fda-yqa B作为发酵菌株,以葡萄糖为碳源通过糖酵解途径在胞内生成供体磷酸二羟基丙酮,分别在培养基中添加丙醛、丁醛为受体,进行相应稀有酮糖的合成,从而成功地将羟醛缩合反应在大肠杆菌中实现,酮糖产物用HPLC检测并进行纯化和1H NMR鉴定。最后,以13C同位素全标记的葡萄糖为碳源,添加丙醛为受体进行了同位素标记实验,证实了产物从DHAP而来的3个碳原子最终来自葡萄糖。
- 李子杰贺贝贝高晓冬
- 关键词：醛缩酶磷酸酶大肠杆菌
- 利用Heracles Ⅱ超快速气相电子鼻对不同品牌UHT全脂牛奶的快速鉴别研究被引量：6
- 2019年
- 本研究利用Heracles Ⅱ超快速气相电子鼻对5种不同品牌(德运、蒙牛、光明、卫岗、伊利)UHT全脂牛奶的风味成分进行主成分分析、样品间区别指数分析和主成分载荷图分析,同时结合Kovat保留指数和Aro Chem Base数据库对特异性化合物进行定性分析。结果表明这5种样品之间均存在着较为明显的差异,样品3和样品5整体风味成分较为相近,然而样品2和样品4则与其他UHT奶的整体风味成分差异较大。其中正丙硫醇和2-甲基-3-呋喃硫醇是1号样品的特定风味化合物,丙酸是2号样品的特定风味化合物,庚烷、己-2-酮和3-甲基呋喃是5号样品的特定风味化合物。
- 高雅慧邱士鸿朱逸浩徐良董亚欣李子杰
- 关键词：全脂牛奶电子鼻风味成分
- 基于RhaD醛缩酶的“一锅四酶法”合成D-山梨糖和D-阿洛酮糖被引量：2
- 2013年
- 利用L-1-磷酸鼠李树胶糖醛缩酶(RhaD)以较低成本同时合成稀有糖D-山梨糖和D-阿洛酮糖。为避免直接使用价格昂贵且不稳定的底物磷酸二羟基丙酮(DHAP),以便宜的底物DL-3-磷酸甘油作为前体,采用基于RhaD和磷酸酶(AP或YqaB)的"一锅四酶法"对D-山梨糖和D-阿洛酮糖的合成进行了优化。产物D-山梨糖和D-阿洛酮糖用TLC、HPLC进行检测,并分别采用硅胶、P-2凝胶、Ca2+离子交换树脂对产物进行纯化以及1H NMR对产物进行鉴定。结果表明"一锅四酶法"以及分离纯化方法可高效地应用于D-山梨糖和D-阿洛酮糖的实际生产。该方法的建立将为其他稀有糖及其衍生物的合成提供理论依据。
- 高雅慧金则成钱超李子杰中西秀树高晓冬
- 关键词：醛缩酶
- 甘油激酶的表达纯化及在酮糖合成中的应用
- 2018年
- 研究了大肠杆菌MG1655来源的甘油激酶(GK)的表达及其在酮糖合成中的应用。本研究从大肠杆菌MG1655扩增了甘油激酶的基因片段glpK,连接到表达载体pET-28a上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达,利用Ni^(2+)亲和层析柱纯化目的蛋白。利用该甘油激酶可以催化成本较低的底物甘油生成L-3-磷酸甘油,再经过磷酸甘油氧化酶(GPO)的催化生成磷酸二羟基丙酮(DHAP),生成的DHAP可以在不同的DHAP依赖性醛缩酶的催化下与受体D-甘油醛合成酮糖-1-磷酸,最终用酸性磷酸酶脱掉磷酸生成一系列酮糖。结果表明,该酶成功地用于"一釜多酶法"合成体系中,以便宜的底物甘油为前体,合成出包括稀有糖在内的一系列酮糖,生成的产物、产率及比例用TLC、HPLC进行检测。该方法的建立将为其他稀有糖及其衍生物的合成提供理论依据。
- 吴晓茹李子杰中西秀树高晓冬
- 关键词：醛缩酶酮糖
- 木糖异构酶酿酒酵母孢子“微胶囊”的构建及酶学性质分析被引量：2
- 2015年
- 将来源于嗜热细菌Thermus thermophilus HB8的木糖异构酶(XI)基因xyl A与SPR1信号肽序列(ss)融合后连接到p RS424-TEFpr表达载体上,将重组质粒p RS424-TEFpr-ss-xyl A转化酿酒酵母AN120野生型菌株、osw2Δ缺陷型菌株以及dit1Δ缺陷型菌株并进行产孢。通过荧光定位、蛋白免疫印迹分析以及酶活测定,表明酿酒酵母孢子"微胶囊"固定化酶系统构建成功。由于该固定化酶的最佳反应温度为85℃,避免了酿酒酵母孢子在D-葡萄糖为底物条件下萌发的弊端。同时,根据蛋白免疫印迹分析和重复利用性结果,表明二酪氨酸层的存在对于酶的包埋,对高温的耐受性都表现出了较好的特性。此外对野生型和osw2Δ孢子固定的XI的酶学性质进行了研究,相对于游离酶,孢子固定化酶更加稳定。在p H为6的酸性条件或p H为9的碱性条件下,固定化酶相对酶活能达到60%以上,同时在温度95℃时,固定化的酶相对酶活也能达到60%以上。与野生型孢子相比,osw2Δ孢子展现出了潜在的优势,既可以有效阻止酶的释放,又提高了底物分子的通透性。
- 李毅李子杰中西秀树高晓冬
- 关键词：酿酒酵母孢子木糖异构酶酶固定化
- 母乳挥发性成分固相微萃取-气质联用检测条件的优化及测定被引量：5
- 2018年
- 采用固相微萃取-气质联用分析母乳挥发性成分,并对其检测条件进行优化。通过单因素实验,最终确定了母乳挥发性成分较优的检测条件为使用 DVB/PDMS 萃取头、加入1.5 g NaCl的5 mL样品在60℃萃取30 min、解析5min。在此检测条件下分析母乳样品,得到34种挥发性成分,其中烯烃类14种、酸类5种、酯类8种、芳香烃类4种、酮类3种,将为改善配方奶的风味提供一定的理论依据。
- 高雅慧李子杰
- 关键词：固相微萃取气质联用母乳挥发性成分
- L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶立体选择性的半理性改造合成D-阿洛酮糖被引量：2
- 2018年
- 稀有糖D-阿洛酮糖在食品、医药、保健等领域显示了巨大的应用潜能,然而以较高的收率大量生产D-阿洛酮糖依然面临着挑战。前期研究表明,属于磷酸二羟基丙酮(dihydroxyacetone phosphate,DHAP)依赖型醛缩酶家族的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶(Rha D)在以D-甘油醛为醛受体时,失去了对该醛受体的立体选择性,生成D-阿洛酮糖和D-山梨糖两种稀有糖,两者比例接近1∶1。为了对Rha D醛缩酶的立体选择性进行优化使其专一性地生产D-阿洛酮糖,对Rha D醛缩酶的152位酪氨酸进行了19种其他氨基酸的定点饱和突变,发现Rha DY152A突变体倾向于生成D-阿洛酮糖,D-阿洛酮糖和D-山梨糖的比例从最初的1∶1显著提高到8∶1,为下一步对Rha D醛缩酶分子改造进而定向合成单一产物D-阿洛酮糖提供理论依据。
- 汪马燕李子杰高晓冬
- 关键词：醛缩酶
- 基于Heracles Ⅱ超快速气相电子鼻对不同加工方式牛奶的快速鉴别被引量：23
- 2019年
- 利用HeraclesⅡ超快速气相电子鼻对不同加工方式牛奶中的挥发性有机化合物进行检测。采用主成分分析、样品间区别指数分析和主成分载荷图分析对不同加工方式牛奶挥发性物质的差异性进行比较,结果表明奶粉的整体风味与其他三种不同加工方式样品差异较大,而超巴氏奶与超高温灭菌奶差异较小。结合保留指数和AroChemBase数据库对特异性化合物进行定性及含量分析,结果显示随着加工温度升高,丙酮、2-丁醇、辛二烯、己酸和甲硫醚的含量也随之增多。同时,甲基环己烷羧酸、丙酮、2-丁醇和水芹烯在奶粉的加工工艺中出现了大量的损失。由此得出结论,HeraclesⅡ超快速气相电子鼻能够实现对不同加工方式牛奶的快速鉴别。
- 高雅慧徐良董亚欣李子杰
- 关键词：电子鼻牛奶挥发性成分
- 酿酒酵母孢子表面展示系统的构建及应用被引量：1
- 2017年
- 旨在建立1种酿酒酵母孢子表面展示系统,并将其应用于稀有糖合成。表面展示系统是运用微生物自身功能把外源蛋白或多肽展示在细胞表面,文中用磷酸甘油氧化酶(GPO)来验证酿酒酵母孢子表面展示系统的可行性。将编码肺炎链球菌来源的GPO的基因glpo与信号肽序列(ss)融合后连接到载体p RS424-TEFpr上,将重组质粒p RS424-TEFpr-ss-glpo转化至酿酒酵母野生型及缺陷型菌株中并进行产孢,通过荧光观察、western blot分析以及酶活测定,表明酿酒酵母缺陷型孢子可以实现蛋白的表面展示。通过对GPO孢子表征,表明GPO孢子在pH为7.0、温度为30℃时活性最高,该孢子作为催化剂可以重复使用,当使用第3次时,活性可达最大活性的40%。最后将GPO孢子应用于"一锅四酶法"进行稀有糖L-果糖的合成,转化率为12%。
- 乔颍鑫李子杰中西秀树高晓冬
- 关键词：磷酸甘油氧化酶酿酒酵母
